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国家自然科学基金(30271160)

作品数:7 被引量:20H指数:2
相关作者:孙秀珍刘昀冯向莉李维周玎更多>>
相关机构:西安交通大学医学院第二附属医院更多>>
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文献类型

  • 7篇中文期刊文章

领域

  • 7篇医药卫生

主题

  • 5篇免疫
  • 4篇变应原
  • 3篇克隆
  • 2篇多克隆
  • 2篇多克隆抗体
  • 2篇特性分析
  • 2篇免疫特性
  • 2篇抗体
  • 1篇蛋白
  • 1篇亚群
  • 1篇特异
  • 1篇特异性
  • 1篇特异性免疫
  • 1篇特异性免疫治...
  • 1篇球蛋白
  • 1篇主要变应原
  • 1篇细胞
  • 1篇细胞亚群
  • 1篇哮喘
  • 1篇哮喘患者

机构

  • 6篇西安交通大学...

作者

  • 6篇孙秀珍
  • 5篇刘昀
  • 3篇冯向莉
  • 3篇周玎
  • 3篇李维
  • 2篇徐晶
  • 2篇米烈汉
  • 1篇张王刚
  • 1篇李唯
  • 1篇李雅莉
  • 1篇张洁

传媒

  • 2篇西安交通大学...
  • 2篇南方医科大学...
  • 1篇国际呼吸杂志
  • 1篇中华哮喘杂志...
  • 1篇Journa...

