国家自然科学基金(90813038)
- 作品数：10 被引量：22H指数：2
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- PAK4抑制剂的药效团模型研究
- 目的构建PAK4抑制剂的药效团模型。方法基于PAK4的抑制剂结构及PAK4与抑制剂相互作用模式,构建PAK4抑制剂药效团模型。结果与结论构建了PAK4抑制剂的药效团模型,可以指导抑制剂的设计,用于开发抗肿瘤药物。
- 王健王宇王刚李瑞娟沙宇赵冬梅李丰程卯生
- 关键词：药效团模型分子对接激酶抑制剂药物设计
- 文献传递
- 人SCG10基因原核质粒构建及其重组蛋白表达
- 2011年
- 目的构建SCG10的原核表达载体并诱导、纯化和鉴定其表达。方法 pcDNA3.1-SCG10质粒用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至pGEX-5X-1载体,IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)在BL21大肠杆菌中诱导glutathione S-transferase(GST)-SCG10融合蛋白表达,利用GST-beads纯化诱导的融合蛋白,经Western blot印迹鉴定。结果 SCG10全长编码序列克隆至pGEX-5X-1载体中,双酶切鉴定片段大小为500 bp,在BL21大肠杆菌中IPTG诱导融合蛋白的表达分子量为47 kDa,成功纯化出GST及GST-SCG10蛋白,Wstern blot检测到蛋白表达。结论构建了SCG10基因原核表达载体,鉴定了GST-SCG10融合蛋白表达。
- 刘芙蓉李彦姝张红艳苏楠李家滨李丰
- 关键词：融合蛋白WESTERNBLOT
- PAK2真核表达载体的构建及在胃癌细胞内的表达与定位被引量：1
- 2011年
- 目的构建PAK2真核表达载体及证实在胃癌细胞内的表达与定位。方法提取HeLa细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增PAK2全长编码基因,克隆至pcDNA3.1A表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到胃癌细胞SGC-7901中,Western blot检测蛋白表达,免疫荧光检测PAK2在胃癌细胞内的定位。结果 hPAK2全长基因序列克隆到了真核表达载体pcDNA3.1A中,酶切鉴定片段为2 000 bp。Western blot检测到重组质粒蛋白表达,分子量约为75 kDa。免疫荧光检测pcDNA3.1A-PAK2在胃癌细胞内的定位以细胞浆为主,细胞核内少许。结论成功构建hPAK2全长基因真核表达载体,重组质粒主要定位于胃癌细胞浆。
- 刘芙蓉李晓东李家滨李丰
- 关键词：真核表达免疫印记免疫荧光胃癌
- hRNF6基因重组质粒的构建及蛋白表达和定位
- 2010年
- 目的构建环指蛋白6(RNF6)真核表达载体,并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取工具细胞HEK-293的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hRNF6全长编码基因,并将其克隆至pCDNA3.1-myc-his A及pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到工具细胞HEK-293中,提取细胞蛋白进行Westernblot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-RNF6在工具细胞CV-1和胃癌SGC-7901细胞内的定位。结果 hRNF6全长基因序列克隆到了真核表达载体pCDNA3.1-myc-his A和pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为2058bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为78kDa。pEGFP-RNF6在CV-1细胞和胃癌SGC-7901细胞内定位以细胞核为主,在细胞质内少量表达。结论成功的构建了hRNF6全长基因真核表达载体,pEGFP-RNF6蛋白主要定位于胃癌细胞核内。
- 李洋刘彤李丹妮李丰
- 关键词：基因克隆融合蛋白转染
- PAK4抑制剂作用模式的分子模拟研究
- 2009年
- 目的分析PAK4(p21-活化激酶4)与抑制剂的相互作用模式,指导PAK4抑制剂的开发。方法基于PAK4的晶体结构及抑制剂的结构,利用分子对接和分子力场分析方法,探讨PAK4与抑制剂的相互作用模式。结果与结论确定了PAK4与抑制剂的作用模式,可以指导抑制剂的设计,用于开发抗肿瘤药物。
- 王健沙宇赵冬梅李丰程卯生
