国家自然科学基金(30371395)
- 作品数：15 被引量：86H指数：6
- 相关作者：陈孝平张万广徐宗全关剑李高鹏更多>>
- 相关机构：华中科技大学苏州大学广州军区武汉总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 受强力霉素调控表达的人肝癌HepG2细胞系的建立被引量：5
- 2004年
- 目的建立受强力霉素 (doxycycline)调控表达的人肝癌HepG2细胞系。 方法用阳离子脂质体lipofectamine 2 0 0 0 0将pTet on质粒转染人肝癌HepG2细胞 ,通过G4 18筛选得到稳定转染的抗性克隆 ;将抗性克隆细胞分别培养扩增 ,通过 pTRE luc质粒瞬时转染 ,加入终浓度为 1μg/ml的doxycycline诱导剂培养 4 8h后 ,逐一检测每个细胞株的荧光素酶表达活性。 结果第 6号克隆的细胞诱导后荧光素酶的表达活性为 16 76 4 ,而非诱导状态下该细胞株的背景活性为 87,诱导后的活性增加 192倍。结论HepG2 /Tet on细胞株是可调控基因表达的人肝癌细胞株 ,为研究肝癌的发病和基因治疗提供了较为理想的研究工具。
- 李东华陈孝平全晓明
- 关键词：强力霉素肝癌HEPG2细胞基因表达调控细胞培养
- 常氧条件下调控表达缺氧诱导因子1α对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响被引量：5
- 2007年
- 目的探讨在体外常氧条件下,诱导表达缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对肝癌细胞(HepG2)增殖及侵袭能力的影响。方法利用 Tet-on 基因调控系统构建能诱导表达 HIF-1α的HepG2^(Tet-on-HIF-1α)细胞系;常氧条件下,噻唑兰法检测 HIF-1α对细胞增殖、黏附能力的影响,Transwell 法检测其对 HepG2细胞侵袭能力的影响。结果常氧条件下,强力霉素(1μg/ml)可诱导HepG2^(Tet-on-Hlf-1α)细胞 HIF-1αmRNA 和蛋白表达增加;增殖实验中,Dox(+)组与 Dox(-)组各时段吸光度 A_(490nm)值无差异(P>0.05);黏附实验中,Dox(+)组的 A_(490nm)值明显高于 Dox(-)组(P=0.008);Dox(+)组侵袭细胞数[(37.611±8.424)个]明显高于 Dox(-)组[(25.333±8.117)个](P<0.01)。结论 Tet-on 基因调控系统可上调 HIF-1α mRNA 的转录并增加其蛋白的表达;常氧条件下,HIF-1α不影响 HepG2细胞的增殖,但明显增加其黏附和侵袭能力。
- 金炜东陈孝平杨盛利徐宗全张万广
- 关键词：肝肿瘤基因表达调控肿瘤缺氧诱导因子1Α增殖
- 缺氧诱导因子1α在肝癌细胞上皮-间充质化中的作用被引量：5
- 2013年
- 目的:探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在肝癌上皮-间充质化(EMT)中的作用。方法:采用可调控HIF-1α表达的肝癌HepG2Tet-on-HIF-1α细胞系,首先用real-time PCR与Westernblot方法检测低氧环境中HepG2Tet-on-HIF-1α细胞EMT相关分子(E-cadherin,vimentin,FSP-1)及HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平,然后在常氧环境下,采用强力霉素(Dox)诱导HepG2Tet-on-HIF-1α细胞HIF-1α过表达,以及HepG2Tet-on-HIF-1α细胞经Dox处理后再转染HIF-1αsiRNA,观察上述分子的表达情况。结果:低氧处理后,HepG2Tet-on-HIF-1α细胞EMT相关分子及HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平较常氧状态下均明显增加(均P<0.05);常氧环境下,Dox能诱导HepG2Tet-on-HIF-1α细胞HIF-1α过表达,同时明显增加EMT相关分子的mRNA和蛋白表达水平(均P<0.05),但转染HIF-1αsiRNA后,Dox的诱导作用被取消。结论:HIF-1α促进HepG2细胞EMT,并可能是肝癌基因治疗的有效靶点。
