国家自然科学基金(30973026)
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
- 相关作者：尹宗生张辉高维陆沈政张胜权更多>>
- 相关机构：安徽医科大学第一附属医院安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 反应性星形胶质细胞在脊髓损伤后作用研究进展被引量：5
- 2012年
- 星形胶质细胞是脊髓内最主要的胶质细胞类型,广泛分布于脊髓的各个区域。星形胶质细胞在脊髓损伤后经过一系列变化形成反应性星形胶质细胞。反应性星形胶质细胞与星形胶质细胞在形态、分子表达等方面有许多不同之处,并在脊髓损伤与修复过程中起重要作用。现就脊髓损伤与修复过程中有关RAS的作用的最新研究进展情况作一综述。
- 沈政尹宗生
- 关键词：反应性星形胶质细胞脊髓损伤胶质瘢痕神经干细胞
- 脊髓损伤后反应性星形胶质细胞的分离培养及多能性鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的探讨脊髓损伤(SCI)后反应性星形胶质细胞(RAS)的多能性,为其对SCI的临床治疗提供理论依据。方法成年大鼠SCI后,分离培养脊髓内RAS;对分离培养的细胞以及诱导分化后细胞行细胞免疫荧光鉴定;在培养RAS的培养基中添加5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),观察分离培养的细胞的增殖情况。结果分离培养的细胞可同时表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和巢蛋白(nestin),诱导分化细胞可表达微球相关蛋白2(MAP-2)、受体相互作用蛋白(RIP)和GFAP,培养基中添加BrdU培养一段时间后细胞球可表达BrdU。结论体内分离培养的成体大鼠SCI后的RAS具有多能性及自我更新潜能,可能作为内源性神经干细胞修复损伤脊髓。
- 沈政尹宗生高维陆张辉
- 关键词：脊髓损伤反应性星形胶质细胞内源性神经干细胞巢蛋白
- 大鼠表皮生长因子、睫状神经营养因子真核表达载体的构建及其体外表达的鉴定被引量：2
- 2012年
- 背景:星形胶质细胞被激活后表现出神经干细胞的特性,细胞表面的神经营养因子(表皮生长因子、睫状神经营养因子)受体超表达,通过改善复杂的内环境,有利于定向诱导神经干细胞向神经元的分化。目的:构建大鼠pSecTag2/HygroB-EGF、pSecTag2/Hygro B-CNTF真核表达质粒,检测其在cos-7细胞中的共表达。方法:采用反转录-聚合酶链反应技术从大鼠颌下腺、坐骨神经组织总RNA中扩增出表皮生长因子、睫状神经营养因子基因功能区,将上述基因片段分别连接到真核表达载体pSecTag2/Hygro B,聚合酶链反应初步筛选、双酶切鉴定后送测序。将构建成功的两种重组载体单独及共转染cos-7细胞,Western blot法鉴定重组表皮生长因子、睫状神经营养因子蛋白的瞬时表达。结果与结论:反转录-聚合酶链反应结果证实成功获得大鼠表皮生长因子、睫状神经营养因子cDNA。DNA序列分析证实2种真核表达载体中的表皮生长因子、睫状神经营养因子序列与GenBank中目的序列一致。脂质体介导转染cos-7细胞48h后,Western blot鉴定重组表皮生长因子、睫状神经营养因子蛋白在cos-7细胞中的表达,分别在Mr6000,22000处出现阳性条带。提示大鼠表皮生长因子、睫状神经营养因子基因的真核表达载体pSecTag2/HygroB-EGF、pSecTag2/Hygro B-CNTF构建成功,共转染cos-7细胞后能够共表达重组表皮生长因子、睫状神经营养因子蛋白。
- 何健尹宗生高维陆罗庆礼张胜权
- 关键词：表皮生长因子睫状神经营养因子真核表达载体转染
- 诱导多功能干细胞治疗脊髓损伤的现状及思考被引量：2
- 2013年
- 背景: 目前对脊髓损伤的治疗方法有激素冲击治疗,急诊手术减压及最新发展的干细胞治疗等方法。已有大量工作聚焦于干细胞治疗脊髓损伤的研究方面,并已成为热点。目的: 综述诱导多功能干细胞治疗脊髓损伤的相关研究现状及未来发展趋势。方法: 应用计算机检索PubMed数据库1980年1月至2012年12月期间的相关文章,检索关键词为"spine injury,induced pluripotent stem cells,IPS"。结果与结论: 共纳入35篇文章,均就诱导多能干细胞治疗脊髓损伤持赞同或支持态度。结果表明,诱导多功能干细胞直接来源于自体分离得到,解决了干细胞移植中伦理以及道德等问题,同时避免了异体排斥反应也为移植提供了大量的细胞来源。对于脊髓损伤的治疗方面目前只有动物实验及少量临床实验支持,但其在动物实验中效果良好,安全性较高。诱导多功能干细胞治疗脊髓损伤现存的问题主要是诱导多功能干细胞的诱导分化方法不成熟,并发症也较多。因此,诱导多功能干细胞的诱导分化及使用安全性将成为研究关键。
- 刘文骏张辉尹宗生
- 关键词：干细胞
