您的位置: 专家智库 > >

国家自然科学基金(30671936)

作品数:9 被引量:36H指数:4
相关作者:高美华石学香冯翠萍王秋波李先平更多>>
相关机构:青岛大学青岛市疾病预防控制中心青岛市市立医院更多>>
发文基金:国家自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 9篇中文期刊文章

领域

  • 8篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 9篇CD59
  • 4篇细胞
  • 3篇移植瘤
  • 3篇卵巢
  • 3篇卵巢癌
  • 3篇卵巢癌细胞
  • 3篇裸鼠
  • 3篇裸鼠移植
  • 3篇裸鼠移植瘤
  • 3篇癌细胞
  • 3篇A2780
  • 3篇补体
  • 2篇逆转
  • 2篇逆转录
  • 2篇逆转录病毒
  • 2篇逆转录病毒载...
  • 2篇转录
  • 2篇介导
  • 2篇MEDIAT...
  • 2篇病毒载体

机构

  • 7篇青岛大学
  • 2篇青岛市疾病预...
  • 1篇青岛市市立医...

作者

  • 7篇高美华
  • 3篇石学香
  • 3篇冯翠萍
  • 2篇王秋波
  • 1篇张蓓
  • 1篇任书荣
  • 1篇臧金林
  • 1篇朱新红
  • 1篇李先平

传媒

  • 2篇青岛大学医学...
  • 2篇Cellul...
  • 1篇中国免疫学杂...
  • 1篇免疫学杂志
  • 1篇高技术通讯
  • 1篇细胞与分子免...
  • 1篇现代生物医学...

