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中国博士后科学基金(20060390240)
作品数:
2
被引量:11
H指数:2
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闫朝岐
张建国
郭宝良
杨学伟
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2009
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Smad3小分子干扰RNA在乳腺癌细胞中抑制转化生长因子-β诱导的基质金属蛋白激酶-9的表达
被引量:4
2009年
目的观察应用Smad3特异性小分子干扰RNA(siRNA)在乳腺癌MDA-MB-231细胞中对MMP-9表达的影响。方法化学合成Smad3 siRNA,并将其转染到MDA-MB-231细胞后行转化生长因子(TGF)-β(1μg/L)刺激。24h后利用萤光素酶报告基因法测定Smad结合转写因子(4xSBE)的活性;48h后应用Western blot法测定Smad3、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白水平表达;24h后应用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)法观察MMP-9 mRNA水平表达。结果与对照组比较,Smad3 siRNA有意义地抑制Smad3蛋白的表达(0.5±0.1比1.0±0.2)。Smad3 siRNA有意义地抑制TGF—β诱导的4xSBE活性(5.2±0.3比1.0±0.1;P〈0.05)。Smad3蛋白的表达(0.5±0.1比1.0±0.2)与对照组比较TGF-β刺激组明显激活了MMP-9 mRNA和蛋白水平的表达(2.4±0.3比1.0±0.1和1.8±0.4比1.0±0.2),而Smad3 siRNA有意义地抑制了TGF-β激活的MMP-9 mRNA和蛋白水平的高表达(1.3±0.2比2.4±0.3和1.1±0.2比1.8±0.4)。结论构建的Smad3 siRNA能够抑制MDA—MB-231细胞中TGF—β诱导的MMP-9的表达。
郭宝良
杨学伟
秦优优
张建国
张东伟
闫朝岐
丛德友
杨维良
关键词:
乳腺癌
小RNA干扰
TGF-Β
SMAD3
Smad4 siRNA对转化生长因子β诱导Ⅰ型胶原表达的作用
被引量:7
2009年
背景:近期研究表明,阻断smad传导通路可能成为一个阻断转化生长因子β引起的肝纤维化的新的靶点。目的:验证Smad4小分子干扰RNA(siRNA)对转化生长因子β诱导的Ⅰ型胶原的作用。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-09/2008-10在哈尔滨医科大学药学院完成。材料:肝星状细胞HSC-T6体外培养,siRNA和荧光素酶报告基因采用Lipofectamine试剂转染,以含巨细胞病毒-β-半乳糖苷酶质粒作为转染阳性对照。方法:根据不同处理将细胞分为4组,空白对照组;Smad4siRNA转染组;转化生长因子β处理组;Smad4siRNA转染后转化生长因子β处理组,将Smad4siRNA转染入肝星状细胞后行转化生长因子β刺激。各组分别于培养24h后收集细胞。主要观察指标:利用荧光素酶报告基因法测定Smad结合转写因子(4XSBE)的活性;反转录-聚合酶链反应法检测Ⅰ型胶原mRNA表达的变化;Western印迹分析观察Smad4蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的变化。结果:Smad4siRNA有意义的抑制Smad4蛋白表达;Smad4siRNA抑制转化生长因子β诱导的4XSBE转录报告基因的活性;Smad4siRNA从mRNA和蛋白水平有效抑制转化生长因子β激活的Ⅰ型胶原的表达。结论:Smad4siRNA能够有效地阻断转化生长因子β诱导的Ⅰ型胶原表达。
郭宝良
闫朝岐
仲雷
张建国
杨学伟
关键词:
小分子干扰RNA
SMAD4
转化生长因子Β
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