国家自然科学基金(30371518) 作品数:14 被引量:52 H指数:4 相关作者: 罗清礼 何为民 唐莉 唐建 刘春玲 更多>> 相关机构: 四川大学华西医院 贵阳市第一人民医院 爱尔眼科医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家教育部博士点基金 四川省科技攻关计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
TGF-β1诱导CD90^+和CD90^-眼眶成纤维细胞亚群肌成纤维细胞转化的研究 被引量:3 2005年 目的依据培养的甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞是否表达CD90分为两个亚群,分离这两个细胞亚群,分别进行肌成纤维诱导,研究它们在眼外肌纤维化中所起的不同作用。方法免疫磁分离法分离CD90+和CD90-的眼眶成纤维细胞,TGF-β1诱导CD90+和CD90-成纤维细胞亚群转化为肌成纤维细胞(MFB),免疫细胞化学法检测代表MFB标志的平滑肌动蛋白α-SMA的表达情况。结果在TGF-β1的作用下,48 h后部分CD90+细胞开始出现α-SMA弱表达,4 d后大部分细胞呈阳性。CD90-细胞不表达α-SMA。结论CD90+与CD90-眼眶成纤维细胞具有不同的功能,CD90+细胞群具有转化为MFB的潜能,与眼外肌纤维化和细胞外基质积聚有关;CD90-成纤维细胞不能转化为MFB。 唐莉 罗清礼 廖咏川 刘东劲 骆洪梅 唐建关键词:甲状腺相关性眼病 肌成纤维细胞 转化生长因子Β1 CD90 甲状腺相关眼病及正常人眼眶成纤维细胞与前脂肪细胞培养及分化诱导 被引量:2 2007年 目的研究不同浓度3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、胰岛素、地塞米松对培养的甲状腺相关眼病(TAO)及正常人眼眶成纤维细胞与前脂肪细胞的诱导作用。方法原代培养13个TAO与7个正常人眼眶成纤维细胞与前脂肪细胞;透射电镜检查超微结构;油红O染色,光度法检测不同浓度地塞米松、胰岛素、IBMX对脂肪细胞转化率和细胞内脂肪含量的影响。结果培养了TAO与正常人眼眶成纤维细胞与前脂肪细胞,并诱导前脂肪细胞向脂肪细胞转化,获得最佳的诱导浓度地塞米松0.1μmol/L、胰岛素10μg/ml、IBMX0.25mmol/L。结论TAO患者与正常人眼眶成纤维细胞和前脂肪细胞在形态学上未见明显差异,但前脂肪细胞能诱导分化为脂肪细胞,眼眶前脂肪细胞在TAO的发病中可能起重要作用。 张学进 罗清礼 何为民 刘春玲 李涛关键词:甲状腺相关眼病 前脂肪细胞 细胞培养 分化 地塞米松对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响 被引量:8 2007年 目的探讨地塞米松对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞(OF)细胞间粘附分子(ICAM-1)表达的影响。方法取10例TAO患者和5例正常对照的眼眶脂肪组织与眼外肌,体外培养OF,在培养基中分别加入10-6m o l/L地塞米松、300 U/mL干扰素-γ(IFN-γ)或10-6m o l/L地塞米松与300 U/mL IFN-γ的混合液,作用72 h,用流式细胞仪检测OF上ICAM-1的表达水平。结果体外培养的OF均表达ICAM-1,TAO患者的表达量高于正常对照者(P<0.05)。IFN-γ促进OF表达ICAM-1,地塞米松不仅抑制OF表达ICAM-1,而且能抑制IFN-γ诱导的ICAM-1表达。结论TAO患者OF表达ICAM-1增强可能是促进眶内炎症发生的原因之一,糖皮质激素发挥治疗作用的可能机制之一是其抑制OF表达ICAM-1以及IFN-γ诱导的ICAM-1表达。 何为民 罗清礼 曾继红关键词:甲状腺相关眼病 细胞间粘附分子 重组人瘦素蛋白对甲状腺相关眼病眼眶前脂肪细胞增殖和移行的影响 被引量:2 2008年 目的探讨重组人瘦素蛋白(rh-leptin)对体外培养的甲状腺相关眼病(TAO)患者眼眶前脂肪细胞增殖、移行的影响。