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国家自然科学基金(30671858)

作品数:6 被引量:24H指数:3
相关作者:孟继鸿董晨戴星周镇先董敏更多>>
相关机构:东南大学南京市第二医院更多>>
发文基金:国家自然科学基金国家高技术研究发展计划江苏省高技术研究计划项目更多>>
相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 6篇医药卫生

主题

  • 5篇戊型
  • 5篇戊型肝炎
  • 5篇戊型肝炎病毒
  • 5篇肝炎
  • 5篇肝炎病毒
  • 5篇病毒
  • 4篇ORF2
  • 2篇蛋白
  • 2篇抗体
  • 2篇抗原
  • 2篇抗原表位
  • 2篇编码蛋白
  • 2篇表位
  • 1篇单克隆
  • 1篇单克隆抗体
  • 1篇新抗原
  • 1篇诱生
  • 1篇中和抗体
  • 1篇同基因
  • 1篇重组蛋白

机构

  • 5篇东南大学
  • 1篇南京市第二医...

作者

  • 5篇孟继鸿
  • 4篇董晨
  • 3篇戴星
  • 2篇梁久红
  • 2篇周镇先
  • 2篇董敏
  • 1篇耿全林
  • 1篇李峰
  • 1篇龚希平
  • 1篇丁福
  • 1篇单祥年
  • 1篇张红梅
  • 1篇韩振格
  • 1篇梁立敏
  • 1篇王松
  • 1篇杨义贵

传媒

  • 1篇中国免疫学杂...
  • 1篇中华传染病杂...
  • 1篇病毒学报
  • 1篇细胞与分子免...
  • 1篇东南大学学报...
  • 1篇Cellul...

