国家自然科学基金(30671950)
- 作品数：9 被引量：45H指数：3
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- 灵芝提取物通过抑制小胶质细胞激活保护多巴胺能神经元被引量：12
- 2010年
- 近来的研究表明,神经炎症在帕金森病（Parkinson’sdisease,PD）的发病过程中起着重要的作用,因此通过抑制神经炎症而保护黑质多巴胺能神经元可能是一种具有潜力的治疗策略。本研究组前期的临床试验表明,灵芝（Ganoderma lucidum,GL）具有潜在的神经保护作用,可能通过抗炎及免疫调节机制发挥其保护作用。本研究在神经元-小胶质细胞共培养的模型中观察了GL的神经保护作用,并探讨其可能的保护机制。小胶质细胞单独或与MES23.5多巴胺能神经细胞共培养,脂多糖（lipopolysaccharide,LPS,0.25μg/mL）孵育24h作为阳性对照,试验组分别加入GL提取物（50~400μg/mL）和/或MPP＋处理的MES23.5细胞膜碎片（150μg/mL）;检测小胶质细胞激活情况及其产生的有害因子和MES23.5细胞[3H]DA摄取能力。结果显示,LPS或MPP＋损伤的MES23.5膜碎片均可激活小胶质细胞。同时,GL提取物可以显著降低小胶质细胞源性炎症因子和细胞毒性因子（NO、TNF-α、L-1β）的产生,并呈一定的浓度依赖性;并同样可以下调TNF-α和L-1β mRNA水平的表达。此外,GL还可明显对抗由小胶质细胞激活和MPP＋介导的多巴胺能神经细胞[3H]DA摄取抑制。以上结果提示,GL主要通过抑制小胶质细胞激活,减少其神经毒性因子的释放而保护多巴胺能神经细胞。GL可能成为治疗PD的潜在药物。
- 丁晖周明张瑞萍徐胜利
- 关键词：小胶质细胞灵芝神经炎症神经保护
- 共聚物-1致敏T淋巴细胞保护MPTP帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能神经元被引量：2
- 2009年
- 目的明确C57BL/6J小鼠MPTP模型保护黑质多巴胺(dopamine,DA)神经元的共聚物-1(Copolymer-1,Cop-1)致敏淋巴细胞的类型。方法将80只雄性C57BL/6J小鼠分为Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植组、Cop-1/BSA致敏T淋巴细胞移植组、去T淋巴细胞Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植组、MPTP模型组和正常对照组,每组10只。C57BL/6J小鼠1d内接受4次MPTP(18mg.kg-1)腹膜腔注射,每次注射间隔2h,正常对照组动物仅接受等量的0.9%氯化钠注射液注射。MPTP末次注射后,除MPTP模型组和正常对照组动物外,其他组动物立即分别接受不同的Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植。细胞移植7d后处死动物,取脑。酪氨酸羟化酶免疫组化及体视学方法定量分析黑质DA神经元数。结果黑质DA神经元定量分析显示,MPTP注射使模型对照组黑质DA神经元减少到正常对照组的37.68%,BSA致敏淋巴细胞移植组(38.15%)、BSA致敏T淋巴细胞移植组(41.44%)和去T淋巴细胞的Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植组结果(Cop-1:40.06%,BSA:34.81%)和模型对照组类似。而Cop-1致敏淋巴细胞移植和Cop-1致敏T淋巴细胞移植组黑质DA神经元数为正常对照组的74.38%和84.64%,DA神经元数明显高于模型对照组、BSA致敏淋巴细胞移植组和去除T淋巴细胞的BSA/Cop-1致敏淋巴细胞移植组(P<0.01)。结论在MPTPC57BL/6J小鼠模型,Cop-1致敏T淋巴细胞可有效对抗MPTP毒性,保护黑质DA神经元。
- 徐胜利宣琪周明
- 关键词：帕金森病T淋巴细胞
- 神经营养因子基因修饰的神经干细胞在帕金森病大鼠模型中的治疗作用被引量：14
