国家自然科学基金(20666002) 作品数:20 被引量:81 H指数:5 相关作者: 黄日波 杨登峰 韦宇拓 覃香香 张厚瑞 更多>> 相关机构: 广西科学院 广西大学 广西师范大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广西壮族自治区自然科学基金 广西壮族自治区科技攻关计划 更多>> 相关领域: 轻工技术与工程 生物学 化学工程 环境科学与工程 更多>>
生物氧化产碱去除半纤维素水解物中的有机酸 被引量:2 2010年 盔形毕赤酵母Pichia galeiforms B-10对半纤维素水解物中的有机酸具有良好的降解活性,影响它脱酸活性的最主要因素是水解物初始pH。将半纤维素水解物初始pH值调节至5.0以上而无需其他处理,Pichia galeiforms B-10便可发挥良好的脱酸发酵性能。Pichia galeiforms B-10代谢有机酸盐可产生碱性物质,使水解液pH升高。在pH值>5.0的条件下,只要调节补酸(补加低pH值水解物)的速率与代谢耗酸速率相平衡,发酵体系即可始终处于有利于酵母快速代谢有机酸的高pH环境。这种生物氧化产碱连续脱酸发酵方式,可有效降低中和半纤维素水解物的外加用碱量,具有降低成本,减少新污染物的优势。 刘胜男 覃香香 张厚瑞 蔡爱华 林兰英关键词:有机酸 绿色木霉葡聚糖内切酶cDNA基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达 被引量:14 2007年 用L-山梨糖诱导绿色木霉(Trichoderma viride)AS3.3711纤维素酶基因的转录,提取其总RNA反转录获得cDNA。PCR扩增葡聚糖内切酶(EG)和葡聚糖内切酶(EG)的cDNA基因,将其克隆到酵母载体中,构建产生纤维素酶的酿酒酵母工程菌。重组菌株能够识别EG和EG自身携带的信号肽而将表达产物分泌到胞外,故可采用刚果红平板染色法筛选具有羧甲基纤维素酶(CMCase)活性的重组转化子。重组菌株表达的EG酶活在诱导70h时达到最高(为0.08U/ml),表达的EG酶活在诱导60h时达到最高(为0.03U/ml)。 王利英 刘一 杨登峰 黄日波关键词:绿色木霉 葡聚糖内切酶 酿酒酵母 树干毕赤酵母和酿酒酵母耦合发酵高浓度混合糖产乙醇 被引量:2 2010年 研究在高浓度发酵底物下,不同木糖及葡萄糖之间的比例、P.stipitis CBS5773和S.cerevisiae的发酵先后启动顺序、两菌间的协同发酵对两菌共同发酵混合糖产乙醇的影响。结果表明,乙醇的产量主要来自于由S.cere-visiae消耗葡萄糖而产生,两菌株偶联发酵时,S.cerevisiae能较快启动进入产乙醇发酵而不受P.stipitisCBS5773生长的抑制;在高浓度(200 g/L)糖浓度下,S.cerevisiaee和P.stipitis CBS5773存在相互拮抗作用,S.cerevisiae并不完全抑制P.stipitis CBS5773的生长;当木糖与葡萄糖之比为3∶2,且S.cerevisiaee和P.stipitis CBS5773分开接入,发酵12 h,乙醇产量最大,达到57 g/L。 苏海锋 杨登峰关键词:微生物 酿酒酵母 乙醇 甘蔗叶汽爆液中挥发性微生物生长抑制物的鉴定 被引量:3 2008年 通过气质联用仪(GC-MS)对甘蔗叶汽爆液的挥发性物质进行了分析,共鉴定出12个成分,有机酸占总挥发物含量的95%以上,丁酸、丙烯酸、巴豆酸、2-吡咯甲醛首次发现存在于爆破液中。分别考察了已鉴定成分在不同pH条件下对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞生长的影响,结果表明,所有挥发成分在自然pH条件下均对酵母细胞生长产生明显的抑制作用,提高pH值能有效降低四碳以下有机酸对酵母细胞生长的毒害作用,但不能明显降低六碳有机酸及醛类化合物的毒性。 经艳 周玉恒 覃香香 林卫军 卫力 张厚瑞关键词:甘蔗叶 蒸汽爆破 抑制物 气质联用 绿色木霉葡聚糖内切酶Ⅰ基因的定点突变及酶学性质的研究 被引量:4 2008年 将绿色木霉葡聚糖内切酶EGⅠ基因eg1亚克隆到表达载体pSE380,构建出重组质粒pSE380-eg1,转化到大肠杆菌JM109中表达,利用金属亲和层析对EGI进行纯化,纯化后的酶比活力达到3.8U/mg,其最适反应温度为48℃,最适pH为5.2。