- 金炜东马丹丹蔡逊梅洪亮黄致远
- 关键词：缺氧诱导因子1,Α亚基
- ERK/MAPK通路参与肝癌产生多药耐药的胞内信号传导被引量：15
- 2007年
- 目的探讨微环境诱导肝癌产生多药耐药的胞内信号传导途径。方法分别使HepG2细胞在缺氧、低糖环境下生长或稳定整合 HBX 基因,运用 Western 蛋白印迹法检测这些细胞内 ERK/MAPK 的活性。用 ERK/MAPK 特异性阻断剂 U0126处理这些细胞后,用 Western 蛋白印迹法检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和多药耐药相关蛋白的表达变化,逆转录聚合酶链反应和免疫细胞化学技术分别检测 HIF-1α在 mRNA 水平表达量和部位的改变。结果不同环境下生长的 HepG2细胞中,磷酸化/非磷酸化 ERK/MAPK 比例均有不同程度的增高。用 U0126处理12h 后,这些细胞中 HIF-1α和多药耐药相关蛋白的表达下降,且 HIF-1α表达由胞核向胞质转位,其 mRNA 水平无显著变化。结论 ERK/MAPK 信号通路是微环境诱导肝癌产生多药耐药的重要胞内信号传导途径。
- 朱虹陈孝平罗顺峰关剑张万广张必翔茅彩萍
- 关键词：肝细胞抗药性多药细胞外调节激酶缺氧诱导因子-1Α
- Tet-on基因表达系统反应质粒P^(TRE-HIF-1α)的构建和表达鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的克隆和构建携带人低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的Tet-on基因表达系统反应质粒PTRE-HIF-1α。方法以缺氧的肝癌细胞株HepG2总RNA为模板,进行RT-巢式PCR,获得HIF-1α的cDNA,克隆入Tet-on基因表达系统反应质粒PTRE2hyg,酶切重组子鉴定。将构建好的PTRE-HIF-1α用脂质体法转入HepG2Tet-on细胞,在强力霉素的作用下,用RT-PCR及Westernblot法鉴定重组质粒的表达。结果扩增出HIF-1α的cDNA测序结果与Genbank记载完全一致,并成功克隆入PTRE2hyg,将反应质粒PTRE-HIF-1α转入HepG2Tet-on细胞,可以完整有效表达HIF-1α且受强力霉素的调控。结论成功克隆和构建携带HIF-1α基因的Tet-on基因表达系统反应质粒PTRE-HIF-1α,并证明其表达能在HepG2Tet-on细胞中受强力霉素调控。
- 徐宗全陈孝平张万广王其关剑李高鹏
- 关键词：低氧诱导因子-1Α巢式PCR克隆
- 乙型肝炎病毒X基因在体内外对肝癌细胞增殖活性的影响被引量：11
- 2004年
- 目的 探讨乙型肝炎病毒x(HBx)基因对肝癌细胞增殖活性的影响。方法 将携带HBx基因的表达质粒 pHA HBx转染HepG2 肝癌细胞 ,G4 18筛选阳性细胞克隆 ,RT PCR鉴定HBx基因的整合及表达 ;通过细胞计数 ,观察HBx基因对肝癌细胞生长曲线和倍增时间的影响 ;流式细胞术检测细胞周期的变化 ;3 H TdR掺入法检测细胞增殖活性 ;裸鼠接种观察HBx基因在体内对肝癌细胞增殖的影响。结果 HBx基因在体内外对HepG2 细胞的增殖活性均有明显影响 ,细胞生长曲线左移 ,倍增时间缩短 ;G0 /G1期细胞减少 ,S期和G2 /M期细胞增多 ;转染后的细胞3 H TdR掺入率较对照组增高 ;转HBx基因的裸鼠移植瘤的生长速度较对照组细胞明显加快。结论 HBx基因在体内外均可提高肝癌细胞的增殖活性 ,增加肝癌细胞的恶性表型 ,加速肿瘤生长。
- 李东华陈孝平张万广裘法祖
- 关键词：乙型肝炎病毒X基因肝癌细胞增殖活性HEPG2肝癌细胞肝癌
- Twist基因在肝细胞肝癌中的表达及意义被引量：8
- 2006年
- 目的探讨转录因子 Twist 在人肝细胞肝癌、癌旁和肝硬化组织中的表达及其意义。方法利用免疫组化方法检测26例肝细胞肝癌标本(癌和癌旁组织)和10例肝硬化标本中 Twist 的表达情况;利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和 Western 蛋白印迹方法检测其中10例标本中的Twist mRNA 和其蛋白的表达情况,分析其临床病理意义。结果免疫组化显示:Twist 蛋白在肝癌、癌旁和肝硬化组织中的阳性率分别为84.6%、19.2%和20.0%,Twist 在肝癌组织中的表达明显强于癌旁或肝硬化组织(P<0.05);大多数癌旁和肝硬化组织无 Twist 表达,癌旁与肝硬化组织相比阳性率无差别(P<0.05)。与癌旁组织相比,Twist mRNA 和其蛋白在肝癌组织中表达明显上调(P<0.05)。结论 Twist 在肝细胞肝癌组织中的过高表达与肝癌的发生发展相关。