- 2010年
- 目的观察人胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）转染的大鼠神经于细胞移植对帕金森病（PD）模型大鼠的治疗作用。方法制备PD大鼠模型并将成功模型分为PD模型组、神经干细胞组和GDNF基因修饰神经干细胞组。细胞移植后，动态观察动物行为学变化，定量分析黑质多巴胺能神经元、纹状体多巴胺及其代谢产物的变化。结果GDNF基因修饰神经于细胞移植能有效改善实验动物的行为学表现，细胞移植后第5周时，PD模型组、神经干细胞组和GDNF基因修饰的神经于细胞组90min内的旋转圈数分别为（993．9±159．1）圈、（956．7±136．3）圈和（433．6±100．9）圈，GDNF基因修饰的神经干细胞组可显著减少PD模型大鼠向损伤侧旋转的圈数（F=95．694，P=0．000）；第7周时，PD模型组的90min内的旋转圈数为（964．2±152．0）圈，神经干细胞对照组和GDNF基因修饰的神经干细胞组分别为（909．2±136．3）圈和（399．4±84．4）圈（F=106．134，p=0．000）；第9周时，PD模型组、神经干细胞组和GDNF基因修饰的神经干细胞组90min内的旋转圈数分别为（909．5±152．2）圈、（865．5±129．1）圈和（312．2±63．7）圈（F=151．100，P=0．000）。GDNF基因修饰神经于细胞移植能有效提高损伤侧纹状体内的多巴胺及其代谢产物水平，PD模型组、神经干细胞组和GDNF基因修饰干细胞组毒素注射侧多巴胺含量分别为（3．3±0．3）ng／mg组织、（3．7±1．3）ng／mg组织和（7．5±0．8）ng／mg组织，GDNF基因修饰的干细胞组多巴胺水平明显高于神经干细胞组和PD模型组（F--59．543，P一0．000）；GDNF基因修饰神经干细胞组二羟基苯乙酸水平明显高于神经干细胞组和PD模型组，分别为（o．9±0．1）ng／mg组织、（0．6±0．2）ng／mg组织和（0．5±0．1）ng／mg组织（F一17．293，P一0．000）；PD模型组、神经干细胞组和GDNF基因�
- 徐胜利周明陈彪
- 关键词：帕金森病胶质细胞源性神经营养因子干细胞移植基因疗法
- 不同浓度α-突触核蛋白对培养SH-SY5Y细胞6-羟基多巴胺神经毒性的双重作用被引量：3
- 2009年
- α-突触核蛋白(α-synuclein,α-SN)和泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)在帕金森病发病过程中都起着重要作用,探讨两者在多巴胺能神经细胞死亡过程中的相互关系有重要意义。本文分别采用不同浓度的重组人α-SN、蛋白酶体活性抑制剂lactacystin单独处理,或与多巴胺能神经细胞特异毒素6-羟基多巴胺(6-OHDA)联合处理多巴胺能神经细胞系SH-SY5Y细胞,然后检测细胞活性和蛋白酶体活性。结果显示,α-SN依据浓度的不同而具有神经保护或神经毒性的双重作用。5μmol/L以下浓度的α-SN可对抗6-OHDA对SH-SY5Y细胞的毒性,并有一定促增殖作用;10μmol/L以上浓度的α-SN对细胞有毒性作用,并加重了6-OHDA的细胞毒性。采用相应浓度的lactacystin处理,获得与α-SN处理相似的结果,而MEK1/2特异抑制剂PD98059干预则可完全阻断低浓度α-SN和lactacystin的神经保护作用。以上结果提示,不同浓度α-SN对SH-SY5Y细胞的6-OHDA神经毒性的双重作用是通过抑制蛋白酶体活性实现的,而其对神经细胞的保护作用和MAPK途径相关。
- 周明徐胜利陈彪
- 关键词：Α-突触核蛋白蛋白酶体帕金森病
- 共聚物-1直接免疫MPTP模型小鼠保护多巴胺能神经元
- 2010年
