国家自然科学基金(30471812)
- 作品数：9 被引量：21H指数：3
- 相关作者：姚元庆朱晓明侯开波王晓红雷迎峰更多>>
- 相关机构：第四军医大学唐都医院第四军医大学中国人民解放军总医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人类白细胞抗原G及其异构体mRNA在人类着床前胚胎的表达被引量：2
- 2006年
- 目的研究人类白细胞抗原G（human leukocyte antigen，HLA-G）及其异构体mRNA在人类着床前胚胎的表达，探讨HLA-G在人类胚胎早期发育中的作用和意义。方法第四军医大学唐都医院妇产科生殖医学中心2003-01-2005-12期间，以体外受精-胚胎移植技术助孕过程中剩余的患者自愿捐赠的人类早期胚胎作为研究对象，采用巢式RT-PCR检测早期胚胎HLA-G及其异构体mRNA的表达。结果检测20个受精后2—3d的人类卵裂期胚胎，2、4、6、8细胞期胚胎各5个，有7个胚胎表达HLA-G及其部分的异构体mRNA。检测5个受精后4d的人类桑葚胚，全部表达HLA-G及其部分的异构体mRNA。检测25个受精后6d的扩张期囊胚，全部受检囊胚均表达HLA-G mRNA，但异构体表达不同。在受检的25个扩张期囊胚中，20个表达HLA-G1（表达率80．0％），4个表达G2（表达率16．0％），25个表达G3（表达率100％）、24个表达G4（表达率96．0％），5个表达G5（表达率20．0％），8个表达G6（表达率32．0％）。结论着床前的人类胚胎表达HLA-G及其异构体mRNA，其阳性表达胚胎的比例，随着胚胎发育的进程而增加。HLA-G异构体在人类着床前胚胎差异表达。
- 王晓红姚元庆罗亚宁
- 关键词：抗原
- 人类白细胞相关抗原-G及其各亚型mRNA在正常妊娠及重度子前期患者胎盘组织中的表达被引量：1
- 2006年
- 目的研究人类白细胞相关抗原-G(HLA-G)及其各个亚型mRNA在正常妊娠及重度子前期患者胎盘组织中的表达。方法选取2005-01-2005-06第四军医大学唐都医院10例重度子前期患者(研究组)及10例正常妊娠胎盘组织(对照组),应用荧光定量RT-PCR比较两组间HLA-G及其各个亚型mRNA(HLA-G1、G2、G3、G4、G5、G6)的表达。结果与对照组相比,重度子前期患者胎盘组织中总HLA-GmRNA显著降低,以HLA-G1、HLA-G3降低为主,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HLA-G1与HLA-G3在胎盘组织中的低表达可能与妊娠期高血压疾病的发病和病理生理过程有关。
- 朱晓明杨瑛张惠中刘丽赵辉侯开波姚元庆
- 关键词：子痫前期HLA-G胎盘
- HLA-G蛋白在人类着床前胚胎的表达被引量：8
- 2006年
- 目的:探讨HLA-G在人类胚胎早期发育和免疫耐受中的作用和意义。方法:以体外受精-胚胎移植技术助孕过程中剩余的、自愿捐赠的人类早期胚胎作为研究对象,采用免疫荧光染色技术,检测人类着床前胚胎HLA-G蛋白的表达。结果:采用MEM-G/9单抗进行了HLA-G免疫荧光染色,20个2-8-细胞期的人类早期胚胎中15个胚胎HLA-G蛋白检测阳性;3个桑椹胚和5个囊胚均为阳性。结论:着床前人类早期胚胎表达HLA-G蛋白。
- 王晓红姚元庆罗亚宁
- miR-152调节JEG-3细胞中HLA-G的表达被引量：1
- 2011年
- 目的研究miR-152分子对JEG-3细胞中HLA-G表达水平的调控。方法在滋养细胞肿瘤细胞系JEG-3细胞中分别转染pre-miR-152(实验组),Cy3标记的pre-miRNA-control(阴性对照),空白对照(NC)为未转染的JEG-3细胞。转染48h、72h分别进行RT-PCR与Western blot实验检测细胞中miR-152、HLA-G mRNA与蛋白的表达水平。结果 RT-PCR结果显示在细胞中转染pre-miR-152分子后miR-152的表达显著增高(P<0.05);转染后HLA-G mRNA的表达水平在各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果显示与对照组相比,实验组的HLA-G蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论 miR-152可能在翻译水平抑制HLA-G的表达。
- 朱晓明王晓红姜锋肖西峰尹国武
- 关键词：JEG-3细胞HLA-G
- RNA干扰技术抑制JEG-3细胞中HLA-G的表达被引量：4
- 2006年
- 目的:以人类白细胞抗原G基因(HLA-G)为靶基因,采用RNA干扰(RNAi)技术特异性地抑制JEG-3细胞中HLA-G的表达。方法:针对HLA-G基因设计一段小干扰RNA(siRNA),由Ambion公司化学合成,用脂质体lipofectamine2000将该siRNA转染JEG-3细胞,采用RT-PCR、流式细胞术和Westernblot分别从mRNA和蛋白质水平检测该siRNA对HLA-G表达的影响。结果:针对HLA-G的siRNA能够明显下调JEG-3细胞中HLA-G的表达水平,并具有良好的特异性。结论:在JEG-3细胞系中采用RNAi技术特异性下调了HLA-G基因的表达,为进一步研究HLA-G在人类的母胎免疫耐受、正常妊娠的维持及助孕技术应用等方面的作用奠定了实验基础。
