国家自然科学基金预研项目(NSFYY201108)
- 作品数：5 被引量：28H指数：3
- 相关作者：曹文富黄欣赵苹利贺雄李艳更多>>
- 相关机构：重庆医科大学重庆医科大学附属第一医院重庆市江北区中医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金预研项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 腺相关病毒AAV2/8-CaMKIIα-ChR2-mCherry的组织学及通道功能鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的对腺相关病毒AAV2/8-Ca MKIIα-ChR2-m Cherry在大鼠内侧前额叶谷氨酸能神经元中表达的组织学及通道功能予以鉴定。方法以立体定位注射技术将腺相关病毒AAV2/8-Ca MKIIα-ChR2-m Cherry注射到SD雄性大鼠内侧前额叶,当病毒注射3~4周后,采用免疫荧光组织化学技术检测标记蛋白（m Cherry）在谷氨酸能神经元（特异启动子Ca MKIIα）的表达情况;利用在体细胞外记录技术观测谷氨酸能神经元所表达的通道蛋白（ChR2）对不同光刺激频率的电生理反应特性。结果病毒成功注射到内侧前额叶并特异表达通道蛋白于谷氨酸能神经元的细胞膜上,表达成功率为（94.6±0.9）%;表达ChR2通道蛋白的谷氨酸能神经元对蓝光（470 nm,20 m W/mm2,5 ms波宽,5~80 Hz）产生稳定的光激活反应,并且对低频光刺激（5、10、20 Hz）的反应性优于高频光刺激（40 Hz和80 Hz;P〈0.001）。结论腺相关病毒AAV2/8-Ca MKIIα-ChR2-m Cherry能成功表达在谷氨酸能神经元的细胞膜上,对光刺激有频率选择性。
- 刘树雷孙琳吴广延隋建峰曹文富
- 关键词：腺相关病毒
- 益气化瘀化痰法对肺纤维化大鼠TGF-β_1、PAI-1的影响被引量：6
- 2012年
- 目的探讨益气化瘀化痰法对肺纤维化大鼠肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)及纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)的影响。方法采用气管内一次性注射博来霉素5mg/kg诱导生成肺纤维化大鼠模型。将105只SD大鼠分为:正常对照组、模型组、益气组、化瘀组、化痰组、益气化瘀化痰组、激素组。正常对照组和模型组采用生理盐水灌胃,其余各组于造模后28d分别给予益气汤、化瘀汤、化痰汤、益气化瘀化痰汤30g.kg-1.d-1灌胃,激素组给予皮下注射氢化可的松20mg.kg-1.d-1干预,2个月后处死各组大鼠,ELISA法检测各组大鼠血浆PAI-1含量,Western blot法检测各组大鼠肺组织TGF-β1蛋白表达。结果益气组、化瘀组、化痰组及益气化瘀化痰组大鼠血浆PAI-1含量水平较模型组均降低(P<0.05),其中益气化瘀化痰组降低最显著(P<0.05);益气组、化瘀组、化痰组及益气化瘀化痰组大鼠肺组织TGF-β1蛋白表达较模型组均减弱(P<0.05),尤以益气化瘀化痰组减弱最明显(P<0.05)。结论益气、化瘀、化痰法能显著改善博来霉素所致大鼠肺纤维化的程度,其机制可能与抑制TGF-β1及PAI-1的表达有关。
- 贺雄曹文富赵苹利李艳黄欣
- 关键词：肺纤维化转化生长因子Β1纤溶酶原激活物抑制物1
- 固有免疫信号因子TRIF在肝纤维化中的表达被引量：1
- 2012年