年份

  • 3篇2008
  • 2篇2007
  • 1篇2005
  • 1篇2003
7 条 记 录,以下是 1-7
排序方式:
霜天蛾主要变应原的克隆、筛选及序列分析
2007年
目的对霜天蛾cDNA表达文库进行免疫学筛选,分离和鉴定霜天蛾主要变应原阳性克隆,并测定和分析阳性克隆变应原cDNA序列,为制备重组霜天蛾昆虫变应原疫苗和疫苗的标准化奠定基础。方法构建λZAPⅡ噬菌体霜天蛾表达文库,应用霜天蛾免疫多克隆兔血清和霜天蛾特异性过敏患者血清反复筛选霜天蛾cDNA表达文库,所得的阳性克隆经转化克隆至pBluescript质粒,PCR扩增cDNA片段,并对片段进行序列测定、分析。结果对5×104的噬菌体斑进行免疫学筛选,成功获得5个阳性克隆。经PCR扩增并测序分析表明,5个阳性克隆基因与GenBank中已知基因无明显同源性。结论筛选出5个霜天蛾主要变应原的新基因,为霜天蛾过敏患者的特异性免疫治疗及进一步的实验研究奠定基础。
刘昀孙秀珍张王刚李唯冯向莉徐晶
关键词:变应原基因克隆免疫学筛选
霜天蛾昆虫变应原多克隆抗体的制备及免疫特性分析
2008年
目的制备兔抗霜天蛾变应原多克隆抗体,分析其与特异性过敏患者血清抗体成分的异同,为免疫筛选cDNA文库,制备基因重组霜天蛾变应原奠定基础。方法应用霜天蛾变应原提取液免疫家兔获得霜天蛾变应原多克隆抗体,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定混合免疫兔血清抗体效价;应用免疫印迹的方法对比分析免疫兔血清与特异性过敏患者血清抗体成分的异同。结果混合免疫兔血清效价经ELISA检测,效价>1:10000,免疫印迹检测兔抗血清免疫球蛋白G(IgG)可以特异性识别霜天蛾10种蛋白组分,相对分子质量分别为100000、92000、79000、74000、66000、49000、43000、36000、25000和16000;患者血清IgG可以识别6种蛋白组分,相对分子质量分别为79000、74000、66000、49000、36000和25000。结论制备出的兔抗血清与特异性霜天蛾过敏患者血清特异性识别霜天蛾变应原的结果接近,比患者可以识别更多的蛋白条带,可以应用免疫兔血清作为筛选霜天蛾cDNA文库的探针及重组霜天蛾变应原表达蛋白的鉴定分析。
刘昀孙秀珍周玎李维米烈汉
关键词:变应原多克隆抗体免疫特性
Cloning and screening of cDNA of Psilgramma menephorn allergen
2007年
Objective To construct a cDNA expression library of Psilgramma menephorn to screen its major allergen so as to provide the basis for producing recombinant allergen vaccine of Psilgramma menephorn. Methods Total RNA was extracted from the whole body of Psilgramma menephorn with Trizol and mRNA was purified with Oligo (dT) Spin-Column. And dscDNA was synthesized through reverse transcription. After blunting, the cDNA fragments were ligated with EcoRⅠ adapters. Then the cDNAs were digested by XhoⅠ, and the fragments less than 400 bp were removed by using GHROMA SPIN-400 column. The remaining fragments longer than 400 bp were ligated with Uni-ZAP XR vector. The recombinants were packaged in vitro and a small portion of the packaged phage was used to infect E.coli XL1-Blue MRF′ for titration. The recombinants were examined by color selection. The size of cDNA inserts and the diversity of library were analyzed by PCR. The library was screened using SPT positive sera from patients with Psilgramma menephorn allergy repeatedly. Results The cDNA expression library consisting of a 5×105 recombinant bacteriophages was constructed with the recombinant ratio of 67%. The average length of recombinant exogenous inserts was about 1.49 kb. Five positive cDNA clones were obtained. Conclusion The constructed cDNA expression library shows appropriate contents and size of cDNA fragments and the related genes of Psilgramma menephorn major allergens were harbored successfully, which lays the foundation for the positive clone identification and further analysis.
刘昀孙秀珍张王刚李维
关键词:CLONESCREENING
霜天蛾cDNA表达文库的构建和初步鉴定被引量:14
2005年
目的构建霜天蛾cDNA表达文库,为进一步筛选霜天蛾主要变应原、制备重组变应原奠定基础。方法利用Trizol法抽提霜天蛾RNA,经过Oligo(dT)纤维素柱纯化后得到mRNA,反转录合成dscDNA,连接EcoRⅠ接头,末端磷酸化,XhoⅠ消化,将双末端黏性化的双链dscDNA经过凝胶柱层析,收集大于400bp的cDNA片段,加工后与UniZAPXRVector连接,经过体外包装,感染宿主菌,构建cDNA文库,检测文库容量和重组效率,并采用PCR方法对插入的cDNA片段大小进行分析。结果成功构建了一个含有5×105重组子的霜天蛾表达文库,重组率为67%,平均插入片段长度约为1.49kb。结论所建文库容量及插入片段大小合适,适用于筛选目的cDNA克隆。
孙秀珍刘昀
关键词:CDNA表达文库
霜天蛾昆虫变应原多克隆抗体的制备及免疫特性分析
2008年
目的制备兔抗霜天蛾变应原多克隆抗体,分析其与特异性过敏患者血清抗体成分的异同,为免疫筛选CcDNA文库,制备基因重组霜天蛾变应原奠定基础。方法应用霜天蛾变应原提取液免疫家兔获得霜天蛾变应原多克隆抗体,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定混合免疫兔血清抗体效价;应用免疫印迹的方法对比分析免疫兔血清与特异性过敏患者血清抗体成分的异同。结果混合免疫兔血清效价经ELISA检测,效价〉1:10000,免疫印迹检测兔抗血清免疫球蛋白G(IgG)可以特异性识别霜天蛾10种蛋白组分,相对分子质量分别为100000、92000、79000、74000、66000、49000、43000、36000、25000和16000;患者血清IgG可以识别6种蛋白组分,相对分子质量分别为79000、74000、66000、49000、36000和25000。结论制备出的兔抗血清与特异性霜天蛾过敏患者血清特异性识别霜天蛾变应原的结果接近,比患者可以识别更多的蛋白条带,可以应用免疫兔血清作为筛选霜天蛾cDNA文库的探针及重组霜天蛾变应原表达蛋白的鉴定分析。
刘昀孙秀珍周玎李维米烈汉
关键词:变应原多克隆抗体免疫特性
霜天蛾过敏性哮喘患者特异性免疫治疗的效果评价被引量:6
2003年
目的 观察霜天蛾过敏性哮喘患者特异性免疫治疗 (SIT)的疗效。方法 对 6 4例确诊为霜天蛾过敏性哮喘(PAA)患者注射霜天蛾变应原浸液 ,观察临床疗效和SIT前后皮内试验风团直径、淋巴细胞亚群 (CD4、CD8、CD4/CD8)、免疫球蛋白 (IgG、IgA、IgE)、肺功能 (FEV1、PEFR)及支气管激发试验 (PD2 0 FEV1)的变化。结果 SIT总有效率为 76 .5 % (49/ 6 4 )。SIT后皮内试验风团直径缩小 ,CD8细胞增加 ,CD4/CD8比例下降 ,IgE降低 ,IgG和IgA增高 ,FEV1、PEFR、PD2 0 FEV1均增加 ,(P值均 <0 .0 1)。结论 SIT对过敏性哮喘有较好的临床疗效 ,能增强患者的细胞免疫和体液免疫功能 ,改善肺通气功能 。
李雅莉孙秀珍张洁冯向莉
关键词:过敏性哮喘特异性免疫治疗淋巴细胞亚群免疫球蛋白
霜天蛾昆虫变应原的变应原性及免疫原性分析被引量:1
2008年
目的分析霜天蛾主要变应原的变应原性和免疫原性,为进一步制备霜天蛾标准化变应原疫苗和基因工程重组霜天蛾昆虫变应原奠定基础。方法应用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳对霜天蛾变应原蛋白成分进行分离,对9例霜天蛾过敏患者血清分别进行IgE、IgG免疫印记分析,并对比分析IgE、IgG反应变应原成分。结果霜天蛾提取液经SDS-PAGE染色后显示出20余种蛋白质成分,相对分子质量12000-128000。免疫印迹分析结果显示具有变应原性的蛋白相对分子质量及反应率分别为:74000(88.9%),66000(22.2%),49000(22.2%),36000(77.8%),25000(33.3%),具有免疫原性的蛋白相对分子质量及反应率分别为:79000(33.3%),74000(66.7%),66000(22.2%),49000(22.2%),36000(44.4%),25000(55.6%)。结论霜天蛾变应原中具有较强变应原活性的蛋白质相对分子质量为74000和36000,具有较强免疫原活性的蛋白质相对分子质量为74000和25000的蛋白质,是霜天蛾过敏患者特异性过敏诊断和治疗的主要成分。
孙秀珍刘昀周玎李维冯向莉徐晶
关键词:变应原昆虫变应原性免疫原性
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