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国家自然科学基金(30371386)

作品数：11 被引量：24H指数：3
相关作者：李宝金刘晓平张超伊远学郝颖更多>>
相关机构：北京大学深圳医院深圳北京大学香港科技大学医学中心中山大学附属第二医院更多>>
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文献类型

  • 11篇中文期刊文章

领域

  • 11篇医药卫生

主题

  • 8篇细胞
  • 5篇基因
  • 4篇腺病
  • 4篇腺病毒
  • 4篇靶向
  • 3篇血管
  • 3篇启动子
  • 3篇重组腺病毒
  • 3篇淋巴
  • 3篇淋巴细胞
  • 3篇KDR启动子
  • 2篇胸苷
  • 2篇胸苷激酶
  • 2篇血管靶向
  • 2篇特异
  • 2篇体外
  • 2篇转录
  • 2篇介导
  • 2篇激酶
  • 2篇T-BET基...

机构

  • 8篇北京大学深圳...
  • 4篇深圳北京大学...
  • 3篇中山大学附属...
  • 2篇北京大学
  • 2篇中山大学
  • 2篇安徽省阜阳市...
  • 1篇广州中医药大...
  • 1篇井冈山学院

作者

  • 10篇刘晓平
  • 10篇李宝金
  • 8篇张超
  • 5篇伊远学
  • 4篇郝颖
  • 3篇区庆嘉
  • 2篇冷希圣
  • 2篇冯子毅
  • 2篇张维
  • 2篇宁长青
  • 2篇陶剑平
  • 1篇吴立旋
  • 1篇徐勤
  • 1篇周玉梅
  • 1篇魏小勇
  • 1篇张立兵

传媒

  • 2篇第三军医大学...
  • 1篇中国肿瘤生物...
  • 1篇中华实验和临...
  • 1篇中华实验外科...
  • 1篇中国普通外科...
  • 1篇癌症
  • 1篇第四军医大学...
  • 1篇Chines...
  • 1篇检验医学与临...
  • 1篇中国组织工程...

