广东省自然科学基金(2008A030201019)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：吕俊杜谋选柯以铨秦玲莎姜晓丹更多>>
- 相关机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- LINGO-1多克隆抗体对大鼠脊髓损伤模型干预的可行性分析被引量：2
- 2009年
- 目的探讨脊髓损伤（SCI）处局部给予LINGO-1多克隆抗体治疗的可行性。方法24只成年雌性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组、半横断对照IgG组及半横断LINGO-1多克隆抗体组，每组8只。假手术组仅行椎板切除术，另外两组均行T9脊髓半横断术，半横断LINGO-1多克隆抗体组大鼠半横断损伤后立刻通过微量渗透泵局部给予损伤处LINGO-1多克隆抗体，而半横断对照IgG组仅给予兔源性对照IgG。术后3d和28d取各组T8-10节段脊髓制作冰冻切片，应用免疫荧光染色方法观察分析LINGO-1多克隆抗体是否进入脊髓组织并与LINGO-1分子特异性结合。结果半横断LINGO-1多克隆抗体组大鼠SCI术后3d和28d均可检测出兔源性抗体；术后3d，半横断对照IgG组切片LINGO-1染色强度（1．704±0．174）明显强于半横断LINGO-1多克隆抗体组（0．568±0．052），LINGO-1多克隆抗体预处理后的半横断对照IgG组切片LINGO-1染色强度（0．329±0．055）明显弱于半横断对照IgG组（1．704±0．174）切片，比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论局部给予的LINGO-1多克隆抗体在较宽的时间窗里均可进入SCI区并特异性识别LINGO-1分子．证明被动免疫治疗SCI是可行的。
- 吕俊徐如祥法志强姜晓丹鲁辛柯以铨蔡颖谦杜谋选邹雨汐秦玲莎
- 关键词：中枢神经系统脊髓损伤
- 人Tenascin-R_(aa454-1069)蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2009年
- 目的表达和纯化带多聚组氨酸(6×His)标签的人Tenascin-R EGFL结构域(Tenascin-Raa454-1069)的融合蛋白,并制备相应的兔源性多克隆抗体(pAb)。方法利用PCR从PMD18-T-TNR获得Tena-scin-Raa454-1069编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pET30a(+),构建重组表达质粒pET30a(+)-Tenascin-Raa454-1069;将阳性重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达6×His-Tenascin-Raa454-1069融合蛋白,经Ni-NTA螯合树脂纯化,纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗血清,Protein A Sepharose柱纯化获得多抗,ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性。结果成功构建了pET30a(+)-Tenascin-Raa454-1069原核表达载体,原核蛋白Tenascin-Raa454-1069以包涵体形式在大肠杆菌高水平表达,通过复性与亲和层析获得纯度在90%以上的融合蛋白,蛋白浓度为1 600 mg/L,制备的抗Tenascin-Raa454-1069多抗效价高达1∶1.6×106,Western blot鉴定其具有良好的特异性。结论获得高纯度Tenascin-Raa454-1069蛋白并成功制备特异性pAb,为进一步研究Tenascin-R的生物学功能提供实验基础。
- 吕俊徐如祥姜晓丹胡昌辰柯以铨蔡颖谦杜谋选邹雨汐秦玲莎
- 关键词：原核表达多克隆抗体中枢神经系统