- 目的初步探讨TOLL样受体下游重要信号因子TRIF与肝纤维化发生发展的病理机制关系。方法以四氯化碳皮下注射+低蛋白高脂饮食+酒精饮料的方法复制大鼠肝纤维化模型。将SD大鼠随机分成正常对照组和模型组,在完成制备模型实验后进行取材。部分实验鼠进行心脏生理盐水和多聚甲醛灌注后,取肝脏组织制备石蜡切片,进行常规HE染色和免疫组化实验;另一部分实验鼠脱颈安乐死后,取新鲜肝组织进行电镜标本的制备和Western Blot实验检测。结果 HE染色结果显示与而正常对照组大鼠相比,模型组大鼠肝小叶结构明显破坏,肝细胞数量明显减少和肝纤维化程度等特点明显;电镜结果也显示,肝纤维化组可见大量胶原纤维沉积现象,胞质可见明显的溶解现象,在狄氏腔内,肝星状细胞的细胞核溶解,血窦内皮细胞胞质、胞核皆溶解;免疫组化模型组大鼠肝组织均显示内皮细胞、星形细胞等TRIF都有强烈高表达,并且以胞核表达为主,亦见胞质表达,而正常组呈现弱阳性表达;与正常对照组相比,模型组大鼠肝组织TRIF蛋白表达都明显升高,呈显著性差异(P<0.01),与形态学的表达特点相一致。结论 TRIF在肝纤维化中表达显著增强,说明在肝纤维化过程中,TOLL样受体明显激活,并且通过下游信号转导途径,在机体内产生一系列的免疫应答反应。通过该现象的观察,我们初步证实了TOLL样受体固有免疫信号因子TRIF在纤维化形成中起着重要的作用。
- 黄欣李艳贺雄赵苹利曹文富
- 关键词：肝纤维化固有免疫TOLL-LIKERECEPTORSTRIF
- 固有免疫信号因子MyD88在CCl_4致大鼠肝纤维化模型中的表达被引量：4
- 2012年
- 目的观察固有免疫信号因子MyD88在肝纤维化大鼠肝脏中的表达特点,探讨MyD88与肝纤维化发生发展的关系。方法将40只SD大鼠随机分成正常对照组和实验组,以四氯化碳皮下注射和高脂低蛋白饮食复制大鼠肝纤维化模型。在制备模型实验过程中的第6个月根据不同检测目的进行取材。石蜡切片常规HE染色和免疫组化实验,另一部分标本直接进行RT-PCR实验和Western blot实验检测。结果 HE结果显示,正常组大鼠肝小叶结构罗列规则有序,未见大量炎性细胞等异构细胞出现。而MyD88在内皮细胞轻度表达,而在星形细胞并未见明显表达。模型组肝小叶结构明显破坏,数量明显减少,结构紊乱无序,代之以大量异常细胞浸润,纤维增生等特点。内皮细胞、星形细胞等MyD88都有强烈高表达,并且以胞核表达为主,亦见胞浆表达。而基因和蛋白表达都明显升高,与正常对照组相比,呈现显著性差异(P<0.01)。结论 MyD88在肝纤维化中表达显著增强,可能在纤维化形成中起到重要作用。
- 黄欣曹文富李艳贺雄赵苹利
- 关键词：肝纤维化固有免疫TOLL样受体MYD88
- 川芎含药血清对肝星状细胞Toll样受体4及下游信号因子MyD88表达的影响被引量：16
- 2015年
- 观察川芎含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)及下游信号因子髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)表达的影响。清洁级SD大鼠给予川芎水煎剂、秋水仙碱、生理盐水连续灌胃7 d制备川芎含药血清。体外培养的肝星状细胞,除空白组外,其余各组均予LPS 1 mg·L-1刺激24 h,各组含药血清干预后于37℃,5%CO2培养箱中培养。24 h后收集细胞,分别采用半定量RTPCR和Western blot法测定TLR4,My D88的表达情况。用LPS刺激大鼠HSC后,TLR4与My D88的m RNA和蛋白的表达均明显增加(与空白对照组比较P<0.01)。川芎含药血清干预后,TLR4,My D88 m RNA和蛋白的表达明显减少(与模型组比较P<0.01或P<0.05),其中川芎含药血清中、高剂量组减少最为明显。川芎含药血清可通过抑制LPS诱导的HSCs中TLR4及下游信号因子My D88的表达,参与TLR4信号通路而发挥其抗纤维化作用。
- 王海兰何娟曹文富陈文龙
- 关键词：川芎肝星状细胞脂多糖TOLL样受体4肝纤维化