方法体外培养TAO眼眶前脂肪细胞,鉴定并传代,用10、50、100、500 mg/L质量浓度的rh-leptin处理,MTT法检测细胞增殖情况,划线法检测细胞移行情况,与空白对照组(0 mg/L rh-leptin)比较。结果500 mg/L的rh-leptin能明显促进眼眶前脂肪细胞的增殖,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),但10~100 mg/L组未能观察到具有统计学意义的促增殖效果;10~500 mg/L的rh-leptin能促进眼眶前脂肪细胞的移行,其中50~500 mg/L组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论rh-leptin能够促进眼眶前脂肪细胞的增殖、移行,提示瘦素可能参与了TAO的发病机制。 唐建 罗清礼 何为民关键词:甲状腺相关眼病 瘦素 前脂肪细胞 增殖 TNF-α对甲状腺相关眼病分化后眼眶脂肪细胞瘦素mRNA表达的影响 被引量:4 2007年 目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的甲状腺相关眼病(TAO)分化后眼眶脂肪细胞瘦素mRNA表达的影响。方法取TAO患者行眼眶减压术的眼眶脂肪组织,体外培养眼眶前脂肪细胞,诱导分化,采用不同质量浓度、不同作用时间的TNF-α处理分化后的脂肪细胞,实时荧光定量PCR检测瘦素mRNA的表达。结果体外培养的眼眶前脂肪细胞在诱导分化刺激下,分化为脂肪细胞;0.5~50ng/mL的TNF-α作用24h,瘦素mRNA表达随质量浓度的增大而下降,呈量效依赖性;5ng/mL的TNF-α作用12~48h能下调瘦素mRNA的表达,呈时效依赖性;与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论TNF-α对TAO分化后眼眶脂肪细胞的瘦素mRNA表达有下调作用。 唐建 罗清礼 何为民关键词:甲状腺相关眼病 瘦素 脂肪细胞 实时荧光定量PCR IL-6对甲状腺相关眼病分化后眼眶脂肪细胞瘦素mRNA表达的影响 2008年 目的探讨白介素-6(interleukin-6,IL-6)对体外培养的甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalm opathy,TAO)分化后眼眶脂肪细胞瘦素mRNA表达的影响。方法取TAO患者行眼眶减压术的眼眶脂肪组织,体外培养眼眶前脂肪细胞,诱导分化,采用0.5μg·L-1、5μg·L-1和50μg·L-1的IL-6处理分化后的脂肪细胞24h(设空白对照组),以及5μg·L-1的IL-6分别处理分化后的脂肪细胞0h、12h、24h、48h,实时荧光定量PCR检测瘦素mRNA的表达。结果体外培养的眼眶前脂肪细胞在诱导分化刺激下,分化为脂肪细胞;0.5μg·L-1、5μg·L-1和50μg·L-1的IL-6作用24h,瘦素mRNA表达分别为1.61±0.53、0.88±0.62、0.21±0.56,随质量浓度的增大而下降,呈量效依赖性,但与对照组(1.84±0.82)相比,差异没有统计学意义(P>0.05);5μg·L-1的IL-6作用12h、24h、48h,瘦素mRNA表达分别为1.43±0.46、1.05±0.62、0.20±0.75,随时间的延长而下降,呈时效依赖性,但与0h组(1.73±0.31)相比,差异没有统计学意义(P>0·05)。结论IL-6对TAO分化后眼眶脂肪细胞的瘦素mRNA表达有下调作用,但无统计学意义。 唐建 罗清礼 唐莉关键词:甲状腺相关眼病 白介素-6 瘦素 脂肪细胞 实时荧光定量PCR IFN-γ、IL-6对眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响 被引量:2 2006年 目的探讨IFN-γ和IL-6对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响。方法体外培养TAO患者和正常人眼眶成纤维细胞,在培养基中分别加入不同浓度的IFN-γ和IL-6,用流式细胞仪检测眼眶成纤维细胞ICAM-1的表达水平。