- EGF与CNTF基因共转染对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响及机制探讨被引量：1
- 2013年
- 目的研究表皮生长因子(EGF)与睫状神经营养因子(CNTF)基因共转染对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响,并探讨其机制。方法 96只SD大鼠随机均分为EGF转染组(A组)、CNTF转染组(B组)、CNTF与EGF共转染组(C组)和对照组(D组)4组。采用改良Allen's法制备大鼠脊髓损伤模型,分别向A、B、C组和D组持续转染重组EGF与CNTF质粒和空白质粒各5μg。术后1、2、4、6周采用BBB运动功能评分系统检测大鼠运动功能恢复情况;采用RT-PCR和Western blot法检测EGF与CNTF基因的表达;采用免疫荧光双标染色和组织学观察EGF与CNTF对反应性星形胶质细胞增殖分化的影响以及脊髓组织病理变化情况。结果术后2、4、6周运动功能评分C组BBB评分明显高于其余3组(P<0.05)。RT-PCR和Western blot法检测显示A组大鼠脊髓组织可见EGF,B组可见CNTF mRNA与蛋白的表达,C组可见共同表达,而D组则未见明显表达。组织学观察示C组脊髓结构以及神经元形态恢复较好且逐渐趋于正常,且免疫荧光双标染色示C组脊髓组织中Nestin阳性的星形胶质细胞数较D组明显增多(P<0.05)。结论 EGF与CNTF基因能够促进脊髓损伤后星形胶质细胞逆分化,从而促进脊髓功能的修复。
- 田丰尹宗生高维陆张辉张胜权黄大可
- 关键词：睫状神经营养因子共转染脊髓损伤运动功能恢复
- 神经干细胞单细胞与神经球治疗大鼠脊髓损伤的对比研究被引量：1
- 2012年
- 目的比较神经干细胞(neural stem cells,NSCs)单细胞与神经球移植治疗大鼠脊髓损伤(spinal cordinjury,SCI)的效果,研究两种NSCs移植方法治疗SCI的有效性。方法取成年SD大鼠2只,体外分离脊髓组织并行NSCs培养,取第3代细胞行Hoechst33342、巢蛋白染色及贴壁分化鉴定。另取成年SD大鼠(体重230～250 g)60只,随机分为3组,每组20只,采用改良Allen法制备大鼠脊髓T10损伤模型。各组分别于SCI处缓慢注射5μL生理盐水(A组)、第3代NSCs单细胞(B组)、第3代NSCs神经球(C组)。分别于术前及术后3、7、14、21、28 d采用BBB行为功能评定量表评定各组大鼠后肢功能;术后各时间点取材行HE染色和微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP-2)免疫组织荧光染色观察。结果经形态学观察及鉴定,所培养的细胞为NSCs。术后3 d各组BBB评分较术前显著下降,术后3、7 d各组间BBB评分比较差异均无统计学意义(P>0.05);随时间延长BBB评分不同程度增加,术后14、21、28 d,B、C组BBB评分优于A组,C组优于B组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。HE染色示C组较A、B组脊髓结构清晰,瘢痕形成少。MAP-2免疫组织荧光染色示,术后3、7 d各组间阳性细胞数比较差异均无统计学意义(P>0.05);术后14、21、28 d,B、C组阳性细胞数显著多于A组,C组多于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用NSCs神经球移植较单细胞移植更明显促进NSCs向神经元分化,更有利于SCI后下肢功能恢复。
- 钟林张辉高维陆尹宗生
- 关键词：神经干细胞脊髓损伤细胞移植神经球
- 脊髓神经干细胞Niche的研究进展被引量：1
- 2012年
- 背景:脊髓损伤是临床上常见的骨科疾病,大量工作聚焦于神经干细胞治疗脊髓损伤的研究上,脊髓神经干细胞Niche对神经干细胞的作用成为了新的热点。目的:综述脊髓神经干细胞Niche的相关研究进展。方法:应用计算机检索PubMed 1980-01/2011-11期间的相关文章,检索词为"neural stem cells,niche/microenvironment,spinalcord",并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库2003-01/2011-11期间的相关文章,检索词为"神经干细胞,微环境,脊髓损伤",并限定文章语言种类为中文。此外还手工查阅相关专著数部。结果与结论:共检索到文献483篇,最终纳入31篇。脊髓神经干细胞Niche为脊髓神经干细胞生存、自我更新以及分化提供了相对稳定的微环境,脊髓损伤后脊髓神经干细胞Niche的变化对脊髓神经干细胞的命运有着重要的影响。了解脊髓神经干细胞Niche中的神经干细胞、细胞组成、分子调节以及脊髓损伤后这一Niche中部分细胞的变化等的研究进展为应用神经干细胞治疗脊髓损伤提供了理论基础。
- 廖法学张辉尹宗生
- 关键词：神经干细胞微环境脊髓脊髓损伤
