重庆市卫生局科研项目(06-2-101)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院第三军医大学西南医院重庆医科大学更多>>
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- 重组人脂联素基因在L02细胞中的表达及其对肝脂肪变的预防作用
- 2010年
- 目的观察携带人脂联素（AdipoQ）基因真核表达载体是否能在人正常肝细胞株L02中表达，并探讨其对体外诱导肝细胞脂肪变的预防作用及其意义，为AdipoQ在非酒精性脂肪肝病的基因治疗中奠定基础。方法将构建含人AdipoQ重组载体pEGFPN1AdipoQ转染L02细胞（L02／pEGFPN1AdipoQ组，力=10），与pEGFP—N1空质粒转染L02细胞（L02／pEGFP—N1组，力=10）以及L02正常细胞株（L02组，力=10）为对照，分别加入浓度为20μg／ml的油酸进行培养72h，用油红O染色观察细胞内脂滴，并检测细胞内甘油三酯（TG）、游离脂肪酸（FFA）和甘油的含量。采用SAS8．2软件进行统计分析，3组之间总体差异的检验采用单因素方差分析，3组之间两两比较采用SNK—q检验。结果含人AdipoQ重组载体pEGFP—N1-AdipoQ能够在L02细胞株中表达，油红O染色显示72hL02组和L02／pEGFP-N1组分别比L02／pEGFP-N1-AdipoQ组脂肪变性更为明显。L02组、L02／pEGFP—N1组和L02／pEGFP—N1一AdipoQ组，TG含量分别为（89．23±18．45）μmol／L、（78．66±16．38）mol／L和（26．58±7．65）μmol／L，FFA含量分别为（85．39±17．26）mol／L、（75．63±12．25）μmol／L和（25．37±8．73）mol／L，甘油含量分别为（62．29±13．59）umol／L、（57．35±18．43）μmol／L和（15．37±7．53）μmol／L，F值分别为50．58、59．37、34．32，雅均〈0．01。在L02／pEGFP-N1组中TG、FFA和甘油含量均明显高于L02／pEGFP-N1-AdipoQ组，t值分别为7．81、8．50、6．75，尸值均〈0．01。在L02组中TG、FFA和甘油含量均显著高于L02／pEGFP-N1-AdipoQ组，t值分别为9．39、10．15、7．54，尸值均〈0．01。TG、FFA和甘油含量在L02／pEGFPN1组和L02组之间，差异无统计学意义。结论携带人脂联素基因真核表达载体能够在L02细胞株中表达，而且具有预防肝脂肪变性的作用。
- 周静孙伟周洲吴莹向延秀姜政陶小红黄爱龙王丕龙
- 关键词：脂肪肝脂联素L02细胞
- 重组人脂联素基因在减毒沙门氏菌中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的:构建携带人脂联素(AdipoQ)基因真核表达载体并在减毒沙门氏菌中表达,为AdipoQ对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的基因治疗提供依据.方法:从人脂肪组织中提取总RNA,通过实时荧光定量PCR(rRT-PCR)方法获得Adi-poQ基因并将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,构建pEG-FP-N1-AdipoQ重组载体.重组质粒经鉴定后再电转入减毒沙门氏菌SL7207中表达.结果:克隆的人AdipoQ基因744bp测序结果显示:1个碱基发生突变,654位:A→T,突变率为0.1%,氨基酸Glu→Asp.经SDS-PAGE,Western Blot检测融合蛋白Mr约为55×103(绿色荧光蛋白Mr约为27×103),能够被AdipoQ抗体识别.结论:成功构建携带AdipoQ基因真核表达载体的减毒沙门氏菌株,AdipoQ基因能够在减毒沙门氏菌中表达并与绿色荧光蛋白融合.为进一步研究其在NAFLD中的作用机制奠定了基础.
- 周静周洲吴莹向廷秀姜政王丕龙
- 关键词：脂联素沙门菌属疫苗减毒
- 人脂联素真核表达载体的构建及其表达
- 2009年
- 目的构建人脂联素的真核表达载体,并检测其融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达。方法从人脂肪组织中提取总RNA,通过RT-PCR方法获得人脂联素基因,将其克隆到真核荧光表达载体pEGFP-N1上,构建重组质粒pEGFP-N1-AdipoQ,转染至真核表达细胞COS-7中,并通过SDS-PAGE和Western blot检测融合蛋白在真核细胞中的表达。结果通过RT-PCR方法克隆人脂联素基因744 bp,测序结果显示,1个碱基发生突变,654位:A→T,突变率为0.1%,氨基酸Glu→Asp。通过SDS-PAGE和Western blot检测融合蛋白分子质量约为55×103(绿色荧光蛋白分子质量约为27×103),说明脂联素基因在真核细胞中表达并与绿色荧光蛋白融合。结论成功的构建了真核表达载体,并在真核细胞中表达。
- 周静姜政孙伟陶小红黄爱龙王丕龙
- 关键词：脂联素基因克隆基因治疗转染
