国家自然科学基金(30425031)
- 作品数：59 被引量：387H指数：10
- 相关作者：焦新安潘志明黄金林刘秀梵殷月兰更多>>
- 相关机构：扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室生物技术公司更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备和鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的:获得分泌抗H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞。方法:以H9N2亚型AIV为免疫原,免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag-14,在PEG4000的作用下进行细胞融合,通过血凝抑制(HI)试验筛选分泌抗H9亚型AIV血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞。结果:经过连续3～4次克隆化,获得能稳定分泌抗H9亚型AIV血凝素的单克隆抗体细胞系6株,分别命名为1B2、1C10、1G2、2B7、2E3和5E11。6株细胞培养上清HI效价为24～28,腹水HI效价为210～213。除1G2为IgM外,其余5株均为IgG1。Western blotting结果显示,1B2、1C10、2B7和2E3能与AIVH9蛋白在Mr为75000处反应,表明其是针对AIVH9亚型血凝素蛋白的单抗。特异性试验表明该6株单抗均只与H9亚型AIV发生特异性HI反应,而不与其他14个HA亚型的AIV及新城疫病毒、传染性支气管炎病毒发生交叉反应,显示出良好的特异性。结论:制备了针对H9亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体,为禽流感的快速诊断和病毒的抗原性分析等奠定了基础。
- 孙林季琰左为亮王秀荣潘志明焦新安
- 关键词：禽流感病毒H9亚型血凝素单克隆抗体
- 减毒沙门氏菌介导的小鼠肝炎病毒S1基因DNA疫苗的免疫特性分析被引量：3
- 2007年
- 根据GenBank公开序列自行设计一对引物,通过RT-PCR扩增出小鼠肝炎病毒的全长S1基因,并将其插入真核表达质粒pVAX1中,构建出重组真核表达质粒pVAX1-S1。将重组质粒转染COS-7细胞,采用间接免疫荧光检测出S1蛋白的体外表达。将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207中,构建出运送DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-S1)。分别以5×108CFU、1×109CFU、2×109CFU剂量的重组菌口服接种6周龄BALB/c小鼠,试验结果表明,重组菌对小鼠具有良好的安全性。以1×109CFU剂量的重组菌口服免疫小鼠,抗体检测结果显示,在二免后两周和三免后两周,重组菌免疫组的血清抗体水平与SL7207(pVAX1)空载体免疫组间分别存在显著性差异(P<0.05)和极显著性差异(P<0.01)。在三免后两周重组菌免疫组出现了较高水平的肠黏膜抗体。
- 焦红梅焦新安殷月兰潘志明孟松树王禹蒋金金
- 关键词：小鼠肝炎病毒S1基因减毒沙门氏菌免疫特性
- 鸡白痢沙门菌基因组差异片段的筛选与分析被引量：4
- 2007年
- 采用抑制性消减杂交技术(SSH)对鸡白痢沙门菌C79-13株与鸡伤寒沙门菌Sg9株进行了基因组差异片段分析。结果,从C79-13株中共检出13个特异性差异片段。经同源分析,这些序列可分为3类:噬菌体相关序列、质粒相关序列和已知功能序列。这些差异片段包含一些重要的沙门菌毒力相关基因,如编码大肠杆菌素I、paJ蛋白、尾突蛋白、切除酶的基因。结果表明,鸡白痢沙门菌C79-13株与鸡伤寒沙门菌Sg9株基因组间存在较多差异基因,这些差异片段为确定鸡白痢沙门菌特异性遗传标志,建立分子鉴别新体系提供了基础。
- 徐耀辉焦新安李求春潘志明黄金林
- 关键词：鸡白痢沙门菌抑制性消减杂交
- 鸡白痢和肠炎沙门氏菌抑制差减文库的构建与分析被引量：9
- 2007年
- 应用抑制差减杂交技术(SSH)对鸡白痢沙门氏菌C79-13与肠炎沙门氏菌50041进行基因组片段的差异分析,构建鸡白痢沙门氏菌的差减文库。经Dot-blot筛选,并对部分片段进行测序和同源性分析。结果表明:这些序列主要分为3类,即型分泌系统相关序列、质粒转移相关序列、未知功能序列。其中2个差减片段与编码福氏志贺菌侵入质粒抗原IpaJ蛋白基因的同源性达50%。证明所构建的差减文库可为鸡白痢沙门氏菌特异性致病基因和其致病机理的研究提供重要的依据。
- 李求春焦新安徐耀辉潘志明黄金林
- 关键词：鸡白痢沙门氏菌肠炎沙门氏菌抑制差减杂交
- 重组减毒细菌运送CD8^+T细胞表位的效应分析被引量：4
- 2006年
