广州市科技计划项目(10C36091668)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
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- 相关机构：广州军区疾病预防控制中心广东省疾病预防控制中心广州军区广州总医院更多>>
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- 登革病毒共有抗原片段的筛选与鉴定
- 2012年
- 目的经生物信息学分析及实验验证,筛选登革病毒共有的特异性抗原片段,为其免疫学诊断试剂的研制奠定基础。方法参考亲水性、抗原性、可塑性、表面可及性及二级结构信息,对登革病毒1-4型可能共有的特异性抗原表位进行系统的预测分析,分析其在不同毒株中的保守性,并对部分抗原表位进行高效原核表达,采用Western blot验证其反应原性。结果利用pET32a原核表达系统对6种病毒(登革1-4型病毒、流行性乙型脑炎病毒、黄热病毒)部分可能的抗原片段进行了高效表达;经Western blot筛选,获得一段登革1-4型病毒共有抗原片段DV1-2,与实验中所用其它黄病毒属及甲病毒属多克隆抗体无明显的交叉反应。结论 DV1-2为登革1-4型病毒共有的特异性抗原片段,可用于其免疫学诊断试剂的研制。
- 唐博恒王军军任瑞文刘建伟方美玉
- 关键词：登革病毒抗原表位原核表达
- 黄热病毒单克隆抗体的制备及免疫反应特性鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的制备黄热病毒单克隆抗体并对其生物特性进行鉴定。方法通过动物免疫、细胞融合、阳性克隆筛选等方法制备黄热病毒单克隆抗体,免疫Balb/c小鼠收集腹水,得到扩大制备的单抗,辛酸-饱和硫酸铵法纯化腹水。IFA法检测单抗与黄热病毒(YFV)、乙脑病毒(JEV)、登革病毒1-4型(DENV1-4)、西尼罗病毒(WNV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)的特异性反应,并对纯化前后的腹水进行效价分析;ELISA方法进行单抗的亚型分类。结果获得8株黄热病毒的单克隆抗体,均与YFV有特异性反应,1株与JEV有交叉反应,余7株与其它4种虫媒病毒无交叉反应。抗体分型大部分为IgG;纯化后单抗蛋白含量大多在30mg/ml以上。纯化后的4株单抗效价在1∶25600,3株在1∶12800,仅1株效价较低。结论本研究目前获得了几株特异性好、效价高的黄热病毒单克隆抗体,为建立黄热病毒快速检测系统奠定了基础。
- 张培任瑞文刘建伟洪文艳于德宪李曦唐博恒
- 关键词：黄热病毒单克隆抗体特异性
- 检测基孔肯雅病毒ELISA方法的建立被引量：3
- 2012年
- 基孔肯雅病毒（CHIKV）为重要的虫媒传播性传染病病原，2006年以来席卷南亚诸岛国及印度，并迅速向欧洲、加拿大、加勒比海、美洲南部和美国扩散，导致数百万人染病，对公共卫生安全造成严重威胁。2010年9月底，我国首次在东莞市暴发基孔肯雅热，并迅速导致数百人发病，作为一种新发传染病引起了媒体的广泛关注及民众的恐慌。
- 任瑞文柯昌文唐博恒黎薇张培方美玉
- 关键词：基孔肯雅病毒ELISA方法新发传染病公共卫生安全基孔肯雅热
- 西尼罗病毒单克隆抗体的制备与鉴定
- 2013年
- 目的制备西尼罗病毒单克隆抗体并对其生物特性进行鉴定,为快检试剂盒的研制奠定基础。方法通过动物免疫、细胞融合、克隆和筛选等方法制备西尼罗病毒单抗,应用间接免疫荧光(IFA)、ELISA方法进行特异性、效价、亚型等的鉴定。结果获得了5株西尼罗病毒的单克隆抗体,其中4株与所检的登革病毒1-4型、黄热病毒、乙脑病毒、布尼安病毒、基孔肯雅病毒均无交叉反应,1株与乙脑病毒有交叉反应;亚型分类均为IgG2a;效价可达1∶12 800以上。结论本研究获得了5个高滴度、特异性较好的西尼罗病毒单克隆抗体。
- 于德宪任瑞文张培洪文艳刘建伟李曦唐博恒
- 关键词：西尼罗病毒单克隆抗体
- 登革病毒特异性抗原片段的筛选鉴定及其ELISA方法的建立被引量：1
- 2012年
- 目的筛选、鉴定登革病毒共同及型特异性抗原，用纯化抗原建立检测登革病毒抗体的ELISA方法。方法分别利用DNAStar及ANTHEPROT软件对登革病毒1—4型、流行性乙型脑炎及黄热病毒M、E、NS1蛋白进行分析，预测可能的抗原表位。并根据表位位置和氨基酸序列的相似性，分析登革病毒的共有及型特异性抗原表位，并参考GenBank中的序列信息进行比对，分析其在不同登革病毒株中的保守性。然后选择预测得分值较高的表位，利用pE332a、pMAI-c2x原核表达系统进行原核表达，Western blot验证其免疫学反应特异性。Western blot检测阳性抗原片段经亲和纯化后，包被ELISA微孔板，并对ELISA反应条件进行系统优化。结果经系统的生物信息学分析，共预测获得登革病毒抗原表位18个，登革病毒型特异性抗原表位25个，并对其中得分值较高的5段进行了高效表达，经Western blot分析，获得登革1—4型（Den-Ag5），登革2、4型（Den-Ag3），登革1—3型（Den—Ag2）病毒共同抗原片段各一段，登革1、2、4型（Den-Ag1、Den-Ag4）共同抗原片段两段，与流行性乙型脑炎病毒、黄热病毒及所用甲病毒多克隆抗体均无交叉反应。选择Den-Ag5、Den-Ag1和Den-Ag2作为检测用抗原，建立了检测登革病毒抗体的ELISA方法，初步应用表明，所建立方法具备良好特异性，可检测50～200倍稀释的患者血清，S／N比值均在15以上。结论经系统筛选，获登革病毒特异性抗原片段5段，并建立了检测登革病毒抗体的ELISA方法。
- 唐博恒任瑞文洪文艳方美玉
- 关键词：登革病毒抗原表位原核表达ELISA