- 李常海陈孝平徐宗全李高鹏关剑
- 关键词：TWIST基因肝细胞肝硬化转录因子
- 肝癌组织中乙肝病毒x蛋白与缺氧诱导因子-1α的相关性被引量：4
- 2004年
- 目的 探讨乙型肝炎病毒x蛋白 (HBx)与缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)在肝癌组织中表达的相关性及其在肝癌的发生和发展中的作用。方法 采用免疫组织化学染色方法检测 14 1例福马林固定、石蜡包埋的原发性肝癌组织标本HBx和HIF 1α表达 ;用Lipofectamine2 0 0 0将 pHA HBx质粒转染HepG2细胞 ,G418筛选阳性克隆 ,逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测转染后细胞HBx基因和HIF 1α基因转录 ;免疫细胞化学染色检测转染细胞HIF 1α表达。结果 14 1例肝癌组织标本中 ,HBx和HIF 1α免疫组织化学染色阳性者分别为 98例和 116例 ;转染HBx基因后的HepG2细胞RT PCR结果表明 ,HIF 1α基因呈阳性表达 ,而未转染细胞则为阴性 ;免疫细胞化学染色显示 ,转染后的细胞 75 %HIF 1α表达阳性 ,未转染细胞几乎未见阳性细胞。结论 肝癌组织中HBx与HIF 1α的表达明显相关 (P <0 .0 1) ,HBx可以明显上调肝癌组织中HIF 1α的表达 ,两者的共同表达对原发性肝癌细胞的生物学行为可能有重要影响。
- 李东华陈孝平张万广王海平裘法祖
- 关键词：肝癌乙肝病毒X蛋白缺氧诱导因子-1Α癌组织缺氧
- 缺氧诱导因子1α表达对裸鼠肝癌皮下移植瘤生长的促进作用被引量：2
- 2008年
- 目的探讨缺氧诱导因子1α表达对肝癌移植瘤生长的影响。方法建立强力霉素诱导缺氧诱导因子1α表达的裸鼠肝癌HepG2^Tet-on-HIF-1α细胞皮下移植瘤模型；荷瘤裸鼠口服强力霉素（Dox）后，观察上调缺氧诱导因子1α对皮下移植瘤生长的影响。结果荷瘤裸鼠口服强力霉素可以上调裸鼠皮下移植瘤中缺氧诱导因子1α mRNA和蛋白表达水平；肿瘤体积Dox（＋）组vs．Dox（-）组为（513．545±276．229）mm^3 vs．（166．506±110．142）mm^3（P〈0．05），肿瘤重量（1．251±0．438）g vs．（0．640±0．296）g（P〈0．05），肿瘤生长速度Dox（＋）组明显超过Dox（-）组，肿瘤内面积坏死率明显小于Dox（-）组（31．360％±2．728％）vs．（36．640±3．804％）（P〈0．05）；同Dox（-）组相比，Dox（＋）组裸鼠体重下降更为明显（P〈0．01）。两组荷瘤鼠均无肝、肺转移发生。结论强力霉素可以诱导裸鼠肝癌HepG2^Tet-on-HIF-1α细胞皮下移植瘤模型中缺氧诱导因子1α的表达，促进肿瘤的生长。
- 金炜东陈孝平杨盛利张万广靖凯
- 关键词：肝肿瘤缺氧诱导因子1Α亚基动物实验
- 线粒体促凋亡因子Omi/HtrA2在肝癌组织中表达的研究被引量：8
- 2006年
- 目的探讨丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2在肝癌组织、癌旁组织与正常肝组织中的表达及意义。方法应用免疫组化SABC法检测43例肝癌、30例癌旁组织及10例正常肝组织中Omi/HtrA2的表达。结果29例(67·44%)肝癌中Omi/HtrA2蛋白表达阳性,30例癌旁组织和10正常肝组织没有或只有少量很弱的表达。肝癌高分化组中Omi/HtrA2蛋白的表达明显高于中、低分化组(P<0·01)。另外,Omi/HtrA2表达与肿瘤大小及临床分期相关,但Omi/HtrA2表达与肝硬化、有无癌栓、HBsAg和AFP无关。结论肝细胞癌可能需要Omi/HtrA2的表达来促进凋亡,Omi/HtrA2的表达对肝癌的发展有重要作用。
- 徐宗全陈孝平李常海李高鹏张志发
- 关键词：OMI/HTRA2丝氨酸蛋白酶肝癌凋亡
