国家自然科学基金(30425023) 作品数:17 被引量:62 H指数:5 相关作者: 陈林 苏楠 赵玲 李福兵 陈锚锚 更多>> 相关机构: 第三军医大学大坪医院 重庆医科大学 重庆工学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 重庆市科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
小鼠骨损伤模型在骨修复机制研究中的应用 被引量:10 2007年 骨折是常见多发病,建立标准的骨损伤动物模型是进行骨折实验研究的基础,由于小鼠具有和人类相似的遗传背景,并且可进行多种遗传修饰等优势,因此在骨折研究中的应用越来越广泛。 苏楠 陈林关键词:小鼠 骨折模型 软骨细胞条件性敲除PTEN基因的FGFR3功能增强型点突变小鼠的获得及其表型初步分析 被引量:3 2009年 目的获得在软骨细胞中条件性敲除PTEN基因的FGFR3增强型点突变小鼠并进行初步表型分析。方法通过PTEN条件性基因敲除小鼠(Pten^flox/flox小鼠),与软骨细胞特异表达Cre重组酶的小鼠(Col2αCre)交配,获得在软骨细胞中特异敲除PTEN基因小鼠(Co12αCre:Pten^flox/flox);同时,利用Pten^flox/flox小鼠与FGFR3增强型点突变小鼠(Fgfr3^G369C/小鼠,即ACH小鼠)交配,子代杂合子小鼠(Pten^flox/+:ACH)之间再交配,获得Pten^flox/flox:ACH小鼠;通过Col2αCre:Pten^flox/flox和Pten^flox/flox:ACH交配即可获得在软骨细胞中特异性敲除PTEN基因的FGFR3增强型点突变小鼠(Col2αCre:Pten^flox/flox:ACH)。采用PCR对小鼠基因型进行鉴定,免疫荧光染色检测PTEN基因的敲除效率,通过X光平片摄影对小鼠的表型进行初步分析。结果获得了在软骨细胞中敲除PTEN的FGFR3点突变小鼠,免疫荧光染色证实Col2αCre:Pten^flox/flox:ACH小鼠软骨细胞中PTEN蛋白因为基因敲除而表达很低。初步的表型分析显示:Col2αCre:Pten^flox/flox:ACH小鼠身长、尾长均较Pten^flox/flox:ACH小鼠长(P〈0.05,n=5)。Col2αCre:Pten^flox/flox:ACH小鼠表型,较Pten^flox/flox:ACH小鼠的侏儒表型有所缓解。结论采用基于Cre/LoxP系统的条件性基因敲除策略,获得了在软骨细胞中敲除PTEN基因的FGFR3增强型突变小鼠,表型分析初步显示,软骨细胞特异性敲除PTEN基因可部分缓解由FGFR3增强型点突变所导致的小鼠侏儒表型。该小鼠的获得,为研究P13K/AKT信号通路在FGFR3突变介导的软骨生长抑制中的作用提供了实验动物平台。 雷子贤 戚华兵 苏楠 赵子瑜 陈锚锚 何启芬 赵玲 金旻 谢杨丽 李福兵 杜晓兰 陈林关键词:PTEN FGFR3 软骨发育不全 小鼠 静电纺聚合物纳米纤维在骨组织工程研究中的进展 被引量:4 2010年 组织工程骨在骨缺损、骨不连及骨折延期愈合等骨骼疾病的治疗中有重要应用前景,、组织工程支架是组织工程研究的核心内容之一,静电纺丝制备的纳米纤维以其优异的性能,近年来已开始成为骨组织支架材料的重要研究对象。综述了静电纺聚合物纳米材料包括天然高分子聚合物、人工合成聚合物及复合聚合物纺丝纤维在骨组织工程研究中的进展,提出复合聚合物电纺纤维及其改性是今后骨组织工程支架材料研究的重要方向之一;并探讨了其研究中存在的问题与应用前景。 罗伟 金旻 罗凤涛 陈林关键词:静电纺丝 纳米纤维 骨组织工程 FGFR2突变与囟门早闭的研究及进展 被引量:2 2005年 人类FGFR2基因的多种突变与囟门早闭综合征密切相关,主要包括Crouzon综合征,Pfeif- fer综合征,Apert综合征,Jackson-Weiss综合征,Beare-Stevenson综合征。目前研究FGFR2突变与囟 门早闭综合征之间的关系已经成为分子遗传学领域的热点之一。本文从基因型和表型、可能的机制以 及研究方法等几个方面回顾了近年来在二者关系的研究上取得的重要进展。 陈波 陈林关键词:囟门 突变 CROUZON综合征 APERT综合征 分子遗传学 FGFR2基因敲除小鼠模型的应用 2007年 FGFR2基因与人类多种疾病密切相关。随着小鼠遗传工程技术的发展,利用基因敲除、转基因小鼠模型来研究基因与人类疾病的关系,已成为人们研究的热点。在此综述了FGFR2基因敲除小鼠模型近年来的研究近展,对几种FGFR2相关的基因敲除小鼠模型进行了系统的分类归纳,讨论了其在组织器官发育和相关人类疾病机制研究中的应用,并展望了其发展前景。 陈志 曾照芳 陈林关键词:基因敲除 小鼠模型 APERT综合征 制作小鼠骨骼标本的新方法 被引量:6 2006年 目的改进小鼠骨骼标本的制作方法。方法利用蚂蚁啃食肌肉和软组织,并结合传统方法制作小鼠骨架。结果所制作的小鼠骨架完整洁净,没有骨质损伤。结论利用蚂蚁制作骨架简便快速,优于传统方法,值得推广应用。 