国家自然科学基金(20676048)
- 作品数：33 被引量：107H指数：6
- 相关作者：方柏山彭益强刘代俊陈国陈宏文更多>>
- 相关机构：华侨大学四川大学厦门大学更多>>
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- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程理学更多>>
- 吸附树脂在酶法制备1,3-丙二醇中的应用被引量：2
- 2008年
- 筛选出了对辅酶NAD、酶蛋白弱吸附(吸附率分别为10%,9%),对产物1,3-丙二醇(1,3-PD)与二羟基丙酮(DHA)强吸附(吸附率分别为30.5%,34.5%)的吸附树脂SIPI-40,并进行产物的吸附分离,达到酶与辅酶回流利用、反应连续进行的目的,并应用于伴有辅酶NADH再生的酶法催化甘油(Gly)制备1,3-PD的新型反应体系的构建;经单因素考察,确定较佳操作条件是:树脂质量与底产物浓度数值比大于1.4:1,吸附时间为2h;在此条件下进行反应操作,测得每批次反应中1,3-PD相对于甘油的产率稳定在20%左右(分别为22.5%,20.6%与19.3%);在连续催化反应中,1,3-PD总产率达45.3%。实验结果说明,吸附树脂分离产物可应用于1,3-PD酶法连续反应体系的构建。该研究工作的新颖性,已为厦门市科学技术情报研究所2006年12月11日出具的第2006581号《科技查新报告》所证实。
- 彭益强兰琳陈巍方柏山
- 关键词：吸附树脂辅酶再生3-丙二醇酶法生产
- 树脂分离技术在酶法制备1,3-丙二醇中的应用被引量：3
- 2008年
- 从几种吸附树脂中筛选出了树脂DA201。树脂DA201对酶、辅酶吸附较少(吸附率分别为13.13%,14.5%)且对酶活无较大破坏,对产物1,3-丙二醇(1,3-PD)与二羟基丙酮(DHA)吸附较多(吸附率分别为23%,27%)。利用树脂DA201进行产物的富集分离及酶、辅酶回流再利用,实现伴有辅酶NADH再生的1,3-PD酶法连续反应。在底物浓度为1 g/L时,树脂质量浓度为底物浓度的4.8倍、吸附时间为6 h,树脂DA201对底产物有较好的吸附分离效果。在此条件下进行1,3-PD的2个批次连续制备,第1、第2批次1,3-PD转化率分别为42.9%、35.5%,总转化率为39.72%。实验结果说明,吸附树脂对底产物、酶与辅酶具有一定的分离作用,利用树脂的分离作用可有效地实现伴有辅酶再生的酶催化反应的连续进行。
- 彭益强兰琳陈巍方柏山
- 关键词：酶法制备辅酶再生1,3-丙二醇
- 克雷伯杆菌1，3-丙二醇氧化还原酶的分离纯化及其酶学性质被引量：5
- 2009年
- 在有氧条件下，利用DEAE Sepharose Fast Flow弱阴离子离子交换层析和Blue Sepharose CL-6B亲和层析，同时分离并提纯克雷伯杆菌胞内的1，3-丙二醇氧化还原酶和甘油脱氢酶．研究表明，1，3-丙二醇氧化还原酶的纯化倍数为35．86倍，回收率为5．17％，该酶最适表观反应温度为57℃，最适反应pH值为9．5．在30℃及pH-8．0～10．0时，该酶具有良好的稳定性．在45℃和pH-9．5条件下，该酶以1，3-丙二醇和NAD^＋为底物，其米氏常数K。分别为15．8，0．2mmol·L_。．1，3一丙二醇氧化还原酶对生理反应底物3-羟基丙醛活性最大，对其他醇类也有氧化能力．Mn^2＋对酶有显著激活作用，巯基保护剂能明显提高酶的活力．
- 陈宏文聂金峰方柏山陈国华(英文审校)
- 关键词：1,3-丙二醇氧化还原酶克雷伯杆菌甘油脱氢酶酶学性质纯化
- 反胶团萃取磷酸溶液中的镁被引量：22
- 2008年
- 研究了萃取剂二壬基萘磺酸(DNNSA)从磷酸介质中萃取Mg(II)的性能。考察了萃取时间、水相P2O5浓度、萃取剂浓度、初始镁离子浓度、萃取温度等因素对萃取的影响。研究表明:当萃取剂浓度为0.5mol·L-1时,混合40min后,萃取率E基本保持不变,可视为萃取过程达到平衡;该萃取过程为阳离子交换反应,磷酸浓度越高萃取越难,该法适用于低浓度磷酸的净化;萃取反应为吸热反应,计算得到了DNNSA从磷酸介质中萃取Mg(II)的过程热效应(△H1)为37.04kJ·mol-1;萃取分配比随萃取剂浓度的增加而增大,这说明萃取的镁离子不是简单地增溶入DNNSA的反胶团,而是与反胶团发生了化学反应。用Levenberg-Marquardt算法进行非线性回归拟合确定了萃合物的组成为MgD2·6HD,萃取的表观平衡常数(K)为59.60。
- 余静刘代俊杜怀明徐程浩刘长洪刘明
- 关键词：反胶团磷酸
- DNNSA反胶团溶液净化磷酸中镁的研究被引量：13
- 2009年
- 本文研究了二壬基萘磺酸(DNNSA)形成的微乳萃取磷酸中镁离子的工艺条件。分别考察了稀释剂、萃取时间、萃取剂浓度、温度、磷酸浓度对磷酸中镁离子萃取的影响。结果表明,稀释剂极性越低越有利于萃取,萃取平衡时间为40 min,萃取剂浓度增加有利于萃取,升高温度对萃取有利,磷酸浓度增加萃取率下降。红外光谱分析证实,DNNSA反胶团萃取磷酸中镁离子为阳离子交换机理。
- 徐碧刘代俊余静曹艳梁如刚
- 关键词：反胶团磷酸
- 固定化细胞生物制氢研究进展被引量：3
- 2010年
- 综述现有的生物制氢技术研究中,利用光合生物制氢和利用厌氧菌发酵制氢的研究进展.其中,固定化细胞生物制氢菌类包括光合细菌、发酵细菌和混合菌培养等.阐述固定化细胞生物制氢中包埋法和吸附法载体及发酵制氢所用的原料,最后展望固定化细胞生物制氢的发展方向.
