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Cyclin E分子siRNA慢病毒载体的构建及其对骨肉瘤细胞系Sosp9607的影响被引量：1: 2010年; 设计筛选针对人cyclin E分子的siRNA序列,构建相应的siRNA慢病毒载体,检测其对骨肉瘤细胞系Sosp9607胞内cyclin E分子表达水平的影响。首先设计并合成4对siRNA双链寡聚核苷酸,与cyclin E分子真核表达载体共同转染293T细胞。挑选出最有效抑制cyclin E表达的序列,应用基因工程技术,将该序列连接于慢病毒载体pLKO.1中,构建携带针对目的基因cyclin E的siRNA慢病毒载体pLKO-CE。使用慢病毒包装质粒混合物和构建好的慢病毒载体共转染293T细胞,收获病毒上清,感染Sosp9607细胞系,对病毒感染后抑制cyclin E表达的效果进行检测。结果在4条针对cyclin E分子设计的siRNA序列中,siRNA-464最为有效的抑制了外源性cyclin E分子的表达;带有该序列的慢病毒载体pLKO-CE可以完全抑制Sosp9607细胞中天然分子的表达,引起Sosp9607细胞生物学行为的改变:G1期细胞增多,S期减少,细胞增殖受抑制。说明应用基因工程技术成功构建了针对cyclin E分子的RNA干扰慢病毒载体,可有效抑制骨肉瘤细胞cyclin E的表达,使肿瘤细胞增殖减缓,为深入研究针对cyclin E的基因治疗方案的临床前实验研究提供了实验证据和理论依据。; 丁勇范德刚单乐群王育才杨彤涛马保安; 关键词：CYCLIN SIRNA 慢病毒载体增殖

白细胞相关免疫球蛋白样受体-1在破骨细胞发育中的作用被引量：2: 2013年; 目的研究白细胞相关免疫球蛋白样受体-1(LAIR-1)在破骨细胞(OC)发育过程中的表达规律及影响。方法 PCR检测小鼠LAIR-1(mLAIR-1)分子在体外诱导OC生成过程中mRNA水平的变化;重酒石酸盐抗性酸性磷酸酶(TRAP)染色观察OC的数量;Corning Osteo Assay surface检测OC骨吸收陷窝的形成;ELISA检测类风湿性关节炎(RA)患者血清可溶型LAIR-1(sLAIR-1)与疾病的炎症状态和活动度是否相关。结果 PCR结果显示在OC形成过程中,LAIR-1 mRNA显著降低;TRAP染色和骨吸收陷窝实验均显示加入mLAIR-1单克隆抗体后,OC数量明显减少。RA病人类风湿因子高低水平组之间的血清sLAIR-1水平存在显著差异。结论 LAIR-1分子可能参与了OC的发育过程,并且与RA疾病的炎症状态有一定关系。; 张圆丁勇庄然张春梅金伯泉; 关键词：破骨细胞 LAIR-1 发育类风湿性关节炎

NEDD4L作为骨肉瘤预后标志物的生物信息学研究被引量：1: 2023年; 目的通过生物信息学方法筛查骨肉瘤(OS)患者与健康人骨组织的差异表达基因(DEGs)并进行筛选,构建OS患者的预后预测模型,为OS的预后评估提供潜在的生物标志物。方法基于公共数据库获得OS的DEGs,构建单因素及多因素Cox回归分析预后模型,绘制生存曲线并使用ROC曲线评估预后模型效果,使用蛋白质印迹和组化染色在蛋白水平检测表达格局。结果本研究在OS患者与健康人骨组织中共筛选出2806个DEGs;单因素Cox回归分析显示,其中9个基因是总生存时间的独立危险因素(P<0.05);以神经前体细胞表达发育下调样基因4(NEDD 4 L)为主的多因素Cox回归分析ROC曲线1、3、5年AUC分别为0.76、0.84、0.86,单因素Cox回归分析AUC分别为0.78、0.72、0.72;在肿瘤微环境分析中NEDD 4 L表达量与肿瘤纯度显著正相关(R=0.35,P=0.0010),在基因集富集分析中低表达NEDD 4 L与多种肿瘤相关通路有关;蛋白质印迹和组化染色均提示NEDD4L在OS中低表达。结论低表达NEDD 4 L与OS的不良预后存在紧密联系,构建了稳定的NEDD 4 L单因素与多因素预后预测模型,可为临床OS患者的预后评估提供参考。; 刘懿天庄然丁勇; 关键词：骨肉瘤生物信息学 COX回归分析

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国家自然科学基金(30973039)