同时对EGⅠ的氨基酸残基G291位进行随机定点突变,筛选到一株突变酶G291S,其比活力为野生酶的2.2倍,Km值为野生酶的0.66倍,最适反应温度和最适反应pH值未发生改变。 陈祺 韦宇拓 杜丽琴 黄艳燕 黄日波关键词:绿色木霉 大肠杆菌 一株嗜热菌的分离、鉴定及海藻糖合成酶基因的克隆 2011年 从广西贺州市80℃热泉分离了一株嗜热菌TTH,生长温度范围在55℃~85℃,最适生长温度70℃左右,最高生长温度85℃,G+C物质的量分数为67.6%.对菌株TTH从形态、培养条件、16S rRNA基因序列和系统发育分析方面进行了研究,表明该菌株与3株嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)的同源性达到98%,初步鉴定是嗜热栖热菌(Thermus thermophilus).克隆了该菌的海藻糖合成酶基因,它与菌株Thermus thermophilus RQ-1,Thermus caldophilus,Thermus thermophilus HB8,Thermus thermophilus的同源性达到87%. 王慧荣 韦宇拓 黄日波关键词:嗜热菌 RRNA 系统发育分析 海藻糖合成酶基因 gTME改造野生酿酒酵母利用木糖产乙醇的初步研究 2010年 利用全转录工程(Global transcription machinery engineering,gTME)方法对野生型酿酒酵母(Saccharomyces scerevisiae)GX7菌株进行了改造。通过PCR方法克隆获得酿酒酵母转录因子spt15基因,与表达载体pYX418连接,构建了重组子pYX418-spt15,并对SPT15蛋白的177、195和217位点进行了定点突变,然后醋酸锂转化入酿酒酵母GX7中,利用不同浓度的G418抗性筛选得到重组突变酿酒酵母菌株GX7-1,经初步研究表明:重组菌株细胞表型发生了变化,生长速度加快,并可以发酵木糖生成木糖醇和乙醇。为构建新型工业酿酒酵母奠定了理论基础。 裴建新 韦宇拓 杜丽琴 杨登峰 曹博 黄日波关键词:重组酿酒酵母 生物乙醇 定点突变 酿酒酵母中的嗜热细菌木糖异构酶活性表达及木糖代谢研究 被引量:5 2009年 将来自嗜热放线细菌Thermobif ida f usca的木糖异构酶(xylose isomerase,XI)基因xylA,连接于酵母表达载体pYES2的半乳糖诱导启动子(PGAL)下,得到重组质粒pYES2-xylA,用其转化酵母菌INVSc1,测定重组酵母菌株INVSc1-xylA的木糖异构酶活性,并对重组酵母菌株进行木糖葡萄糖共发酵试验,探讨在酿酒酵母中建立新的生产乙醇木糖代射途径。结果木糖异构酶在75℃,pH值6.8的酶活力最高,在酿酒酵母中成功地获得活性表达,并且SDS-PAGE电泳有明显的特异性表达产物带,单体分子量为43kD。INVSc1-xylA在木糖葡萄糖共发酵实验中消耗木糖和产生乙醇分别比对照菌提高53.8%和36%,提高了其生产乙醇的能力。 王青艳 杨登峰 孙靓 陆雁 黄日波关键词:木糖异构酶 酿酒酵母 基因组改组技术及其在工业微生物改良中的应用 被引量:9 2011年 基因组改组技术是一种以原生质体融合为手段,实现多基因组重组的育种策略。文中从基因组改组基本原理出发,以相关研究成果为基础,系统介绍了基因组改组的策略与方法,并对该技术未来发展方向予以展望。 代兴华 蔡爱华 张厚瑞 覃香香关键词:基因组改组 工业微生物 原生质体融合 绿色木霉葡聚糖内切酶EGⅢ基因在大肠杆菌中的表达、定点突变及其动力学特性的研究 2009年 将绿色木霉葡聚糖内切酶EGⅢ基因亚克隆到表达载体pET-22b(+),构建重组质粒pET-egl3,转化到大肠杆菌BL21(DE3)。利用金属亲和层析对重组EGⅢ进行纯化,纯化后酶比活力达到6 U/mg蛋白,最适反应温度为60℃,最适pH为4.0。同时对EGⅢ催化区的氨基酸残基R130和E218进行定点饱和突变,各筛选到一株酶活有提高的突变子R130P和E218F,其比活力为野生型EGⅢ的2.8倍和3.45倍。突变酶E218F的Km提高了一倍,催化效率Kcat提高了5.4倍;而R130P的Km和Kcat没有明显变化。两个突变酶的最适酶解温度和pH分别都提高至65℃和4.4。 黄艳燕 左文朴 秦国梅 韦宇拓 杜丽琴 庞宗文 黄日波关键词:绿色木霉 大肠杆菌