年份

  • 2篇2010
  • 4篇2009
  • 3篇2008
9 条 记 录,以下是 1-9
排序方式:
CD59-siRNA对人卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的作用被引量:1
2010年
目的探讨针对CD59的siRNA(CD59-siRNA)对人卵巢癌裸鼠移植瘤CD59的沉默效应及其抑瘤作用。方法采用脂质体转染法将CD59干扰质粒(T组)和空质粒(V组)转染A2780细胞,获得稳定表达细胞株,将T组、V组A2780细胞和未转染(C组)的A2780细胞分别接种于裸鼠皮下建立肿瘤模型,通过绘制肿瘤生长曲线、RT-PCR和免疫组织化学法研究其抑瘤效应和对CD59基因及蛋白的沉默效应。结果与V组和C组比较,T组肿瘤体积和质量明显减小(F=301.88、5.39,q=4.01~30.41,P〈0.05),CD59基因及蛋白表达减少(F=817.77、247.71,q=26.59~52.25,P〈0.05)。结论特异性沉默CD59基因的siRNA表达载体可以明显抑制CD59的表达及卵巢癌在体内的生长。
冯翠萍高美华
关键词:卵巢肿瘤RNA干扰
人CD59 RNAi逆转录病毒载体系统的构建与鉴定被引量:4
2009年
目的利用siRNA表达载体法构建并筛选携带针对CD59基因pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体及稳定产毒的细胞克隆。方法用DNA重组技术,将3条60bp能转录产生靶向CD59小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列定向克隆入逆转录病毒载体pSUPER retro,脂质体法转染包装细胞系Phoenix A,建立产生逆转录病毒的细胞克隆。结果重组载体经PCR及限制性内切酶酶切鉴定初步成功后测序序列正确;重组载体转染包装细胞,可表达绿色荧光蛋白,表明包装成功。结论特异性沉默CD59基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体以及稳定产毒的细胞系构建成功,为后续进行肿瘤细胞的研究奠定了基础,可望为肿瘤治疗开辟新途径。
石学香高美华臧金林
关键词:RNA双链抗原CD59转染逆转录病毒载体
Activity after Site-Directed Mutagenesis of CD59 on Complement-Mediated Cytolysis被引量:8
2008年
CD59 may inhibit the cytolytic activity of complement by binding to C8/C9 and protect host cell membranes against homologous membrane attack complex (MAC). However, CD59 is widely overexpressed on tumor cells, which has been implicated in tumorigenesis. The active site of CD59 relative to MAC is still confused. As reported the MAC binding site is located in the vicinity of a hydrophobic groove on the membrane distal face of the protein centered around residue W40. Here two site-directed mutagenesis were performed by overlapping extension PCR to delete residue W40 site (Mutant 1, M1) or to change C39W40K41 to W39W40W41 (Mutant 2, M2). Then we constructed mutant CD59 eukaryotic expression system and investigated their biological function on CI-IO cells compared with wild-type CD59. Stable populations of CHO cells expressing recombinant proteins were screened by immunotechnique. After 30 passages culturing, proteins could be tested. Dye release assays suggest that M1CD59 loses the activity against complement, while M2CD59 increases the anti-complement activity slightly. Results indicate that W40 of human CD59 is important to its activity, and prohibition of this site may be a potential way to increase complement activity and to treat tumors. Cellular & Molecular Immunology.
Xinhong ZhuMeihua GaoShurong RenQiubo WangCunzhi Lin
关键词:CD59COMPLEMENT
靶向CD59的siRNA抑制人卵巢癌细胞A2780裸鼠移植瘤的实验研究(英文)
2009年
目的:通过体内动物实验研究CD59-siRNA对卵巢癌移植瘤CD59的沉默效应及其抑瘤作用,探讨CD59在肿瘤免疫逃逸中的作用。方法:采用脂质体转染法将CD59干扰质粒(T组)和空质粒(V组)转染A2780细胞,获得稳定表达细胞株,将前两组A2780细胞和未转染(C组)的A2780细胞分别接种于裸鼠皮下建立肿瘤模型,通过绘制肿瘤生长曲线、RT-PCR和Western Blot研究其抑瘤效应及对CD59的沉默效应。结果:肿瘤生长曲线显示,与对照组相比,CD59干扰质粒转染组肿瘤生长明显受抑制(P<0.05)。RT-PCR和Western Blot结果表明,干扰组的CD59mRNA及CD59蛋白与对照组相比显著降低(P<0.05)。结论:动物实验表明,特异性沉默CD59基因的siRNA表达载体可以明显抑制CD59的表达及卵巢癌在体内的生长,进一步说明了CD59在肿瘤免疫逃逸中的作用。
冯翠萍高美华
关键词:CD59A2780裸鼠
CD59 Silencing via Retrovirus-Mediated RNA Interference Enhanced Complement-Mediated Cell Damage in Ovary Cancer被引量:13
2009年
