广东省中国科学院全面战略合作项目(2009B091300146)
- 作品数：3 被引量：10H指数：3
- 相关作者：郑艳宁刘强秦文咸漠刘东杰更多>>
- 相关机构：四川农业大学中国科学院中国科学院研究生院更多>>
- 发文基金：广东省中国科学院全面战略合作项目国家自然科学基金中国科学院知识创新工程重要方向项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 利用大肠杆菌工程菌株生物转化脂肪酸的初步研究被引量：4
- 2013年
- 羟基脂肪酸(Hydroxyfatty Acid,HFA)是一种有多种用途和广阔应用前景的多碳化学品。细胞色素P450单加氧酶(P450 P450 BM3)可高特异性的催化脂肪酸的ω碳位发生羟基化反应而生成羟基脂肪酸,该研究利用工程大肠杆菌成功表达了来源于巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的单加氧酶基因P450 BM3,实现了底物脂肪酸的成功转化。最终获得了羟基十二酸和羟基十四酸的最高产量分别为593.3 mg/L和547.3 mg/L,同时外源脂肪酸的转化率分别为59.7%和52.3%。对3种产物ω1、ω2、ω3-HFA进行定量分析发现3种产物的产量基本相同,表明单加氧酶对脂肪酸的羟基化位置没有特定偏爱性。最后通过优化表达载体的拷贝数来进一步优化单加氧酶基因P450 BM3的表达水平,最终利用中拷贝数质粒载体pACYCDuet-1表达单加氧酶基因P450 BM3获得了547.3 mg/L的羟基十四酸,代表了目前羟基十四酸生产的一个较高水平。
- 刘强刘玉珍刘东杰郑艳宁秦文
- 关键词：大肠杆菌P450脂肪酸
- 利用工程大肠杆菌生产不同类型的游离脂肪酸被引量：4
- 2012年
- 游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)对食品风味能够产生重要的影响,生产更多类型的FFAs能够更好的满足食品工业的需求。通过在大肠杆菌(E.coli)中分别过量表达7种不同的硫酯酶基因,7个用于生产FFAs的重组菌株被成功构建。并对重组菌株的FFAs生产条件进行了优化,确定最佳的培养条件为:以15g/LNa2HPO4和7.5g/LKH2PO4作为培养基中的磷酸盐浓度,采用0.25mmol/L的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)在30℃进行诱导培养。在优化的培养条件下,7个重组菌株的FFAs通过气相色谱(GC)进行了定性和定量分析。结果显示,过量表达BTE、AtFatA、‘tesA的重组菌株LL1、LL2、LL4均显著提高了FFAs的产量,其中LL1取得了346.4mg/L最高的FFAs产量。进一步对LL1、LL2、LL4的FFAs组成进行分析表明,BTE、AtFatA、‘TesA具有不同的底物特异性,能够用来生产C12～C18等不同链长和饱和度的FFAs。因此,通过微生物代谢工程可以获得天然动植物油脂中不存在的更多类型的FFAs。
- 李玲玲刘强郑艳宁秦文咸漠
- 关键词：游离脂肪酸
- 代谢工程改造大肠杆菌对中碳脂肪酸生产的加强作用被引量：4
- 2013年
- 通过在大肠杆菌(Escherichia coli)中过量表达来自加州月桂(Umbellulana california)的硫酯酶基因BTE,极大地加强了大肠杆菌中碳脂肪酸(MCFAs)的生产。并对MCFAs在大肠杆菌胞内外的分布,以及是否对大肠杆菌细胞膜磷脂组成产生影响等进行了系统的分析。结果发现,产生的MCFAs绝大部分存在于大肠杆菌细胞内,且未对其细胞膜磷脂组成产生明显影响。为了继续提高MCFAs的产量,又进一步对大肠杆菌进行了代谢工程改造,通过结合表达乙酰-CoA羧化酶(ACCase),优化硫酯酶的表达水平等,最终获得了188.9mg/L的总MCFAs产量,并且产生的MCFAs的比例高达85%以上,实现了MCFAs的高特异性生产。
- 刘强郑艳宁姜兴林刘东杰秦文咸漠
- 关键词：大肠杆菌代谢工程