年份

  • 1篇2010
  • 1篇2009
  • 1篇2008
  • 3篇2007
  • 3篇2006
  • 2篇2005
共 11 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
逆转录病毒携带白细胞介素-12转染树突状细胞体外诱导特异免疫杀伤肝癌细胞被引量：6
2005年
目的探讨逆转录病毒携带白细胞介素(IL)12转染树突状细胞(DC)体外诱导免疫杀伤肝癌细胞的效能及其机制。方法感染指数(MOI)为100,含IL12的重组逆转录病毒修饰肝癌患者外周血DC(DCIL12),酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测DCIL12(5×103个/ml)培养上清中IL12和γ干扰素(IFNγ)水平,以冻融肝癌细胞株HepG2(1×107个/ml)所获得的肿瘤相关抗原(TAA)刺激DCIL12,MTT法检测TAA负载的DCIL12刺激同源T淋巴细胞(1×105个/ml)增殖分化能力,细胞毒试验检测DCIL12诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)及其上清液对HepG2肝癌细胞株杀伤作用,ELISA法检测CTL上清液IFNγ水平。结果DC经IL12基因修饰后48h分泌高水平IL12(24.35±5.40)ng/L及IFNγ(725±30)ng/L,均显著高于未转染DC组(P<0.01及P<0.05)。DCIL12诱导的CTL及其上清液对HepG2均有显著杀伤作用,杀伤率显著高于未转染DC组,分别为(82.43±8.70)%vs(57.4±4.3)%(P<0.01)和(76.45±8.50)%vs(18.23±5.30)%(P<0.01),DCIL12诱导的CTL上清液IFNγ水平显著高于未转染DC组,分别为(1125.0±32.7)ng/Lvs(281.3±14.7)ng/L(P<0.01)。结论IL12基因修饰增强DC体外诱导自体T淋巴细胞产生特异性抗肝癌免疫,其机制与IL12基因修饰促进DC分泌IL12、增强T淋巴细胞活化及分泌IFNγ密切相关。
刘晓平李宝金张超
关键词：逆转录病毒白细胞介素-12树突状细胞体外诱导免疫机制
人T-bet基因的体外扩增及克隆和鉴定
2007年
目的:克隆人T-bet基因,构建其真核表达载体pEGFP-C1-T-bet。方法:实验于2005-07/2006-07在北京大学深圳医院中心实验室完成。①根据Genebank的人T-bet基因的全长cDNA序列,设计合成一对附加BglⅡ和SalⅠ两个限制性内切酶酶切位点的特异性引物。②分离人外周血单个核细胞,提取RNA,用反转录-聚合酶链反应方法将T-bet的编码序列cDNA扩增,装入pMD18-T载体并送去测序。③BglⅡ+SalⅠ双酶切质粒pMD18-T-bet,经琼脂糖电泳切胶回收T-bet片段,将T-bet插入载体pEGFP-C1构建成重组真核表达载体pEGFP-C1-T-bet。④用双酶切和聚合酶链反应对插入片段进行分析和验证。结果:①反转录-聚合酶链反应产物经琼脂糖电泳结果显示在预期位置有相对分子质量为1608bp的特异性扩增带。②测序结果证实,T-bet的编码序列和Genbank中T-bet mRNA序列相同。③双酶切和聚合酶链反应结果证实插入片段序列正确。结论:实验成功扩增出人T-bet基因,构建了基因重组真核表达载体pEGFP-C1-T-bet,为探索T-bet基因对免疫细胞的调节作用和肿瘤基因治疗奠定了基础。
郝颖刘晓平徐勤魏小勇李宝金伊远学陶剑平张超张立兵
关键词：T淋巴细胞转录因子
腺病毒介导HSV-TK基因血管靶向治疗裸鼠皮下人肝癌细胞移植瘤被引量：3
2006年