- 关键词：分子对接分子力场药物设计
- 不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体的构建及重组蛋白的表达
- 2011年
- 目的构建不同激酶活性的hPAK6原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法野生型、激酶活型和激酶死型pcDNA3.1-PAK6经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在E.coli BL21中诱导不同型GST-hPAK6融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果。结果野生型、激酶活型和激酶死型hPAK6编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,双酶切及测序鉴定正确,并在E.coli BL21中获得了诱导表达,蛋白的分子量均为101 kDa,免疫印迹检测到了融合蛋白表达。结论成功构建不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体,并分别诱导表达出GST-PAK6融合蛋白。
- 刘彤李洋朱戈李丰
- 关键词：原核表达融合蛋白
- 激光共聚焦扫描显微镜观察ERα和MTA1在乳腺癌细胞内的共定位被引量：2
- 2011年
- 目的:观察ERα和MTA1在乳腺癌细胞内的共定位。方法:在有无雌激素或拮抗剂刺激下,利用激光共聚焦扫描显微镜观察ERα和MTA1在乳腺癌细胞系MCF-7中的共定位。结果:在无雌激素刺激下两者共定位于细胞浆和细胞核,而在雌激素刺激后两者则共定位于细胞核内。在雌激素受体拮抗剂刺激下,两者在细胞浆内定位增加。结论:雌激素和雌激素受体拮抗剂刺激乳腺癌细胞改变ERα和MTA1的共定位。
- 刘芙蓉李彦姝张红艳李丰
- 关键词：ERΑMTA1共定位激光共聚焦扫描显微镜
- hLMO3基因全长及截短序列原核表达载体的构建及蛋白诱导表达
- 2012年
- 目的构建hLMO3原核全长及5个截短表达载体并鉴定融合蛋白的表达。方法提取工具细胞HEK293的mRNA,反转录为cDNA,PCR扩增hLMO3全长及截短编码基因,亚克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-2中。在E.coli BL21中诱导GST-hLMO3全长及截短融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果。结果 hLMO3全长及5个截短基因序列克隆到了原核表达载体pGEX-5X-2中,并经测序鉴定正确。Westernblot在E.coli Bl21中检测到了相应融合蛋白的表达。结论成功构建hLMO3全长及5个截短基因序列原核表达载体,在E.coli BL21中诱导表达出GST-LMO3全长及截短融合蛋白。
- 刘彤顾卉李洋李丰
- 关键词：原核表达
- 人RNF6基因原核表达载体的构建及其重组蛋白的表达
- 2011年
- 目的构建人hRNF6基因的原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法提取前列腺癌细胞CWR22Rv1的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hRNF6全长编码基因,并将其克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在E.coli BL21中诱导GST-hRNF6融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果。结果 hRNF6编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,双酶切及测序鉴定正确,并在E.coli BL21中获得了诱导表达,蛋白的分子量为104KD,免疫印迹检测到了融合蛋白表达。结论成功构建基因原核表达载体,诱导表达出GST-RNF6融合蛋白。
- 刘彤李洋李丹妮李丰
- 关键词：原核表达融合蛋白E.COLIBL21
- 自噬的调控通路和肿瘤被引量：18
- 2011年
- 自噬是指胞浆内大分子物质和细胞器在膜包囊泡中大量降解的生物学过程,其具有独特的分子机制、形态改变和特有的调控通路,作为各种调控通路交汇点——mTOR复合体和Beclin1复合体发挥了至关重要的作用。对于人体而言,自噬具有维持细胞自我稳态,促进细胞生存的作用,然而,过度自噬则可以引起细胞死亡即"自噬性细胞死亡"。相关研究表明,自噬的这种特点与肿瘤的发生密切相关。对于肿瘤,自噬作用好似一把双刃剑,既促进其发生又抑制其形成。
- 张秀春李丹妮李丰
- 关键词：自噬MTORBECLIN1肿瘤