陈志 曾照芳 杜晓兰 陈林关键词:小鼠 骨骼标本 蚂蚁 利用pSOS-HUS系统构建针对小鼠h1-calponin的RNA干扰载体 2009年 目的利用pSOS-HUS系统构建针对小鼠碱性调宁蛋白(h1-calponin)的RNA干扰载体并对其干扰效率进行验证。方法利用在线软件设计三段针对小鼠h1-calponin cDNA的寡核苷酸(A、B、C)片段,经退火成为双链后分别装入pSOS-HUS载体,得到载体调宁蛋白-PS-A/B/C;再将h1-calponin cDNA插入该载体和GFP一起融合表达,得到调宁蛋白RNAi-A/B/C3个载体;对上述载体经酶切和测序鉴定后,转染至HEK293T细胞株,通过倒置荧光显微镜观察GFP荧光强度来判断上述载体的干扰效果。结果经酶切和测序证明针对小鼠h1-calponin的3个RNA干扰载体构建成功,荧光显微镜下观察显示,和空载体pSOS-HUS(未插入RNA干扰片段)相比,A组的荧光强度减弱最明显,B的基本不变,C的荧光强度稍有减弱。结论成功构建了针对h1-calponin的RNA干扰载体。 孙启荻 苏楠 陈锚锚 金旻 赵玲 陈林关键词:RNAI 小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立 被引量:11 2008年 目的建立小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型,为探讨成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用奠定基础。方法利用24h内新生小鼠颅骨和4~8周龄成年小鼠四肢长骨分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞,采用间接接触的培养模式将接种了骨髓单核细胞的玻片或骨片置入提前24h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养。共培养一定时间后进行破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色鉴定和骨吸收功能检测,并进一步采用RT-PCR对破骨细胞标志酶基因基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、TRAP和组织蛋白酶K(CathepsinK)的表达进行检测。结果共培养5天后可见TRAP(+)多核细胞形成,13天础(+)多核细胞数目达到高峰;骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现,随着培养时间的延长,陷窝面积呈增加趋势;破骨细胞标志基因TRAP在共培养3天时开始表达,而MMP-9和CathepsinK则在共培养5天后表达。结论共培养体系中成骨细胞对破骨细胞调控作用显著,诱导的破骨细胞具有噬骨能力,该共培养模型可用于成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用研究。 鲁秀敏 陈林 苏楠 李福兵 赵玲关键词:成骨细胞 破骨细胞 共培养 成骨细胞特异性过表达h1 calponin转基因小鼠的建立 2008年 目的为从整体动物水平研究碱性调宁蛋白(h1-calponin)在骨形成过程中的直接作用,我们构建了成骨细胞中特异性过表达h1-calponin的转基因小鼠模型,并对其表型进行了初步分析。方法构建在成骨细胞特异性启动子(collagen I promoter)驱动下表达h1-calponin的载体(pColI-calponin),纯化DNA片段,再以显微注射的方法将转基因片段导入小鼠受精卵,经移植后得到小鼠。PCR法检测整合到小鼠基因组中的外源基因,提取F1代阳性小鼠原代成骨细胞RNA,RT-PCR检测h1-calponin在小鼠成骨细胞中的表达情况,并观察转基因小鼠表型及体重变化情况。结果PCR检测结果显示1只G0代转基因鼠中检测到阳性信号,RT-PCR显示F1代转基因小鼠成骨细胞中表达h1-calponin较野生对照小鼠明显增加,且转基因小鼠体重与野生小鼠相比有明显降低。结论成功构建了在成骨细胞特异性过表达h1-calponin的转基因小鼠,为深入研究h1-calponin在骨骼发育中的作用提供了良好的动物模型。 陈锚锚 苏楠 赵子瑜 雷子贤 赵玲 李福兵 陈林关键词:成骨细胞 转基因小鼠 FGFR3在骨骼发育和疾病中作用的研究进展 被引量:10 2006年 FGFR3是成纤维细胞生长因子受体(fibroblastgrowthfactorreceptors,FGFRs)家族成员之一,在骨骼发育中起重要作用。FGFR3的激活突变引起一系列骨骼发育缺陷性疾病,如软骨发育不全(achondroplasia,ACH)、季肋发育不全(hypochondroplasia,HCH)和致死性骨发育不全(thanatophoricdysplasia,TD)。目前研究认为,FGFR3在骨骼发育中抑制软骨形成的作用是明确的,但其对骨形成的作用尚不明确,需要进一步研究。 苏楠 陈林关键词:FGFR3 骨骼发育 软骨形成 骨形成