艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2008ZX10003-013)
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
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- 相关机构：上海生物制品研究所更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 插入结核抗原基因的重组痘苗病毒对结核分枝杆菌感染恒河猴模型的免疫保护性研究
- 目的将痘苗病毒安卡拉株为载体的新型重组结核病疫苗用于结核分枝杆菌感染的猴模型体内观察其免疫预防及治疗作用。方法按国家药典建立BHK21细胞库及重组痘苗病毒库,大量扩增并用密度梯度离心法纯化病毒。按计划在27个猴体上分组进...
- 楼觉人张群朱琳
- 关键词：重组痘苗病毒恒河猴免疫保护性
- 文献传递
- 重组结核杆菌Ag85a-ESAT6融合蛋白的原核表达、纯化及其生物活性被引量：4
- 2010年
- 目的原核表达、纯化重组结核杆菌Ag85a-ESAT6融合蛋白,并检测其生物活性。方法将Ag85a-ESAT6融合基因片段插入pET-28a(+)载体中,构建重组质粒pET-28a-Ag85a-ESAT6,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物在变性条件下经Ni-琼脂糖凝胶层析柱纯化复性后,在体外对经5种不同类型的表达结核杆菌Ag85a和ESAT6的重组痘苗病毒免疫的小鼠脾淋巴细胞进行刺激,以MTT法检测脾淋巴细胞的增殖反应。结果重组质粒pET-28a-Ag85a-ESAT6经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约41000,主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的55.65%;纯化复性的重组融合蛋白纯度达95%以上,表达量约为1.2g/L发酵液,且具有良好的反应原性;与空痘苗病毒或生理盐水免疫的小鼠相比,5种重组痘苗病毒免疫的小鼠脾淋巴细胞与Ag85a-ESAT6融合蛋白共培养后,增殖活性明显升高(P<0.01)。结论成功利用原核系统表达了结核杆菌Ag85a-ESAT6融合蛋白,纯化复性的Ag85a-ESAT6融合蛋白具有生物学活性。
- 张群朱琳楼觉人
- 关键词：AG85AESAT6原核细胞生物活性