- 蔡剑伟方柏山
- 关键词：固定化生物制氢光合细菌厌氧菌混合菌包埋
- DNNSA反胶团萃取湿法磷酸中Fe^(3+)的机理研究被引量：8
- 2008年
- 对萃取剂二壬基萘磺酸(DNNSA)萃取分离湿法磷酸中Fe3+的性能和机理做了初步研究。考察了萃取剂浓度c(HD)、水相酸度w(P2O5)、反应温度、油相和水相体积比V(O/A)等因素对萃取率的影响,并用斜率法研究了萃取剂浓度和水相酸度对萃取平衡的影响。试验结果表明,萃取剂浓度越高,萃取效果越好;在高、低酸度时,HD分别与Fe3+和FeHPO4+进行反应,并生成不同的萃合物FeD3.5HD和FeHPO4D.7HD,表明其萃取机理受酸浓度的影响而发生了变化。
- 曹艳刘代俊徐碧余静王春晓
- 关键词：反胶团FE3+湿法磷酸
- 克雷伯杆菌甘油脱氢酶和1,3-丙二醇氧化还原酶的动力学机制被引量：3
- 2010年
- 本研究主要对克雷伯杆菌甘油转化1,3-丙二醇代谢途径中的2个关键酶甘油脱氢酶(GDH)、1,3-丙二醇氧化还原酶(PDOR)反应机制和动力学进行了研究。首先,通过初速度和产物抑制动力学研究确定了GDH、PDOR双底物酶促反应机制为有序BiBi机制,明确了由反应物消耗到产物生成之间的历程。其次,建立了GDH、PDOR双底物酶促反应动力学模型,由动力学模型可知,在偶合反应中,如果GDH和PDOR酶量相同,GDH氧化反应成为限速反应,而辅酶I将主要以氧化型NAD+形式存在。动力学信息为酶法合成1,3-丙二醇和代谢工程研究提供理论指导。
- 陈宏文聂金峰陈国方柏山
- 关键词：甘油脱氢酶动力学模型
- 3-羟基丙醛耐受菌的筛选与3-羟基丙醛抑菌活力的研究被引量：1
- 2008年
- 活化的短乳杆菌用含一定甘油浓度(10 g/L)的平板培养基驯化培养后铺上一层含活化E.coli的培养基,30℃双层平板培养,经7个批次筛选,获得了1株在其周围产生明显抑菌透明圈的短乳杆菌菌落,编号为LB7—6;纯化培养筛选出的短乳杆菌,分别在30℃、37℃下进行二次发酵2～8 h,测定发酵液中3-羟基丙醛(3- HPA)的含量。结果显示,较优化发酵条件为37℃微氧静置发酵6h,在此条件下,3-HPA含量为2.18mg/mL,由此计算得3-HPA总得率为0.147g/g,转化率为19.05%;以10~5个/mL E coil为检测菌,采用比浊法实验,结果表明,发酵所得3-HPA最小抑菌浓度(MIC)为2.18×10^(-3)mg/mL;发酵液40℃保存48 h后测定3—HPA的MIC为2.18×10~0mg/mL,说明所产3-HPA抑菌活力有一定程度的稳定性。
- 彭益强颜天祝方柏山
- 关键词：短乳杆菌3-羟基丙醛甘油耐受性
- 1,3-丙二醇脱氢酶一步纯化与杂化凝胶固定化的初步研究
- 2008年
- 转录表达来源于Klebsiella.p1,3-丙二醇脱氢酶(PDH)基因片段的E.coli工程菌,在5L发酵罐、30℃、pH值7.0、200r/min(微氧)条件下培养20h;发酵菌体经破碎分离后所得样品通过HisTrap HP柱亲和层析一步纯化得到电泳纯的PDH,纯化倍数为2.94倍,活性回收率为50%,经SDS-PAGE电泳鉴定获得一条清晰条带,表达蛋白亚基相对分子质量约为41kDa。用改进的溶胶-凝胶法(杂化凝胶)包埋纯化酶,考察正硅酸乙酯(TEOS)浓度、海藻酸盐(ALG)浓度、CaCl2浓度及ALG与TEOS体积比等因素对酶固定化效果的影响,结果表明,较优包埋条件为:ρ(TEOS)=20g/L,ρ(ALG)=30g/L,ρ(CaCl2)=40g/L,V(ALG)∶V(TEOS)=3∶1;由此制备的PDH的ALG-SiO2杂化凝胶保藏60天后酶活仍保持80%,进行批次反应时,反应3批后酶活保持70.3%,反应第6批时酶活剩余29.8%。
- 彭益强罗菊香张磊方柏山
- 关键词：纯化固定化
