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广东省科技计划工业攻关项目(2005b10401022)
广东省科技计划工业攻关项目(2005b10401022)
- 作品数:1 被引量:2H指数:1
- 相关作者:李爱民罗荣城陆慧琦钱新宇韩焕兴更多>>
- 相关机构:第二军医大学南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金:广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 人源性抗核抗体Fab片段的筛选及鉴定被引量:2
- 2008年
- 目的:制备人源性抗核抗体Fab片段。方法:通过4轮淘筛,富集已构建的人源性抗核抗体Fab片段噬菌体抗体库,间接ELISA法鉴定4轮淘筛后抗核抗体Fab片段噬菌体抗体;提取阳性克隆的噬菌粒DNA,切除gⅢ基因片段,自连接后转化大肠杆菌XL1-Blue,以IPTG诱导表达可溶性人源性抗核抗体Fab片段;应用间接ELISA法及荧光免疫法对表达上清进行鉴定。结果:第4轮洗脱的噬菌体滴度较第1轮增加200余倍,从抗核抗体Fab片段噬菌体库中筛选出2株阳性克隆,切除gⅢ基因后自连的噬菌粒DNA经XhoⅠ单酶切证实连接成功。间接ELISA法检测结果显示:制备的可溶性人源性抗核抗体Fab片段均呈现抗dsDNA阳性,具有抗原特异性;免疫荧光法结果显示:Hep2细胞和猴肝脏组织细胞核显示均质型荧光,绿蝇短膜虫的动基体显示均质型荧光。结论:成功制备具有抗原特异性的可溶性、人源性抗核抗体Fab片段,为高亲和力抗核抗体Fab片段的制备奠定了基础。
- 陆慧琦钱新宇李爱民罗荣城韩焕兴
- 关键词:抗核抗体单克隆抗体噬菌体展示肽库