CD59, belonging to membrane complement regulatory proteins (mCRPs), inhibits the cytolytic activity of complement and is over-expressed in solid cancers, including ovary cancer. The aim of the present study was to construct recombinant retrovirus encoding shRNA targeted human CD59 and infect A2780 cells in order to investigate the relationship between decreased CD59 expression and tumorigenesis of ovary cancer, siCD59 and siCD59-C were successfully constructed and identified by PCR, restriction endonuclease analyses and DNA sequencing, respectively. The siCD59 was able to efficiently infect A2780 cells, which was confirmed by Western blotting. When incubated with fresh normal human serum (8%, v/v) for 1 h at 37℃, the cell viability was decreased and cell damage was increased in siCD59 infected A2780 cells compared to siCD59-C infected cells. This led to the activation of caspase-3. The apoptosis in siCD59 infected cells was shown with hypercondensed nuclei using Hoechst staining. Meanwhile, the weight of ovary tumor graft in nude mice was significantly decreased in siCD59 group compared to that of siCD59-C group. And the expression of CD59 protein in tumor tissue in siCD59 group was significantly decreased. These results suggested that CD59 silencing in ovary cancer cells v/a retrovirusmediated RNAi can enhance complement-mediated cell damage, inhibiting growth of ovary cancer. CD59 might be a potential target for gene therapy in ovary cancer. Cellular & Molecular Immunology.
Xuexiang ShiBei ZhangJinlin ZangGuoying WangMeihua Gao
关键词:CD59COMPLEMENT
siRNA特异沉默卵巢癌细胞CD59基因的裸鼠移植瘤研究被引量:2
2009年
目的:通过体内动物实验研究CD59-siRNA对卵巢癌细胞CD59的沉默效应及抑瘤作用,探讨CD59在肿瘤免疫逃逸中的作用。方法:将转染CD59干扰质粒的A2780细胞(T组)、转染空质粒的A2780细胞(V组)及未转染的A2780细胞(C组)分别接种于裸鼠皮下,通过绘制肿瘤生长曲线,裸鼠移植瘤组织切片CD59 mRNA原位杂交及CD59蛋白的免疫组化研究其抑瘤效应及对CD59的沉默效应。结果:肿瘤生长曲线显示,与对照组相比,CD59干扰质粒转染组肿瘤生长明显受抑制(P<0.05)。原位杂交及免疫组化结果表明,干扰组的CD59 mRNA及CD59蛋白与对照组相比显著降低(P<0.05)。结论:裸鼠体内实验表明,特异性沉默CD59基因的siRNA表达载体可以明显抑制CD59的表达,增加了卵巢癌细胞对补体攻击的敏感性,从而抑制卵巢癌在体内的生长,进一步说明了CD59在肿瘤免疫逃逸中的作用。
冯翠萍高美华
关键词:CD59A2780裸鼠
siRNA介导的RNAi降低了CD59对补体溶破的抵抗作用被引量:9
2008年
目的:构建针对人CD59基因的siRNA表达载体并筛选稳定细胞系,观察CD59基因改变后对补体溶破的抵抗作用的变化,探讨CD59在肿瘤细胞免疫逃逸及相关信号转导通路中的作用。方法:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,构建含特异性CD59基因的重组载体,脂质体法转染A2780细胞,G418筛选建立稳定抑制的细胞克隆,RT-PCR和Western blot检测转染细胞中CD59基因的表达抑制效果,染料释放试验判断CD59基因抑制后对补体溶破的抵抗作用的影响。结果:重组载体经PCR及限制性内切酶酶切鉴定初步成功后送测序,结果表明序列正确;重组载体转染A2780细胞,可表达绿色荧光蛋白,经G418筛选,得到抗性细胞克隆,RT-PCR和Western blot表明,稳定转染后CD59基因的mRNA和蛋白水平降低,染料释放试验表明CD59基因受抑制后对补体溶破的抵抗作用降低。结论:特异性沉默CD59基因的siRNA表达载体以及稳定抑制的细胞系构建和筛选成功,CD59基因抑制后对补体溶破的抵抗作用降低,为后续进行肿瘤细胞的研究奠定了基础。
石学香高美华李先平张蓓王秋波
关键词:SHRNACD59A2780补体
CD59活性位点相关性基因突变的构建与表达被引量:1
2008年
构建了野生型和突变型 CD59重组质粒,建立了高效真核表达系统,探讨了 W40位点的生物学活性。采用基因点突变技术使 CD59 W40基因位置缺失(突变1,M1)及C39W40K41→W39W40W41(突变2,M2),重叠延伸 PCR(overlap extension PCR)定点诱变扩增突变基因,重组入真核表达质粒 pIRES,利用阳离子脂质体(Lipfectamine2000)将重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)进行表达。酶切鉴定及序列测定证实成功构建了 pIRES-M1CD59、pIRES-M2CD59和 pIRES-WTCD59,突变基因约500bp。G418筛选出了 CHO 转染细胞的稳定细胞克隆,免疫荧光、ELISA 检测筛选 M1CD59、M2CD59和 WTCD59蛋白高表达株,连续传代30代有高表达;补体溶细胞反应显示与野生型 CD59相比,突变型 M1CD59失去对补体的抑制功能,而 M2CD59抗补体活性略增高。证实 CD59的 W40位点对其功能具有重要作用,封闭此位点可提高补体活性,有望用于肿瘤治疗。
朱新红高美华任书荣王秋波林存智
关键词:CD59基因突变真核表达重叠延伸PCR补体
逆转录病毒载体介导的RNAi技术抑制HeLa细胞CD59表达及功能的研究被引量:3
2010年
目的构建针对CD59基因的RNAi逆转录病毒载体并感染HeLa细胞,观察CD59基因抑制后对补体溶破的抵抗作用的变化。方法应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,构建3条含特异性CD59基因的重组载体,并以无关序列作为对照,脂质体法转染包装细胞并感染HeLa细胞,RT-PCR和ELISA检测靶细胞上CD59基因的抑制效果,染料释放试验检测CD59功能的改变。结果重组载体经鉴定正确,转染包装细胞成功,RT-PCR和ELISA结果显示能显著抑制CD59基因的表达,染料释放试验显示干扰组对补体溶破的抵抗作用降低。结论特异性沉默CD59基因的逆转录病毒载体构建和筛选成功,并能抑制CD59基因的表达及减弱CD59对补体的抑制功能,为后续进行肿瘤细胞的研究奠定了基础,可望为肿瘤的免疫治疗开辟新途径。
石学香高美华方建红
关键词:SHRNACD59逆转录病毒载体补体
共1页<1>
聚类工具0