目的：探讨重组腺病毒介导胸苷激酶系统通过血管靶向治疗裸鼠皮下人肝癌细胞移植瘤的疗效及作用机制。方法：32只BALB/c鼠皮下接种建立裸鼠皮下人肝癌细胞移植瘤模型,当瘤体达100 mm^3时随机分成4组,分别为更昔洛韦(GCV)组(Ⅰ)、空载体病毒组(Ⅱ)、重组腺病毒CMV-TK组(Ⅲ)及重组腺病毒AdKDR-TK组(Ⅳ)。各治疗组瘤内分别注入重组腺病毒液及空载体病毒液,重组腺病毒治疗组在病毒给予24 h后分别在腹腔内注射GcV,连续10 d；对照组腹腔内注入GCV。观察各组瘤体生长情况及免疫组化法测定肿瘤微血管密度(MVD)。结果：与对照组比较,第Ⅲ、Ⅳ组经治疗后肿瘤的生长均受到了明显的抑制,其抑瘤率分别为12．3%和24．5%(两者比较,P＜0．05)。肿瘤组织内的MVD,Ⅰ组为(37．4±8．6)个/mm^2、Ⅱ组为(30．6±7．8)个/mm^2、Ⅲ组为(27．6±7．1)个/mm^2、Ⅳ组为(10．7±4．1)个/mm^2,其中Ⅲ组与Ⅱ组(P＜0．05)、Ⅳ组与Ⅱ组(P＜0．01)、Ⅳ组与Ⅲ组(P＜0．01)之间的肿瘤内MVD比较均有统计学差异。结论：重组腺病毒介导以KDR为启动子的胸苷激酶系统能够通过血管靶向性地有效抑制肿瘤的生长。
李宝金宁长青张超郝颖刘晓平区庆嘉
关键词：血管靶向重组腺病毒
T-bet和c-FLIP双基因共表达质粒的构建及生物学活性检测被引量：1
2008年
目的构建携带T-bet和c-FLIP双基因的真核表达载体及检测其生物学活性。方法采用RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出T-bet和c-FLIPcDNA,利用pIRES和pEGFP-C1,构建T-bet和c-FLIP双基因真核表达载体pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP。采用非脂质体的脂质型介导载体将pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP转染至外周血淋巴细胞,观察T-bet和c-FLIP在外周血淋巴细胞中的表达,并检测其诱导淋巴细胞的抗凋亡作用及Th1/Th2细胞偏移。结果成功构建pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP质粒,运用非脂质体的脂质型介导载体将该质粒转染淋巴细胞,其转染率为34.6%。流式细胞仪分析未经pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP预处理的淋巴细胞在CH-11作用24h后,细胞的凋亡率分别为(50.12±8.02)%;经pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP预处理1d的淋巴细胞,其细胞凋亡率分别下降到(5.73±0.37)%;双基因表达的淋巴细胞的Th1型细胞因子IFN-γ表达水平明显高于空载体表达的淋巴细胞及未经处理的淋巴细胞组(P<0.01),且Th2型细胞因子IL-4表达水平较空载体表达的淋巴细胞及未经处理的淋巴细胞低(P<0.01),差异有统计学意义。结论转染T-bet和c-FLIP共表达基因后的T淋巴细胞可产生抗凋亡作用及向Th1细胞分化。
伊远学李宝金刘晓平张超张维冯子毅冷希圣
关键词：T-BET基因PEGFP-C1生物学活性共表达
小干扰RNA特异性抑制淋巴细胞T-bet表达的研究
2009年
目的探讨体外转录法合成的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人淋巴细胞T-bet基因表达及功能的影响。方法设计并合成4条siRNA(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3及siRNA-co),脂质体法转染淋巴细胞。转染后48h收集转染后细胞,采用RT-PCR方法检测细胞T-bet mRNA的抑制率;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测细胞上清液中IL-4和IFN-γ水平;将淋巴细胞与人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)共培养检测淋巴细胞对ECV304增殖的抑制作用。结果转染后48h半定量RT-PCR的检测显示siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3转染后的淋巴细胞T-bet表达抑制率分别为(72.50±1.01)%、(5.40±0.63)%和(30.90±0.90)%,以siRNA-1转染后的淋巴细胞T-bet表达抑制作用最强(P<0.05),其细胞上清液中IL-4水平最高,而IFN-γ的水平最低(P<0.05),siRNA-1转染淋巴细胞对人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)增殖的抑制作用低于siRNA-2及siRNA-3。结论siRNA可特异性抑制淋巴细胞T-bet基因的表达,从而为进一步研究siRNA在移植免疫耐受中应用提供了理论和实验基础。