- 目的探讨共聚物-1(copolymer-1,Cop-1)直接免疫对小剂量1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)持续注射C57BL/6J小鼠黑质多巴胺(dopamine,DA)神经元保护作用的影响。方法雄性C57BL/6J小鼠分为MPTP模型组、造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组、Cop-1免疫组和正常对照组。MPTP模型组动物仅接受MPTP注射,造模后Cop-1免疫组在MPTP连续注射7d后接受Cop-1免疫;造模时Cop-1免疫组在第1次MPTP注射后立即接受Cop-1免疫;造模前Cop-1免疫组在接受Cop-1免疫7d后开始注射MPTP,Cop-1免疫组仅接受Cop-1抗原免疫,正常对照组动物仅接受0.9%氯化钠注射液注射。MPTP连续注射24d后处死动物,取脑、脾。脑切片酪氨酸羟化酶免疫组化定量分析黑质DA神经元数;高效液相色谱法(high performance liquidchrom atography,HPLC)分析纹状体DA及其代谢产物含量;苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察脾病理学变化;分离造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组和Cop-1免疫组动物脾脏并进行Cop-1致敏淋巴细胞培养。结果与正常对照组相比,MPTP模型组、造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组动物脾脏HE染色未见明显差异。与Cop-1免疫组相比,造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组均出现大量Cop-1致敏淋巴细胞。黑质DA神经元定量分析显示,与正常对照组比较,持续低剂量MPTP注射使模型对照组黑质DA神经元减少了65.13%,造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组黑质DA神经元分别减少了31.68%、27.55%和28.29%,各组DA神经元数明显高于模型对照组(P=0.000,P=0.000,P=0.000)。HPLC法测定纹状体内DA及其代谢产物含量结果显示,与正常对照组相比,模型组DA及其代谢产物含量明显减少。造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造�
- 曹云霞吴燕川徐胜利周明张宇新
- 关键词：帕金森病免疫脾损伤
- 尼古丁抑制6-羟基多巴胺损伤诱导的纹状体炎症反应被引量：2
- 2008年
- 目的 探讨尼古丁对6羟丛多巴胺（6OHDA）损伤诱导的纹状体炎症反应的抑制作用。方法雄性SD大鼠分别接受尼古丁（0．2mg／kg或2．0mg／kg）或生理盐水腹膜腔内注射。注射7d后，尼古丁高剂量治疗组、低剂量治疗组和模型对照组大鼠右侧纹状体内分别接受6-OHDA 20ug注射。免疫组织化学定量分析黑质多巴胺能神经元和纹状体CD3、CD4、CD8阳性淋巴细胞数。免疫荧光定量分析纹状体小胶质细胞对6-OHDA损伤的反应。结果6-OHDA注射4周后，模型对照组注射侧黑质酪氨酸羟化酶免疫阳性细胞为相应对照侧的25．27％；而在尼古丁低剂量和高剂带组注射侧分别为相应对照侧的64．97％和67．24％。各组各时间点6-OHDA注射侧纹状体有明显的T淋巴细胞浸润，其中约80％为CD8阳性T淋巴细胞。尼古丁治疗组浸润的T淋巴细胞数较模型对照组明显减少，而CD3和CD4阳性细胞占总T淋巴细胞的比例在各组和各时间点基本一致，尼古丁治疗组和模型对照组比较，差异无统计学意义。纹状体小胶质细胞特异标记物IBA1免疫荧光定带结果显示，尼古丁处理可显著抑制6OHDA损伤诱导的小胶质细胞激活。结论尼古丁可抑制6OHDA损伤诱导的炎症反应，而尼古丁对炎症反应的抑制作用可能是其保护多巴胺能神经元的机制之一。
- 丁晖徐胜利周明陈彪
- 关键词：尼古丁帕金森病炎症
- 尼古丁抑制6-羟基多巴胺损伤诱导的T淋巴细胞浸润被引量：1
- 2008年
