国家自然科学基金(39800147)
- 作品数：8 被引量：27H指数：3
- 相关作者：黄孝忠张洁林苹陆燕蓉杨可更多>>
- 相关机构：四川大学华西医院华西医科大学附属第一医院华西医科大学附一院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部科技专项基金四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠肺癌B_(7)融合细胞的制备及生物学性质被引量：1
- 2000年
- 目的 改善肿瘤细胞共刺激分子B7的表达。方法 将ALA970 2 肺癌细胞与活化的B淋巴细胞用聚乙二醇进行细胞融合 ,经ELISA及免疫细胞化学筛选后 ,用S P免疫细胞化学染色观察融合细胞的肺癌抗原及B7分子的表达 ,并观察融合细胞的体内外生长情况。结果 经筛选获得一株融合细胞FLB2C。融合细胞既表达肺癌抗原 ,又表达B7分子。体外培养显示其贴壁性较ALA970 2 肺癌细胞减弱 ,生长明显变缓 ,细胞倍增时间延长 ,不能在软琼脂中形成集落。接种融合细胞亦不能在小鼠体内成瘤 ,而接种ALA970 2 细胞的 10只小鼠中 6例腋下出现肿瘤生长 ,3例还发生肺转移。结论 通过细胞融合方法可以有效改善肿瘤细胞的B7分子表达 ,从而提高肿瘤细胞的抗原性。融合细胞FLB2C的致瘤性明显减弱 ,为制备更有效的肺癌疫苗奠定了基础。
- 林苹陆燕蓉张洁黄孝忠江映红
- 关键词：生物学性质
- HGPRT缺陷型Lewis肺癌细胞株的筛选及其生物学特征被引量：4
- 2001年
- 目的 为细胞融合等实验提供次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HGPRT)缺陷细胞株。方法 用 8 氮杂鸟嘌呤 ( 8 AG)对Lewis肺癌细胞株L3 8进行长期渐进式给药 ,从中克隆筛选出HGPRT缺陷细胞株 ,并观察其体内成瘤和肺转移特性。结果 经过 1年的筛选鉴定 ,获得了在 2 0mg/L 8 AG和 16 40培养液中能长期稳定生长 ,在HAT选择性培养基中不能形成克隆的AL990 1细胞株。AL990 1和L3 8的染色体众数分别为5 8和 6 2 ,在C5 7BL/ 6小鼠体内成瘤率均为 10 0 % ( 10 / 10 ) ,肺转移率分别为 30 % ( 3/ 10 )和 70 % ( 7/ 10 )。结论 HGPRT缺陷型AL990 1细胞株基本保持了L3 8细胞的生物学特征 ,可作为制备Lewis肺癌DC融合疫苗的亲本抗原细胞。
- 陆燕蓉林苹张洁王修杰周宏远黄孝忠宁其志江映红杨可
- 关键词：HGPRTLEWIS肺癌生物学特征细胞融合技术
- 肺癌树突状融合细胞的制备及其生物学特征被引量：10
- 2001年
- 目的探讨利用杂交瘤技术制备肿瘤疫苗的方法 ,研究肺癌树突状融合细胞的生物学特征。方法 用 PEG法将 HGPRT缺陷型 L ewis肺癌细胞株 AL990 1 与小鼠骨髓诱生的树突状细胞进行融合 ,HAT筛选融合克隆 ;S- P免疫细胞化学法鉴定融合细胞表型 ;对融合细胞进行生长曲线、克隆形成和体内成瘤等鉴定。结果树突状细胞与 AL990 1 以 6∶ 1比例融合 ,融合率约为 30 %。融合细胞 FL D- A1 1 可在体外传代培养 ,表型为 CD80 + 、CD40 + 、H- 2 Kb + 、MIDC+ 和肺癌抗原阳性。 FL D- A1 1不能在软琼脂培养基中形成克隆 ,动物体内不能形成肿瘤。结论利用杂交瘤技术制备的 FL D- A1 1 细胞 ,具备了在体内激活抗特异性地抗肿瘤细胞免疫功能的分子表型 ;该细胞不存在体内成瘤的危险。本研究为 FL D- A1 1 作为肿瘤疫苗 。
- 陆燕蓉林苹张洁王修杰周宏远黄孝忠宁奇志
- 关键词：肺癌树突状细胞细胞融合生物学特征
- 肺癌DC融合细胞诱导的抗肿瘤免疫应答被引量：8
- 2001年
- 目的研究肺癌 DC融合细胞 FL D- A11体内外诱导免疫应答的能力。方法用 MTT法测定 FL D- A11细胞诱导淋巴细胞增殖的能力 ;EL ISA法检测其诱导淋巴细胞分泌 IL- 2的水平 ;L DH释放法测定 FL D- A11细胞免疫后小鼠脾淋巴细胞的特异性 CTL 活性。结果 FL D- A11细胞能有效刺激淋巴细胞的增殖反应 ( SC∶ RC=1∶ 5 0时 ,SI=2 .3 8) ,诱导淋巴细胞分泌 IL- 2。 FL D- A11细胞免疫后 ,小鼠的胸腺和脾脏重量均高于对照组 ( P<0 .0 5 ) ,脾淋巴细胞对 L ewis肺癌细胞的杀伤活性显著高于对照组。结论 FL D- A11细胞具有诱导初次抗肿瘤免疫应答的能力 ,不仅能在体外诱导淋巴细胞的增殖和 IL- 2的分泌 ,而且体内免疫接种也能引起小鼠免疫器官的增生反应 ,产生针对 L ewis肺癌的特异性 CTL 杀伤作用。