- 侯开波姚元庆雷迎峰王晓红赵宏喜尹文朱晓明
- 关键词：HLA-GRNA干扰JEG-3细胞
- HLA-G基因siRNA真核表达质粒的构建及其对转染JEG-3细胞株HLA-G表达的抑制作用被引量：1
- 2007年
- 目的:构建针对人类白细胞抗原-G基因(human leukocyte antigen-G,HLA-G)基因siRNA表达质粒,观察其对转染JEG-3细胞的HLA-G基因表达的抑制作用。方法:选择RNA干涉靶序列,体外合成两段互补的寡核苷酸,通过与线性化pSuppressor-U6-neo连接、转化大肠杆菌,扩增、纯化得到所需质粒,通过琼脂糖凝胶电泳及基因测序鉴定其分子量及插入片段的序列。将重组真核表达质粒pSuppressor-U6-neo-HLA-G用脂质体法转染JEG-3绒癌细胞株。应用RT-PCR、Western-blot方法检测转染的JEG-3细胞中HLA-G基因的表达水平。结果:双酶切鉴定及测序图显示,插入的寡核苷酸序列与设计的序列完全相符。RT-PCR和Western-blot结果均表明瞬时转染重组pSuppressor-U6-neo-HLA-G质粒明显抑制了JEG-3细胞中HLA-G基因的表达。结论:本试验成功构建了针对HLA-G基因的siRNAs表达质粒pSuppressor-U6-neo-HLA-G,瞬时转染JEG-3细胞后可以明显抑制HLA-G基因的表达。
- 陈建辉姚元庆侯开波王晓蓉雷迎峰尹文
- 关键词：HLA抗原转染JEG-3细胞
- HLA-G短干扰RNA真核表达载体的构建及其在JEG-3细胞株中抑制HLA-G表达的研究
- 2006年
- 目的:构建HLA-G短干扰RNA表达质粒及探讨HLA-G的功能。方法:根据siRNA设计的原则,结合pSilencer2.1-U6-neo质粒的特点,针对HLA-G基因设计并合成两对寡聚DNA片段,退火后将其克隆入pSilencer2.1-U6-neo,将重组真核表达质粒pSi-lencer2.1-U6-neo-HLA-G采用脂质体法转染JEG-3绒癌细胞株。应用RT-PCR、W estern-blot等方法检测转染的JEG-3细胞中HLA-G基因的表达水平;MTT法检测转染后JEG-3细胞增殖的变化。结果:RT-PCR和W estern-blot结果均表明瞬时转染重组pSilencer2.1-U6-neo-HLA-G质粒明显抑制了JEG-3细胞中HLA-G基因的表达。实验组JEG-3细胞生长较对照组明显受到抑制。结论:pSilencer2.1-U6-neo-HLA-G质粒构建成功,可下调JEG-3细胞中HLG的表达,抑制绒癌细胞生长。
- 侯开波姚元庆雷迎峰朱晓明陈建辉
- 关键词：RNA
- 针对HLA-G的siRNA的载体构建与表达及效应检测被引量：1
- 2007年
- 目的构建针对HLA-G的siRNA的表达载体,研究其对NK细胞杀伤效应的影响。方法构建针对HLA-G的siRNA真核表达质粒pSuppressor-U6-neo-HLA-G,转染JEG-3滋养细胞系。采用RT-PCR、Western blot检测转染的JEG-3细胞中HLA-G的表达水平。将NK-92MI细胞(效应细胞)与滋养细胞(靶细胞)共同培养,以LDH释放法观察不同效靶比例时NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤效应。结果NK-92MI细胞对转染针对HLA-G的siRNA的JEG-3细胞的杀伤作用较未转染细胞明显升高(P<0.001)。结论针对HLA-G的SiRNA增加NK细胞对滋养细胞的杀伤,HLA-G具有保护滋养细胞免受NK细胞杀伤的作用。
- 陈建辉姚元庆侯开波雷迎峰尹文
- 关键词：HLA-GSIRNA
- HLA-G调节滋养细胞增殖功能的研究被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨人类白细胞抗原-G(HLA-G)对滋养细胞增殖功能的调节。方法:实验分为3组:用滴度为5×108pfu/ml腺病毒感染液转染JEG-3细胞为目的siRNA组,用滴度为109pfu/ml腺病毒感染液转染JEG-3细胞为非特异siRNA组,不产生siRNA的空病毒感染组为空白对照组。采用RNA干扰技术,下调JEG-3细胞中HLA-G基因的表达,对HLA-G降调节后的滋养细胞进行非放射性细胞毒测定,检测490nm处的OD值,比较3组的染色实验结果和比色实验结果。结果:①实验后目的siRNA组与非特异siRNA组细胞蓝染,实验后空白对照组细胞没有被蓝染;②非特异siRNA组与空白对照组OD490nm值比较,两组之间差异无统计学意义(q=3.15,P>0.05);目的siRNA组与非特异siRNA组、空白对照组OD490nm值比较,差异均有统计学意义或高度统计学意义(q=3.92,P<0.05;q=5.58,P<0.01)。结论:HLA-G表达下调后滋养细胞增殖受到抑制,推测HLA-G可能对滋养细胞增殖功能有维持、促进作用。
- 庞婷孙丽丽朱晓明王珺杨艳红姚元庆
- 关键词：人类白细胞抗原-G细胞增殖RNA干扰