- 目的采用6-羟基多巴胺（6-OHDA）部分损伤大鼠帕金森病模型，探讨尼古丁保护多巴胺能神经元的机制。方法雌性SD大鼠60只采用随机数字表法分为三组：尼古丁高剂量治疗组（尼古丁2．0mg／kg腹膜腔内注射1、低剂量治疗组（尼古丁0．2mg／kg腹膜腔内注射1及模型对照组（生理盐水腹膜腔内注射1，每组20只。注射7d后，分别接受单侧纹状体内6-OHDA20μg注射，制作帕金森病模型。免疫组织化学及体视学方法定量分析黑质多巴胺能神经元和纹状体CD3、CD4和CD8阳性淋巴细胞数量。结果6-OHDA注射4周后，模型对照组注射侧黑质酪氨酸羟化酶（TH）免疫阳性细胞为对照侧的25．27％；而在尼古丁低剂量和高剂量组，注射侧的TH免疫阳性细胞分别为相应对照侧的64．97％和67．24％。各组各时间点6-OHDA注射侧纹状体有明显的T淋巴细胞浸润。尼古丁治疗组浸润的T淋巴细胞数较模型对照组明显减少，差异有统计学意义（P〈0．051，而CD4和CD8阳性细胞占总T淋巴细胞的比例在各组和各时间点基本一致。尼古丁治疗组和模型对照组比较差异无统计学意义（P〉0．051。结论尼古丁可抑制6-OHDA损伤诱导的T淋巴细胞浸润，对抗6-OHDA神经细胞毒性，保护多巴胺能神经元。
- 周明徐胜利陈彪
- 关键词：尼古丁帕金森病6-羟基多巴胺T淋巴细胞
- 共聚物-1对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用
- 2010年
- 目的探讨共聚物-1(Cop-1)免疫或致敏淋巴细胞移植对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺(DA)神经元的保护作用。方法选用雄性C57BL/6J小鼠随机分为Cop-1/BSA免疫组、Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植组、MPTP模型组和正常对照组。Cop-1/BSA免疫组在注射MPTP之前10天接受Cop-1/BSA抗原免疫;Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植组动物在MPTP末次注射后,立即接受Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植;MPTP模型组动物仅接受MPTP注射;正常对照组动物仅接受生理盐水注射。MPTP末次注射7天后处死动物,取脑。酪氨酸羟化酶免疫组化及体视学方法定量分析黑质DA神经元数。结果 MPTP注射显著地减少了模型动物黑质DA神经元数量。Cop-1免疫和Cop-1致敏淋巴细胞移植明显增加了MPTP模型动物黑质DA神经元数,对黑质DA神经元有保护作用。BSA免疫或BSA致敏淋巴细胞移植则没有表现出这种保护作用。结论在C57BL/6J小鼠,Cop-1免疫和Cop-1致敏淋巴细胞移植可有效对抗MPTP毒性,保护黑质DA神经元。
- 曹云霞宣琪周明徐胜利
- 关键词：帕金森病淋巴细胞免疫组织化学
- 补阳还五汤加减对高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用被引量：11
- 2008年
- 目的探讨补阳还五汤加减对高眼压大鼠模型视网膜神经节细胞的保护作用。方法90只SD大鼠随机分为假手术组(n=30)和高眼压模型组(n=60)。造模成功大鼠56只被随机分为治疗组(n=28)和对照组(n=28)。造模后4周,模型治疗组给予补阳还五汤加减浓缩剂灌胃,其余2组灌服等剂量生理盐水,每组随机选取10只动物经上丘注射50μL体积分数10%DiI。用药后4周行视网膜神经节细胞的TUNEL染色、DiI阳性细胞计数、节细胞凋亡率的检测。结果假手术组视网膜无TUNEL阳性细胞,模型治疗组及模型对照组视网膜均存在明显的TUNEL阳性细胞。假手术组视网膜神经节细胞数为1685·49±583.47,对照组为405.61±229.88,而治疗组为1069.74±387.53。治疗组明显多于对照组而少于假手术组。假手术组视网膜神经节细胞凋亡率为(7.32±6.89)%,对照组为(41.23±8.76)%,治疗组为(23.12±10.11)%.治疗组明显低于对照组而高于假手术组。结论补阳还五汤加减可通过抑制青光眼大鼠视网膜神经节细胞凋亡而发挥视神经保护作用。
- 尹连荣徐胜利
- 关键词：补阳还五汤青光眼视网膜神经节细胞凋亡
