广东省科技攻关计划(2007A020300008-6) 作品数:3 被引量:14 H指数:2 相关作者: 陈文利 张卫娜 高玲 杨柳 董浚键 更多>> 相关机构: 华南师范大学 广东省农业科学院 青岛农业大学 更多>> 发文基金: 广东省科技攻关计划 教育部重点实验室开放基金 长江学者和创新团队发展计划 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 更多>>
病原菌Pst DC3000侵染拟南芥导致自噬和光合作用的抑制 被引量:5 2011年 在病原菌侵染下,植物体是如何通过超敏反应限制病原菌扩增的,到目前为止还不清楚。最近的研究显示自噬起了必要的作用,可见,研究自噬和超敏反应的机制非常重要。本研究通过观察在非寄主病原菌突变体丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv.tomatoDC3000,Pst DC3000)的侵染下,拟南芥光合功能的变化及自噬现象出现的情况,以为进一步研究植物抗病机理提供实验基础。以野生型拟南芥为材料,采用光谱分析和叶绿素荧光成像分析手段,研究不同浓度的Pst DC3000侵染对拟南芥离体叶片光合功能的影响;以转基因野生型拟南芥(绿色荧光蛋白标记的自噬基因8a)幼根为材料,应用共聚焦显微镜,研究不同浓度的Pst DC3000诱导拟南芥自噬的情况。实验发现,OD600=0.2的Pst DC3000侵染,可显著诱导拟南芥叶片活性氧的积累和迸发,并会引起拟南芥叶片光合作用效率的下降。同时发现,该病原菌处理2 h,可导致拟南芥根中自噬小体的产生。用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酯(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,H2DCFDA)标记活性氧,检测了Pst DC3000作用下叶片活性氧产生量的变化,发现,在OD600=0.2的Pst DC3000作用下,90 min内,叶片组织中的活性氧产生了明显的积累。以上结果说明:Pst DC3000侵染叶片,导致了活性氧迸发和光合系统的受损,进而推测这两个结果具有相关性;在植物与病原菌的互作系统中,光合系统的变化规律可以作为典型的指标来加以检测。 杨柳 董浚键 陈文利关键词:拟南芥 光合功能 细胞自噬 活性氧 镉胁迫对拟南芥的毒害作用及自噬现象的观测 被引量:10 2011年 镉离子(Cd2+)具有强植物毒性,可抑制植物生长,甚至导致植物死亡。为了研究重金属镉对拟南芥的毒害作用,采用叶绿素荧光技术、流式细胞技术、激光共聚焦技术及半定量RT-PCR技术,检测光合参数的变化、活性氧(reactive oxygen species,ROS)的累积、自噬的发生,以及病原相关蛋白(pathogenesis-related protein,PR)基因表达的变化。实验结果显示,随着50μmol/L CdCl2处理时间的延长,ROS和Cd2+在细胞中大量积累。而在镉胁迫的初期,会观察到自噬的发生及PR基因表达的变化。说明植物受到外界Cd2+作用的初期,会通过自噬及增强PR基因表达来抵抗外界胁迫。但随着处理时间的延长,植物细胞内累积了大量的ROS和Cd2+,当植物不足以通过自噬途径抵抗胁迫时,就会导致生长受阻,最终对光合系统造成损伤。 高玲 张卫娜 陈文利关键词:自噬 叶绿素荧光 流式细胞技术 抗组氨酰-tRNA合成酶单克隆抗体的制备及初步鉴定 2008年 【目的】制备均一性和特异性高的抗组氨酰-tRNA合成酶抗体,为研究皮肌炎和多肌炎的检测提供方法,为制备检测试剂盒提供原料。【方法】采用常规融合和间接ELISA检测法,获取杂交瘤细胞株;Protein G Sepharose 4FF和Sephadex G50结合对含有单克隆抗体的腹水进行纯化;SDS-PAGA电泳技术进行单克隆抗体的鉴定。【结果】筛选获得了2株稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为W001和W002;杂交瘤细胞克隆后,100%的检测孔保持了分泌抗组氨酰-tRNA合成酶抗体的能力;腹水纯化达到了较理想的效果;该2株单克隆抗体能特异性针对组氨酰-tRNA合成酶,并能跟天然的蛋白结合。【结论】所制备的均一性和特异性高的抗组氨酰-tRNA合成酶抗体,可直接用于在ELISA、免疫印迹、免疫组化学等研究方面,达到了试验的目的。 曾小龙 刘秀明 徐伟文关键词:单克隆抗体