国家自然科学基金(81171799)
- 作品数：6 被引量：14H指数：3
- 相关作者：王月静张莉梅晰凡曾锦浩郭占鹏更多>>
- 相关机构：辽宁医学院辽宁医学院附属第一医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 锌对辣椒素致痛模型小鼠脊髓磷酸化ERK表达和热痛阈的影响被引量：3
- 2014年
- 目的研究锌对辣椒素致痛模型小鼠脊髓磷酸化(p)的细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulate kinase,ERK)表达和热痛阈的影响。方法 72只C57/BL6小鼠随机分为4组,采用足底注射辣椒素(0.5%,5μl)制备神经病理性疼痛(neuropathic pain,NPP)动物模型:对照组(Con)锌饲料30 mg/(kg·d)喂养2周后足底注射溶剂(吐温80、酒精和0.9%氯化钠注射液混合液);N-NPP组锌饲料30 mg/(kg·d)喂养2周后给予足底注射辣椒素,L-NPP组锌饲料0.85 mg/(kg·d)喂养2周后注射辣椒素,H-NPP组硫酸锌水溶液227 mg/(L·d)喂养2周后注射辣椒素。应用动物行为学检测、免疫组织化学、免疫印迹和图像分析技术检测注射后7 d锌对动物行为学以及脊髓pERK表达的影响。结果高锌喂养能显著降低脊髓pERK的表达,降低痛敏,使热痛阈增高(P<0.01);而低锌喂养能增加脊髓pERK的表达,增加痛敏,使热痛阈降低(P<0.01)。结论锌能抑制辣椒素致痛模型小鼠脊髓pERK的表达和热痛觉过敏。
- 王月静刘晓露李富兴韩言秀张莉
- 关键词：锌脊髓磷酸化
- 锌对神经病理性疼痛模型小鼠脊髓磷酸化cAMP反应元件结合蛋白表达的影响被引量：4
- 2013年
- 目的研究锌对神经病理性疼痛(neuropathic pain,NPP)模型小鼠脊髓磷酸化(phosphoryltion,p)的cAMP反应元件结合蛋白(camp response-element binding protein,CREB)表达的影响。方法 72只C57/BL6小鼠随机分为4组,正常喂养的NPP组锌饲料30 mg/(kg·d)喂养2周,低锌喂养的NPP组锌饲料0.85 mg/(kg·d)喂养2周,高锌喂养的NPP组用硫酸锌水溶液227 mg/(L·d)喂养2周。采用足底注射辣椒素(0.5%5μl)制备NPP模型:对照组锌饲料30 mg/(kg·d)喂养2周后足底注射溶剂。应用原子吸收光谱、免疫组织化学、免疫印迹和图像分析技术检测术后7 d锌对脊髓pCREB表达的影响。结果高锌喂养能显著增加血清和脊髓中锌的含量,脊髓pCREB表达下调(P<0.01);而低锌喂养加重血清和脊髓的缺锌状况,脊髓pCREB表达上调(P<0.01)。结论锌能抑制NPP模型小鼠脊髓pCREB的表达。
- 张莉王月静
- 关键词：锌神经病理性疼痛脊髓CAMP反应元件结合蛋白
- 大鼠ZnT1基因siRNA慢病毒载体构建及筛选被引量：1
- 2012年
- 目的:构建并筛选针对SD大鼠锌离子转运体1(ZnT1)的siRNA慢病毒载体。并检测其在大鼠神经元中的作用。方法:设计并合成针对ZnT1基因的3条(A,B,C)siRNA序列与1条阴性对照序列,将以上序列退火与pFU-GW-iRNA质粒相连接,通过测序鉴定后,分别与慢病毒包装质粒共感染293T细胞,检测收获病毒滴度后感染体外培养的SD大鼠脑皮层神经细胞,设置感染复数(MOI)分别为1,3,6,8,于转染后72 h计算转染效率。在最佳MOI值下,设置未经病毒感染组(CON组)、阴性对照病毒感染组(NC组)和慢病毒阳性干扰组(ZnT1-siR-NA-A组,ZnT1-siRNA-B组,ZnT1-siRNA-C组),72 h后利用Western blot技术检测ZnT1的表达情况,确定对ZnT1蛋白的最有效的干扰序列与抑制效率。结果:测序证实目的干扰序列已被准确克隆到pFU-GW-iRNA质粒,收获的慢病毒颗粒滴度为8×108TU/ml,其在MOI=6时对神经细胞的转染效率最高(93%),并保持神经细胞良好的生存状态。转染后ZnT1的表达被不同程度的抑制,A,B,C三种干扰序列对ZnT1的抑制率分别为47.74%±1.40%,81.19%±1.36%,94.10%±2.41%。结论:成功构建了ZnT1-siRNA慢病毒载体,其在MOI=6时对神经细胞具有最佳的转染效率,并有效沉默神经细胞中ZnT1蛋白的表达。