张维李宝金伊远学吴立旋刘晓平陶剑平
关键词：RNA干扰小干扰RNA淋巴细胞
KDR启动子介导胸苷激酶体外靶向杀伤血管内皮细胞
2007年
目的构建含以KDR为启动子的HSV-tk重组腺病毒,体外评估其对血管内皮细胞的特异性杀伤效能。方法采用pAdeasy系统,构建受KDR启动子或巨细胞病毒(CMV)启动子调控并可表达HSV-tk基因的AdKDR-tk和AdCMV-tk,在293细胞中包装、扩增后,体外分别感染表达KDR的人脐静脉血管内皮细胞系(HUVEC)和不表达KDR的肝癌细胞系HepG2,用丙氧鸟苷(GCV)处理受染细胞,并以MTT法检测其细胞增殖情况。结果病毒滴度均为1×1010pfu/mL。在感染复数(MOI)为100的条件下,当细胞培养液中加入的GCV浓度由0增至50μg/mL时,感染含AdKDR-tk的HUVEC细胞和HepG2细胞其存活率由100%分别下降至(28.94±5.67)%和(75.45±2.91)%(P<0.01),而感染含AdCMV-tk的HUVEC细胞和HepG2细胞其存活率分别下降至(17.56±2.48)%和(23.15±5.72)%(P>0.05)。结论KDR启动子介导的HSV-tk具有特异性杀伤血管内皮细胞的作用。
李宝金张超宁长青伊远学郝颖刘晓平区庆嘉
关键词：内皮血管KDR启动子胸苷激酶
重组腺病毒介导的Bcl-2基因转染对缺氧再复氧肠上皮细胞的保护作用
2010年
目的探讨复制缺陷型重组腺病毒介导的Bcl-2基因转染对缺氧再复氧损伤肠上皮细胞的保护作用。方法构建能介导Bcl-2基因转染和表达的复制缺陷型重组腺病毒载体(Ad/CMV-Bcl-2),转染体外培养的小肠上皮细胞株(IEC-6),检测其Bcl-2基因表达变化,分别对正常对照组、缺氧复氧组(单纯给予缺氧复氧处理)、Ad-CMV/Bcl-2转染组(AdCMV/Bcl-2腺病毒载体转染48h后再给予缺氧复氧处理)细胞的凋亡率、死亡率及活力进行分析。结果对照组微弱表达,Ad/CMV-Bcl-2转染组细胞Bcl-2基因高表达;经缺氧再复氧处理后,Annexin-V-Flous试剂盒检测死亡细胞明显减少(P<0.01),凋亡显著受到抑制(P<0.01);采用MTT法证明,Ad/CMV-Bcl-2转染组细胞活力较对照组明显增强(P<0.01)。结论复制缺陷型重组腺病毒介导的Bcl-2基因转染可显著减轻缺氧再复氧导致的肠上皮细胞损伤。
伊远学刘筑罗效梅刘晓平李宝金张超冷希圣
关键词：腺病毒转染细胞低氧
腺病毒介导c-FLIPs基因诱导淋巴细胞抗凋亡作用被引量：1
2005年
目的　探讨表达c FLIPs重组腺病毒诱导淋巴细胞抗凋亡作用。方法　采用RT PCR方法,从人T淋巴细胞株的总RNA中克隆c FLIPs基因;通过pAdeasy系统,构建表达c FLIPs的重组腺病毒Ad c FLIPs;Hochest染色法及PI染色流式细胞仪检测anti Apo 1诱导感染Ad c FLIPs后的H9细胞凋亡。结果　采用RT PCR方法从人T淋巴细胞株中扩增出c FLIPs基因;构建重组腺病毒Ad c FLIPs ;经Hoechst染色,荧光显微镜下观察细胞核的形态,结果发现,经anti Apo 1诱导凋亡处理2 4h后,未经Ad c FLIPs感染的H9细胞有大量的细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的凋亡细胞;Ad c FLIPs感染的H9细胞中细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的细胞数明显减少,大部分细胞染色质呈弥漫均匀低强度荧光;流式细胞仪分析经PI染色后的H9细胞,未经Ad c FLIPs预处理的H9细胞在anti Apo 1作用2 4h后,细胞的凋亡率分别为4 8 33%±7 4 1% ;经Ad c FLIPs预处理1d的H9细胞,其细胞凋亡率分别下降到3 6 0 %±0 2 1%。结论　重组腺病毒Ad c FLIPs可有效地诱导淋巴细胞的抗凋亡作用。
