国家自然科学基金(30671993)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：祝恒成刘修恒陶涛高瑞辉但超更多>>
- 相关机构：武汉大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠RelB基因siRNA慢病毒载体的构建及鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的构建RelB基因siRNA慢病毒载体及检测其沉默效率。方法针对已经筛选确定的RelB基因RNAi有效靶序列，合成5对靶序列的Oligo DNA，退火形成双链DNA，与经XhoI和KspAI双酶切后的pLentiLox3．7质粒载体[含u6启动子和绿色荧光蛋白（GFP）]连接形成pLentiLox—sh—RelB慢病毒载体，PCR筛选阳性克隆，酶切测序鉴定。然后用脂质体包裹转染小鼠RM—1前列腺癌细胞，运用Western blot法检测小鼠前列腺癌细胞RelB蛋白的表达，以鉴定sh—RelB的沉默效率。用pVSYG，plp1，plp2慢病毒包装系统质粒在磷酸钙介导F共转染包装细胞293T细胞，包装产生慢病毒，以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果聚合酶链反应（PCR）和测序证实，成功构建RelB—shRNA的慢病毒载体pLentiLox—sh—RelB。Western blot鉴定最有效的siRNA序列为5’-TGTCGTCAGGATCTGCTTC-3’，病毒液过滤后测定滴度为8×10^10 pfu／L。结论成功构建小鼠RelB基因RNAi慢病毒载体。
- 陶涛祝恒成刘修恒
- 关键词：SIRNA慢病毒载体
- 表达IκBα突变体的树突状细胞对大鼠移植肾存活时间的影响
- 2009年
- 目的观察IκBα突变体基因修饰的供体树突状细胞（IκBαM-DC）对大鼠移植肾存活时间的影响。方法利用重组腺病毒载体将IκBαM基因转染WF大鼠骨髓DC，流式细胞仪检测DC共刺激分子CD80、CD86表达。以WF大鼠为供体，Lewis大鼠为受体，行同种肾移植。术前7d，受体输注供体IκBαM—DC作为IκBαM组，未输注IκBαM—DC的受体作为对照组，观察移植肾存活时间和术后肾功能变化。术后第14天检测受体T细胞对供体成熟DC及第三方大鼠成熟DC的反应性。结果IκBαM明显抑制DC共刺激分子CD80、CD86表达。IκBαM组受体鼠移植肾存活时间为（32．5±7．8）d，较对照组移植肾存活时间（8．5±1．7）d明显延长（P〈0．01）；而其术后7d血清肌酐为（57．34-8．2）p^mol／L，较对照组血清肌酐（498．0±46．3）μmol／L明显减低。肾移植术后，IκBαM组受体T细胞对供体成熟DC反应明显低于对照组，而对第三方大鼠成熟DC的反应性与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论表达IκBα突变体的供体树突状细胞能诱导受体大鼠T细胞对供体抗原的免疫低反应，显著延长大鼠移植肾存活时间。
- 祝恒成刘修恒陶涛高瑞辉但超
- 关键词：树突状细胞基因肾移植
- 小鼠腹部心脏移植模型的建立及技术改进被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨小鼠腹部心脏移植模型的建立及技术改进。方法:SPF级近交系雄性BALB/c、C57小鼠各50只,体重均在20-30g,C57小鼠作为供体,BALB/c小鼠为受体,利用改进方法行供体升主动脉与受体腹主动脉,供体肺动脉与受体下腔静脉吻合术建立小鼠腹部心脏移植模型,术后观察移植心脏的存活时间和急性排斥反应情况。结果:手术成功率80%,总手术时间(90±10)min;受体手术时间(72±3)min;动脉吻合时间(21.5±2.5)min;静脉吻合时间(20.5±5.5)min。移植术后未用任何免疫抑制剂,小鼠供心存活时间为(7.9±0.7)d,供心停跳后,移植心脏病理排斥反应分级为Ⅱ-Ⅲ级。结论:改进的腹部心脏移植方法简单,手术时间短,手术成功率高。
- 高瑞辉祝恒成刘修恒刘之光但超
- 关键词：心脏移植腹腔小鼠
- 姜黄素诱导的耐受性树突状细胞及其机制被引量：2
- 2007年
- 目的探讨姜黄素(Cur)诱导耐受性树突状细胞(DC)的效果及其机制。方法分别用不同浓度Cur(0、10、20和30μmol/L)作用于Wistar大鼠来源的不成熟DC,流式细胞仪分析其表型。再以30μmol/L的Cur作用于不成熟DC,加或不加脂多糖(LPS)刺激,流式细胞仪检测其吞噬葡聚糖的能力,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定DC分泌白细胞介素12(IL-12)的能力,Western印迹法检测DC中核因子κB(NF-κB)p65和RelB核转位,NF-κB DNA结合ELISA和荧光素酶报告基因检测核内NF-κB活性,混合淋巴细胞反应检测其刺激Lewis大鼠T淋巴细胞增殖的能力。结果Cur能显著抑制DC共刺激分子CD80、CD86、CD40的表达,呈剂量依赖性,当Cur的浓度达30μmol/L时,其共刺激分子的表达与不成熟DC比较,差异无统计学意义。DC在LPS刺激下(LPS组),吞噬葡聚糖的DC占(36.6±7.2)%,IL-12的分泌量达(415.9±42.7)pg/ml,其核内RelB及NF-κB p56高表达,RelB DNA结合活性和NF-κB p65 DNA结合活性分别为0.65±0.08和0.74±0.07,报告基因荧光素酶活性是对照细胞的435%,该DC有较强的刺激同种T淋巴细胞增殖的能力。而先以30μmol/L Cur作用于DC,然后再加入LPS者(Cur+LPS组),吞噬葡聚糖的DC占(78.6±14.2)%,明显高于LPS组(P<0.01);IL-12的分泌量为(97.5±19.6)pg/ml,明显低于LPS组(P<0.01);其核内RelB及NF-κB p56低表达;RelB DNA结合活性和NF-κB p65 DNA结合活性分别为0.15±0.06和0.29±0.06.均明显低于LPS组(P<0.01);报告基因荧光素酶活性是对照细胞的197%,明显低于LPS组(P<0.01);该DC刺激同种T淋巴细胞增殖的能力明显弱于LPS组。结论Cur诱导产生耐受性DC可能是通过抑制DC中NF-κB的活化实现的。
- 祝恒成刘修恒陶涛李壮志周江桥胡云飞
- 关键词：姜黄素免疫耐受树突细胞NF-ΚB