- 房师强梅晰凡袁亚江郭占鹏郭跃曾锦浩王岩松尹海楠
- 关键词：SIRNA慢病毒载体GFP
- 大鼠ZnT1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的利用GatewayTM技术构建含大鼠锌转运体1(ZnT1)基因重组腺病毒载体,鉴定外源基因在真核细胞中的良好表达。方法采用化学合成的方法,合成ZnT1/RES/EGFP目的基因片段,通过PCR方法在基因片段两端加入attB重组位点,与含有attP重组位点的pDonr221供体载体BP反应形成入门载体pDown-ZnT1。将含有attL重组位点的入门载体与含有attR位点目的载体Ad/CMV/V5-DEST通过LR反应形成腺病毒表达载体pAd-ZnT1。酶切和测序鉴定后,由PacⅠ酶切线性化转染HEK293A细胞包装,提取病毒颗粒。采用终点稀释法测定重组腺病毒滴度;Western blotting技术分析目的蛋白表达情况。结果目的基因按正确的方向重组入克隆载体中,重组腺病毒表达载体在HEK293A细胞中包装成功,获得成熟的腺病毒颗粒,病毒滴度为1.6×108 pfu/L,在HEK293A细胞中高表达。结论该实验采用GatewayTM技术构建了含有大鼠ZnT1基因的重组腺病毒载体,为下一步研究该基因在脊髓神经细胞中的表达以及与BDNF/TrkB信号调节通路的关系奠定了基础。
- 胡英明梅晰凡宋长威李谌
- 甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤节段炎性细胞因子和自噬因子表达的影响被引量：3
- 2014年
- 目的:探究脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后应用甲基强的松龙(methylprednisolone,MP)治疗对损伤脊髓节段中的炎性细胞因子IL-6、IL-10和自噬因子LC3B表达的影响。方法:采用改良Allen氏法建立大鼠脊髓(T10)损伤模型,60只SD雌性大鼠随机分为假手术组(n=20)、手术组(n=20)和MP组(n=20)。MP组于SCI后立刻经尾静脉给予MP(30 mg/kg),假手术组只打开椎板不损伤脊髓。分别于损伤后4 h、12 h、1 d、3 d和7 d取材,采用半定量RT-PCR方法检测损伤段脊髓组织中炎症因子IL-6、IL-10 mRNA和自噬因子LC3B mRNA的表达变化。结果:假手术组动物脊髓组织中IL-6、IL-10、LC3B mRNA的表达微弱。手术组的IL-6、IL-10、LC3B mRNA的表达均在损伤后4 h开始明显升高,于损伤后1 d达最高峰值,之后逐渐降低(P﹤0.05)。手术组的LC3B与IL-6和IL-10的表达呈现相似的趋势,IL-6、IL-10均与LC3B呈正相关。MP组的IL-6、IL-10、LC3B mRNA的表达在损伤后12 h开始明显受到抑制,到1 d时达最低值,7 d时LC3B mRNA的表达仍低于手术组(P﹤0.05),MP组的LC3B与IL-6和IL-10的表达也是呈现相似的趋势,IL-6、IL-10也均与LC3B呈正相关。结论:大鼠脊髓损伤后应用甲基强的松龙可以通过抑制炎症而抑制损伤节段的自噬活动。
- 柏亮杰梅晰凡袁亚江郭占鹏房师强曾锦浩郭跃
- 关键词：脊髓损伤自噬炎症
- 锌影响坐骨神经损伤模型小鼠脊髓P物质表达的实验研究被引量：3
- 2013年
- 目的研究锌对选择性坐骨神经分支损伤(spared nerve injury,SNI)小鼠脊髓P物质(substance P,SP)表达的影响。方法 48只CD1小鼠分为4组,采用SNI手术制备神经病理性疼痛(neuropathic pain,NPP)小鼠模型:对照组(Con)给予假手术(单纯分离坐骨神经),适锌喂养神经分支损伤(N-NPP)组锌饲料30 mg/(kg.d)喂养2周后给予SNI手术,低锌喂养神经分支损伤(L-NPP)组锌饲料0.85 mg/(kg.d)喂养2周后给予SNI手术,高锌喂养神经分支损伤(H-NPP)组硫酸锌水溶液227 mg/(L.d)喂养2周后给予SNI手术。应用原子吸收光谱、免疫组织化学、免疫印迹和图像分析技术检测术后7d锌对脊髓SP表达的影响。结果高锌喂养能显著增加血清和脊髓中锌的含量,脊髓SP表达下调(P<0.01);而低锌喂养加重血清和脊髓的缺锌状况,脊髓SP表达上调(P<0.01)。结论锌能抑制SNI后小鼠脊髓SP的表达。
- 张莉刘明王月静
- 关键词：锌神经病理性疼痛脊髓P物质
