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前列腺癌组织中SOD_2的cDNA克隆及其序列分析: 2009年; 目的构建前列腺癌组织中SOD2的cDNA克隆,并进行序列分析。方法从人前列腺癌组织细胞中提取总RNA并逆转录成cD-NA,PCR扩增cDNA片段,将cDNA克隆入载体pGEM-T中构建T-A克隆,对阳性克隆进行序列测定分析。结果在1例前列腺癌组织标本中发现了SOD2基因的两个相连的点突变位点:372nt T→G颠换和373ntG→T颠换。蛋白序列比较分析显示:对应SOD2编码蛋白的第89位氨基酸由亮氨酸变为精氨酸。结论SOD2基因突变在前列腺癌的发生中可能起重要作用。; 王明臣王好东张善锋王红钢臧明玺赵国强; 关键词：锰超氧化物歧化酶逆转录分子克隆

前列腺癌特异突变DNA聚合酶β真核表达载体构建及鉴定被引量：2: 2009年; 目的构建前列腺癌(PCa)特异突变DNA聚合酶β(polβ)真核表达载体。方法提取有特异DNApolβ突变的PCa组织的总RNA,通用引物逆转录成cDNA;用设计带有接头的DNA polβ全基因引物,PCR扩增PCa组织中呈现的突变型DNApolβ全基因;构建T-A克隆并进行重组体的筛选鉴定;亚克隆入表达载体pcDNA3.1并进行重组体的筛选和鉴定。结果PCa特异突变DN Apolβ基因扩增选择出P4(M1-polβ)和P5(M2-polβ)两个标本,构建重组有特定突变位点的polβ目的基因的pcDNA3.1真核表达载体,经PCR扩增获得2个阳性集落。结论经鉴定成功构建2例PCa特异突变DNApolβ真核表达载体(pcDNA3.1-M1 and pcDNA3.1-M2)。; 王明臣宋宇张善锋付蕾文明赵勤金国平赵国强; 关键词：前列腺癌 DNA聚合酶Β 基因突变真核表达载体

前列腺癌特异突变DNA聚合酶β表达载体转染NIH3T3的细胞生物学行为变化被引量：1: 2010年; 目的观察前列腺癌(CPa)特异突变DNA聚合酶β(polβ)表达载体转染NIH3T3的细胞生物学行为变化。方法采用业已成功构建的2例特异突变polβ表达载体(pCDNA3.1-M1和pCDNA3.1-M2),采用脂质体包裹转染NIH3T3细胞,观察比较这些突变对细胞polβ基因mRNA和蛋白表达的影响以及引发的相应的细胞周期和细胞自发突变率等细胞生物学行为的变化。结果筛选得到高表达PCa特异突变polβ的NIH3T3细胞株(NIH3T3-M1,NIH3T3-M2)和高表达野生型polβ的NIH3T3细胞株(NIH3T3-W)。RT-PCR和Western印迹结果显示,外源DNApolβ在转化的NIH3T3细胞中呈现高表达。与转染空载体和未转染的NIH3T3细胞相比,转染PCa特异突变polβ的2个细胞株和转染野生型polβ的细胞株的细胞周期的S期比例及转染细胞的HGPRT(次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)基因的自发突变率均显著增加,且转染野生型polβ的细胞株亦显著高于转染PCa特异突变DNApolβ的细胞株。结论 DNApolβ高表达介导了肿瘤发生的分子机制。; 王明臣霍玉奇张善锋宋宇赵勤金国平董子明; 关键词：前列腺癌 DNA聚合酶Β NIH3T3

质粒构象对转染后蛋白表达时间曲线的影响: 2012年; 目的探讨质粒的不同构象下磷酸钙转染后对蛋白表达量时间曲线的影响。方法经过处理的pcDNA3-MADCAM-1-Fc,pcDNA3.1/Hygro(+)-Alpha4,pcDNA3.1/Hygro(+)-Beta7三种质粒磷酸钙转染293T细胞,第一种表达分泌到胞外的蛋白通过收集上清,ProteinA纯化,另外两种表达于细胞外膜,通过流式细胞仪检测荧光强度。结果 pcDNA3-MADCAM-1-Fc磷酸钙转染后处理组(缺口开环)比对照组表达蛋白量多(t=5.009,p=0.0376)。pcDNA3.1/Hygro(+)-Alpha4,pcDNA3.1/Hygro(+)-Beta7两种质粒共转后处理组荧光强度36h后略高于对照组,48h后对照组明显升高。结论质粒的不同构象下磷酸钙转染后蛋白表达量有时间依赖性。; 王志平霍玉奇王明臣; 关键词：碱裂解法转染荧光强度

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河南省教育厅自然科学基金(0611043400)