冯子毅李宝金刘晓平
关键词：抗凋亡作用流式细胞仪分析显微镜下观察APO-1
HSV-tk基因治疗靶向载体的构建及特异性表达分析被引量：13
2006年
背景与目的:阻断肿瘤组织内血管生成和血管化是一个很有发展前景的灭瘤途径之一。胸苷激酶自杀基因系统(herpessimplexvirus-thymidinekinase,HSV-tk/GCV)能有效杀伤血管内皮细胞,目前多采用巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)作为启动子,但其杀伤缺乏特异性。KDR(kinasedomaininsertcontainingreceptor)是血管内皮生长因子的两种受体之一,它在肿瘤血管内皮细胞中高表达,而在正常组织中呈低表达。本研究是构建KDR启动子介导的HSV-tk重组腺病毒、并对其内皮细胞特异性表达作用进行分析。方法:采用pAdeasy系统,按定向克隆方法将KDR-tk片段正向插入表达载体的多克隆位点间,构建受KDR启动子调控并可表达HSV-tk基因的AdKDR-tk,在293细胞中包装、扩增后,体外感染人脐静脉血管内皮细胞系(humanumbilicalvenousendothelialcells,HUVEC)和不表达KDR的肝癌细胞系HepG2。用更昔洛韦(ganciclovir,GCV)处理受染细胞,并以MTT法检测其细胞增殖情况。结果:经限制性酶切分析,RT-PCR及PCR方法鉴定,插入基因大小、位置、方向正确。病毒滴度为1×1010pfu/ml。在感染复数(multiplicityofinfection,MOI)为100的条件下,GCV浓度由0增至50μg/ml时,感染含AdKDR-tk的HUVEC细胞和HepG2细胞存活率由100%分别下降至(28.94±5.67)%和(75.45±2.91)%(P<0.01)。结论:构建的含KDR-tk重组腺病毒可在血管内皮细胞中特异性地表达HSV-tk。
刘晓平李宝金张超
关键词：KDR启动子单纯疱疹病毒胸苷激酶靶向基因治疗腺病毒HEPG2细胞
胸苷激酶系统血管靶向抗肝癌效应的机制被引量：1
2006年
目的探讨KDR为启动子的HSV-tk重组腺病毒对肿瘤血管内皮细胞的特异性杀伤效能及机制.方法采用pAdeasy系统,构建受KDR启动子或巨细胞病毒(CMV)启动子调控并可表达HSV-tk基因的重组腺病毒,体外分别感染人脐静脉血管内皮细胞系(HUVEC)和肝癌细胞系HepG2,并以MTT法检测其细胞增殖情况.人肝癌皮下移植瘤裸鼠随机分成更昔洛韦组(I),空载体病毒组(II),重组腺病毒CMV-tk组(III)及重组腺病毒AdKDR-tk组(IV).各治疗组瘤内分别注入重组腺病毒液及空载体病毒液.重组腺病毒治疗组在病毒给予24h后分别ipGCV,连续10d.对照组,ipGCV.观察瘤体大小及免疫组化法定量测定肿瘤微血管密度.结果病毒滴度均为1×1013pfu/L.感染复数(MOI)为100的条件下,GCV浓度由0增至50mg/L时感染含AdKDR-tk的HUVEC细胞和HepG2细胞存活率由(90.7±4.5)%和(91.8±4.3)%分别下降至(28.9±5.7)%和(75.4±2.9)%(P<0.01),而感染含AdCMV-tk的HUVEC细胞和HepG2细胞存活率分别下降至(17.6±2.5)%和(23.2±5.7)%(P>0.05).体内试验中,与对照组比较,Ⅲ,IV组经治疗后肿瘤的生长均受到了明显的抑制,其抑瘤率分别为(14.7±3.2)%和(23.6±5.6)%(P<0.05).组织内的平均血管密度(MVD),Ⅰ组为37.4±8.6,Ⅱ组为30.6±7.8,Ⅲ组为27.6±7.1,IV组为10.7±4.1.其中,Ⅲ组与Ⅱ组(P<0.05),IV组与Ⅱ组(P<0.01),IV组与Ⅲ组(P<0.01)之间比较均有统计学差异.结论KDR启动子介导的HSV-tk具有特异性杀伤肿瘤血管内皮细胞的作用.
李宝金张超周玉梅郝颖刘晓平区庆嘉
关键词：KDR启动子重组腺病毒HEPG2细胞BALB/C
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