年份

  • 1篇2013
  • 2篇2009
  • 2篇2008
  • 1篇2007
6 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
The Leu477 and Leu613 of ORF2-Encoded Protein Are Critical in Forming Neutralization Antigenic Epitope of Hepatitis E Virus Genotype 4被引量:11
2008年
Hepatitis E virus (HEV) genotype 4 was originally identified in China. Its neutralization antigenic epitopes have not been characterized. Recently, we identified a neutralizing monoclonal antibody (mAb) IG10, which was generated following immunization of mice with p166Chn, a recombinant protein comprising 464-629 amino acids (aa) of the HEV genotype 4 capsid protein. In this study, a panel of 22 N- and/or C-terminal truncated and 6 site-directed mutated p166Chn proteins were prepared. Only those N- or C-terminal truncated proteins containing the region 477-613 aa could react with the mAb 1G10, suggesting the neutralization epitope of HEV genotype 4 is located between aa477 and aa613. However, a both N- and C-terminal truncated protein, pN477-C613, neither reacted to 1G10 nor elicited neutralizing antibodies in mice, while another both terminal truncated protein, pN472-C617, did, suggesting the flanking regions of the pN477-C613 could help to stabilize and allow presentation of the neutralization epitope to the immune system. Substituting Leu477 and/or Leu613 with the polar, uncharged threonine (Thr) caused 〉 50% reduction of the mutants' immunoreactivity to IG10, whereas replacement by hydrophobic phenylalanine (Phe) made little impact on the immunoreactivity, revealing functional associations between hydrophobicity of aa at positions 477 and 613 and the antigenicity of p166Chn. These data suggested Leu477 and Leu613 are critical in forming the neutralization epitope of HEV genotype 4. Cellular & Molecular Immunology. 2008;5(6):447-456.
Hongmei ZhangXing DaiXiangnian ShanJsihong Meng
关键词:GENOTYPE
用不同基因型戊型肝炎病毒重组蛋白建立酶联免疫吸附测定一步法被引量:3
2009年
目的以7种不同基因型和亚型的HEV重组蛋白作为包被抗原,建立HEV抗体检测EuSA一步法。方法通过方阵滴定法确定包被抗原浓度,确定临界值,并进行敏感度、特异度和热稳定性试验。结果7种重组抗原混合物(Mix166)最佳包被浓度为1.5mg/L。抗-HEV IgG检测试剂的批内、批间变异系数分别为8.67%和10.85%,抗一HEV IgM检测试剂的批内、批间变异系数分别为4.56%和5.99%。一步法检测50份HEV RNA阳性血清的HEV IgG和HEV IgM抗体,阳性率均为94%。一步法检测674份健康者血清,52份抗-HEVIgG阳性.3份抗HEV IgM阳性。一步法检测HEV墨西哥株攻击黑猩猩后收集的系列血清发现,病毒攻击后1~6周抗-HEVIgM阳性,2~76周抗-HEV IgG阳性,而进口试剂盒缺乏对抗-HEV墨西哥株IgG、IgM的反应性。结论Mix166作为包被抗原建立的HEV抗体ELISA一步法具有较好的敏感性和特异性,可用于HEV感染的诊断。
周镇先丁福董晨龚希平耿全林孟继鸿
关键词:酶联免疫吸附测定基因型
一个能诱生戊型肝炎病毒中和抗体的ORF2编码蛋白短片段被引量:1
2007年
目的:比较戊型肝炎病毒(HEV)第4基因型ORF2编码蛋白片段pN472-C617(aa472~617)和pN477-C613(aa477~613)的免疫原性,找到能诱生HEV中和抗体的ORF2编码蛋白的更短片段。方法:表达和纯化pN472-C617和pN477-C613,分别免疫BALB/c小鼠,以间接ELISA检测免疫血清的抗体效价,并以基于PCR的体外中和试验检测免疫血清的中和活性。结果:pN472-C617和pN477-C613可在大肠杆菌高效可溶性表达,纯化后的重组蛋白能在小鼠体内诱导出高效价的抗体。基于PCR的体外中和试验显示pN472-C617免疫血清可有效中和HEV,阻断其在敏感细胞表面的吸附和细胞内复制;而两端仅比pN472-C617各短5个氨基酸的pN477-C613的免疫血清不具有中和HEV的活性。结论:重组蛋白pN472-C617具有良好的抗原性和诱生中和抗体的能力,是目前文献报道中含有HEV中和抗原表位的最短ORF2编码蛋白片段,可作为重组亚单位候选疫苗用于HEV疫苗的开发。
张红梅孟继鸿戴星单祥年
关键词:戊型肝炎病毒中和抗体
兔戊型肝炎病毒ORF2编码蛋白的抗原表位分析
2013年
目的:研究新发现的兔戊型肝炎病毒(HEV)与所有已知基因型HEV抗原表位的异同,为阐明动物HEV的人畜共患特征及戊型肝炎的诊断提供依据。方法:制备兔HEV ORF2重组蛋白R166(aa452-617),并免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体(McAb);采用间接ELISA法及免疫印迹法,检测McAbs与已知基因型HEV ORF2重组蛋白p166Bur(1型)、p166Mex(2型)、p166US(3型)和p166Chn(4型)的交叉反应性。用获得的杂交瘤细胞制备腹水,利用基于PCR的HEV体外中和试验,检测它们对基因1、4型人HEV和兔HEV的中和活性。结果:获得3株稳定分泌抗-R166的McAbs的杂交瘤细胞株,即1C1、6F9和10D2。其中1C1和6F9分泌的McAbs与已知1、2、3、4基因型p166均结合;10D2分泌的McAb只与R166特异结合,而不与1、2、3、4基因型p166结合。3株McAbs腹水均不能中和基因1、4型人HEV和兔HEV,提示3株McAbs针对非中和性抗原表位。结论:兔HEV与已知1、2、3、4基因型HEV既含有共同的抗原表位,也含有不同的抗原表位,具有不同的抗原特征。
王松戴星董晨董敏梁久红孟继鸿
关键词:抗原表位单克隆抗体
戊型肝炎病毒通用性PCR引物的设计及其基因分型的研究被引量:9
2009年
针对戊型肝炎病毒(HEV)基因分型尚无统一标准的现状,本研究通过分析GenBank中现有的82株HEV基因组全序列,设计一组HEV通用性PCR引物(HEVuPrimer)用于扩增不同基因型HEV可测序长片段,分别基于全基因序列、HEVuPrimer扩增序列和较常用的MXJ引物扩增序列对82株HEV进行基因分型,再以HEVuPrimer扩增1~4型HEV参考株和HEVIg M抗体阳性的临床标本,进行HEV基因分型的研究。研究结果表明HE-VuPrimer扩增区段与全基因序列对82株HEV的基因分型结果完全一致;HEVuPrimer与HEV序列的匹配程度明显高于MXJ引物,且HEVuPrimer区段的基因分型结果较MXJ区段的更为准确。HEVuPrimer可同时扩增出不同基因型HEV基因片段。124份临床标本中,60份测出特异性HEV RNA,阳性率为48.4%,基因分型结果均为4型HEV,但分属于4个不同的基因亚型,核苷酸同源性为80.0%~99.9%,其中有6例近期分离的HEV毒株形成一新的基因亚型。因此,基于HEVuPrimer扩增区段的HEV基因分型方法具有较高的可靠性和可信度,为建立统一、可行的HEV基因分型标准提供了新的思路。
李峰孟继鸿董晨戴星杨义贵周镇先
关键词:戊型肝炎病毒基因分型
GST与戊型肝炎病毒ORF2编码蛋白融合表达形成的新抗原表位的鉴定
2008年
目的:以戊型肝炎病毒(HEV)ORF2编码的重组蛋白p166为例,研究蛋白标签GST对融合表达的重组蛋白抗原结构的影响。方法:以HEV中国株重组蛋白p166Chn-GST为免疫原,制备单克隆抗体(mAb),与代表HEV4个基因型的摩洛哥株、墨西哥株、美国株和中国株p166的GST或His融合蛋白、中国株非融合重组蛋白p179Chn以及GST融合的HEV无关蛋白进行ELISA检测,鉴定mAb所识别的抗原表位。结果:获得3株稳定分泌抗p166Chn-GST的杂交瘤细胞株,分泌的mAb1A8、9B4和8H10与p166Chn-GST反应,与GST不反应。其中1A8和9B4可与带GST标签的4种p166-GST蛋白以及N和C端截短的p146Chn-GST、p137Chn-GST反应,而不与4种p166-His蛋白反应,也不与p179Chn反应,与HEV病毒颗粒竞争试验阴性,与GST融合的HEV无关蛋白无交叉反应性,表明1A8和9B4识别的抗原表位不是HEV病毒颗粒表面天然存在的抗原表位,而是GST与HEV ORF2编码蛋白的465-601aa区段序列共同形成的新的抗原表位。结论:GST能够赋予基因工程重组蛋白以新的抗原特性,它与融合表达的重组蛋白可以共同形成新的抗原表位。
梁久红梁立敏董敏韩振格董晨孟继鸿
关键词:GST融合表达戊型肝炎病毒抗原表位
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