- 陆燕蓉张洁林苹黄孝忠宁其志杨可
- 关键词：肺癌树突状细胞融合细胞免疫应答
- 体外培养人成纤维细胞转化生长因子-β_1自分泌规律的研究被引量：2
- 2002年
- 目的 探讨体外培养人成纤维细胞转化生长因子 -β1 (TGF-β1 )的自分泌规律。方法 应用健康人包皮环切术所得包皮 ,通过体外成纤维细胞传代培养共 12代 ,运用 EL ISA法 ,分别检测不同代次成纤维细胞 TGF-β1 浓度 ,并测定第 6代成纤维细胞在不同时间培养上清液中 TGF-β1 的浓度。结果 自第 3代开始 ,成纤维细胞培养上清液可检测到 TGF-β1 ,并逐渐升高 ,至第 6代达分泌高峰 (45 0 ng/ L ) ,第 11、12代不能测到 ;而第 6代成纤维细胞 ,培养上清液中 TGF-β1 含量以第 5天的检测值最高 (6 80 ng/ L ) ,是第 1天检测值 (2 80 ng/ L )的 2 .5倍。结论 成纤维细胞 TGF-β1 自分泌能力 ,是由弱到强再逐渐减弱的过程 。
- 张洁林苹黄鲁刚陆燕蓉周宏远黄孝忠宁其志
- 关键词：人成纤维细胞转化生长因子-Β1自分泌ELISA法创伤修复
- 一株HGPRT缺陷型小鼠肺癌细胞株的建立及其生物学性质被引量：2
- 1999年
- 目的 为研制肺癌疫苗提供适合细胞融合的抗原细胞。方法 用8氮鸟嘌呤(8AG)从小鼠肺癌细胞LA795渐进诱导次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖基酶(HGPRT)缺陷型细胞株ALA9702,并鉴定其生物学性质及成瘤性。结果 ALA9702细胞在20μg/ml8AG培养液中生长了一年,在HAT培养液中不能形成集落,并保持了来源细胞LA795的生物学性质及成瘤性。结论 ALA9702细胞株稳定表现为HGPRT缺陷型小鼠肺癌细胞。
- 林苹陆燕蓉周宏远张洁黄孝忠
- 关键词：肺癌细胞株生物学性质小鼠肺癌疫苗
- 小鼠肺癌B_7疫苗细胞FLB_(2C)诱导的抗肿瘤免疫应答被引量：2
- 2002年
- 目的 研究小鼠肺癌细胞与活化B淋巴细胞融合的疫苗细胞FLB2C 诱导细胞免疫反应情况。方法 用母本细胞LA795作对照 ,采用体外混合淋巴细胞培养 ,观察FLB2C 细胞刺激T细胞增殖情况 ;通过CTLL细胞MTT法测定FLB2C刺激T细胞产生分泌IL 2的作用 ;用FLB2C免疫小鼠 ,观察疫苗体内诱导小鼠CTL活性的能力。结果 FLB2C细胞在体外刺激T细胞增殖的作用明显比LA795强 ;FLB2C能刺激T细胞分泌IL 2 ,而LA795则不能 ;FLB2C细胞在体内能诱导CTL活性 ,其诱导的CTL在体外对FLB2C 细胞和LA795的杀伤率分别为 3 4%和 2 5 .3 % ,而LA795诱导的CTL对FLB2C和LA795杀伤率分别为 10 .5 %和 12 .2 5 % ,两者的杀伤率有显著性差异。结论 FLB2C细胞在体内外均能刺激T细胞免疫应答 ,其能力明显强于未融合的LA795小鼠肺癌细胞。将其作为疫苗细胞将有可能通过提高机体免疫应答而达到治疗肺癌的效果。
- 林苹陆燕蓉张洁黄孝忠宁奇志杨可
- 关键词：肿瘤疫苗肺肿瘤B7分子免疫疗法
- SOCS1受抑的新型肝癌树突状细胞疫苗制备及功效的初步研究
- 2008年
- 目的探讨抑制SOCS1表达对LIGHT激活的肝癌树突状细胞疫苗效应的作用。方法用重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)体外诱导培养小鼠骨髓单核细胞产生骨髓来源树突状细胞(BMDC),体外负载肝癌细胞HepA可溶性抗原,并用LIGHT和SOCS1反义寡核苷酸(AS1)处理DC,制备负载肝癌抗原DC疫苗;流式细胞仪检测疫苗细胞CD40及CD86表达和ELISA测定其IL-12、IL-1分泌水平以确定DC疫苗细胞的成熟度;通过体外细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性、淋巴细胞增殖反应和IL-6、TNF-β分泌水平测定分析疫苗细胞的抗肿瘤免疫应答。结果负载肝癌抗原DC疫苗在LIGHT和AS1的双重作用下,疫苗细胞的成熟标志CD40、CD86、IL-1和IL-12增高(P<0.01),能增强诱导CTL活性、刺激淋巴细胞增殖和分泌IL-6、TNF-β能力(P<0.01)。结论抑制SOCS1能提高肝癌DC疫苗的成熟度,并增强疫苗细胞诱导抗肿瘤免疫应答。
- 刘战培张洁林苹王修杰王琪
- 关键词：肝癌树突状细胞疫苗