- 目的:分析重组减毒菌体外运送CD8+T细胞表位的效应。方法:以表达卵清蛋白(OVA)和淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)CD8+T细胞表位的重组菌13A(ptG2F)、25A(ptG2F)和SL7207(ptG2F)感染抗原提呈细胞(APC)LKb、LLd和骨髓源树突状细胞(BMDC),应用体外抗原提呈试验检测APC对重组菌运送的CD8+T细胞表位的提呈效应。结果:感染试验证实,减毒菌13A、25A和SL7207对LKb细胞或LLd细胞均具有良好的侵袭能力,BMDC对重组菌具有很好的摄取功能。抗原提呈试验结果显示,在感染的早期(2h),LKb、LLd细胞和BMDC均可提呈重组菌13A(ptG2F)或SL7207(ptG2F)运送的T细胞表位;在感染的晚期(48h),LKb细胞对OVA257-264CD8+T细胞表位的提呈效应降低,LLd细胞对LCMV118-132CD8+T细胞表位的提呈效应增强。3种APC均不能提呈25A(ptG2F)运送的T细胞表位。另外,在同样的作用条件下,BMDC对减毒菌运送的抗原表位的提呈效应要强于LKb和LLd细胞。结论:重组菌能运送CD8+T细胞表位,为基于减毒细菌的新型基因工程疫苗的分子设计提供了有益借鉴。
- 潘志明张晓明焦新安Richard Lo-ManClaude Leclerc刘秀梵
- 关键词：减毒鼠伤寒沙门氏菌
- 稳定携带新城疫病毒DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建及其免疫原性
- 采用PCR技术从重组质粒pVAX1-F中扩增出新城疫病毒JS5株的融合蛋白(F)基因,将其克隆入真核表达质粒pmcDNA3.1+中,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-F。通过电穿孔转化法将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌...
- 潘志明程宁宁游猛崔一晨黄金林焦新安刘秀梵
- 关键词：新城疫DNA疫苗减毒鼠伤寒沙门氏菌质粒稳定性免疫效力
- 文献传递
- 小鼠骨髓源性树突状细胞的体外诱导被引量：1
- 2007年
- 分离树突状细胞（DC）的原理是依据DC的低密度和半黏附特性，DC缺乏Fc受体，可对获得的DC进一步纯化。这种方法获取的DC数量有限。细胞因子诱生法是目前体外扩增DC常用的方法。其中，扩增效果最好的细胞因子是粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）和白细胞介素4（IL-4）。
- 胡茂志戴华焦新安张辉潘志明高明燕程宁宁刘秀梵
- 关键词：树突状细胞粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子体外诱导髓源性鼠骨白细胞介素
- 破伤风毒素C片段单克隆抗体的研制
- 目的:研制抗破伤风毒素C片段(TetC)的单克隆抗体(mAb)。方法:以纯化蛋白His-TetC免疫6周龄雌性BALB/c小鼠。末次加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag-14融合,应用间接ELISA筛选阳性克...
- 单艳菊潘志明张成全孙林焦新安
- 关键词：单克隆抗体
- 文献传递
- 以减毒沙门氏菌为载体的小鼠肝炎病毒DNA疫苗的构建及其免疫原性被引量：3
- 2007年
- 目的:构建以减毒沙门氏菌为载体的小鼠肝炎病毒DNA疫苗,研究该疫苗的免疫原性。方法:以小鼠肝炎病毒S1基因的重组真核表达质粒pVAX1-S1免疫BALB/c小鼠,ELISA检测其诱导抗体产生情况;再将重组质粒pVAX1-S1电转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207中,构建运送S1基因的重组减毒沙门氏菌SL7207(pVAX1-S1),口服免疫BALB/c小鼠,间接免疫荧光试验鉴定减毒沙门氏菌运送的DNA疫苗的免疫原性。结果:与pVAX1空载体对照组相比,重组真核表达质粒pVAX1-S1免疫组二免及三免后抗体水平分别存在显著性差异(P<0.05)和极显著性差异(P<0.01)。减毒沙门氏菌运送的DNA疫苗SL7207(pVAX1-S1)诱导小鼠产生了特异性的血清抗体。结论:构建的重组减毒沙门氏菌SL7207(pVAX1-S1)具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生特异性的体液免疫应答。这为进一步研制冠状病毒新型基因疫苗奠定了基础。
- 焦红梅潘志明崔一晨田华荣焦新安
- 关键词：小鼠肝炎病毒S1基因DNA疫苗减毒沙门氏菌免疫原性
- 鸡CD3分子单克隆抗体及其免疫生物学特性
- 研制抗鸡 CD3分子特异性单克隆抗体(mAb)。用重组真核表达质粒 pcD- NA3．1-CD3免疫6周龄 BALB/c 小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,制备抗鸡 CD3分子 mAb。共获得7株特异性分泌抗鸡 CD3分子的...
- 张小燕潘志明胡青海胡茂志孙林李玉君董慧单艳菊张成全白海焦新安
- 关键词：单克隆抗体
- 文献传递