结果培养的TAO患者和正常对照眼眶成纤维细胞均表达ICAM-1,患者的表达量高于正常对照者,具有显著统计学差异(P<0.05)。IFN-γ以剂量依赖方式上调ICAM-1的表达水平,对患者的上调作用更强;IL-6对眼眶成纤维细胞表达ICAM-1没有明显影响。结论IFN-γ通过诱导眼眶成纤维细胞ICAM-1的表达在TAO的病理发生中起重要作用。 何为民 罗清礼 曾继红 陈清英关键词:甲状腺相关眼病 眼眶成纤维细胞 白介素-6 细胞间黏附分子 瘦素基因在甲状腺相关眼病眶脂肪及体外分化眶脂肪细胞中的表达 被引量:4 2014年 目的探讨瘦素基因在甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)患者和正常人眼眶脂肪组织和体外诱导分化的眼眶脂肪细胞中的表达及意义。方法Trizol法提取8例(8眼)TAO患者和13例(13眼)正常人眼眶脂肪组织总RNA,采用实时荧光定量PCR检测瘦素mRNA的表达。体外培养TAO患者与正常人眼眶前脂肪成纤维细胞并进行诱导分化,实时荧光定量PCR检测分化后脂肪细胞中瘦素mRNA的表达。结果 TAO患者眼眶脂肪组织中瘦素mRNA的相对表达量为2.05±0.31(已排除年龄、性别和身体质量指数可能的影响),正常人眼眶脂肪组织中瘦素mRNA的相对表达量为0.69±0.24,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。体外培养的TAO患者和正常人眼眶前脂肪成纤维细胞在诱导分化刺激下,均能分化为脂肪细胞;TAO患者分化第10天眼眶脂肪细胞的瘦素mRNA的相对表达量为1.55±0.44,正常人分化第10天眼眶脂肪细胞的瘦素mRNA的相对表达量为0.66±0.21,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论瘦素基因在TAO患者眼眶脂肪组织和体外诱导分化的眼眶脂肪细胞中的表达均明显高于正常人,提示瘦素基因可能参与了TAO的发病机制。 唐建 罗清礼关键词:甲状腺相关眼病 瘦素 实时荧光定量PCR 重组人瘦素蛋白对甲状腺相关眼病眼眶前脂肪细胞诱导分化的影响 被引量:1 2010年 目的探讨重组人瘦素蛋白对体外培养的甲状腺相关眼病(TAO)患者眼眶前脂肪细胞诱导分化的影响。方法体外培养TAO患者眼眶前脂肪细胞,鉴定并传代,设加入不同质量浓度的重组人瘦素蛋白为瘦素组,另设对照组,进行诱导分化及油红染色,图像分析系统计算分化后脂肪细胞内脂质/核的平均积分光密度(IOD)值。结果体外培养的前脂肪细胞经免疫组织化学染色鉴定为间叶来源。不同质量浓度瘦素组分化后脂肪细胞内脂质/核的平均IOD值呈剂量依赖性降低;50、100、500μg/L瘦素组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论重组人瘦素蛋白能够抑制眼眶前脂肪细胞的分化和细胞内脂质的形成,提示瘦素可能在TAO的发病中起反馈调节作用。 唐建 罗清礼 何为民关键词:甲状腺相关眼病 瘦素 前脂肪细胞 细胞分化 TAO眼眶成纤维细胞上CCR1的表达 被引量:3 2011年 目的研究趋化因子受体CCR1在甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)的眼眶成纤维细胞(orbital fibroblasts,OFs)上的表达,探讨其在发病机制中的作用。方法采用免疫组织化学SP法检测25例TAO患者和10例正常对照的眼眶组织中OFs上CCR1的表达情况,并将CCR1表达水平与TAO患者的临床活动性评分(clinical activity scores,GAS)进行相关性分析。结果 TAO患者的OFs明显表达CCR1,CCR1的表达阳性率为72%,正常人的OFs表达CCR1不明显或呈弱阳性,差异具有统计学意义(P<0.05)。TAO患者OFs上CCR1的表达与GAS无明显相关关系(r=0.048,P>0.05)。结论趋化因子受体CCR1可表达于TAO的OFs上,其在TAO的发病机制中可能发挥重要作用。 刘春玲 张学进 郭波 杨俊峰 罗清礼关键词:CCR1 甲状腺相关眼病 成纤维细胞 免疫组化