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紫杉醇调节TIMP-1启动子活性及TIMP-1降低紫杉醇对乳腺癌细胞增殖抑制作用的研究被引量：1: 2007年; 目的探讨TIMP-1在降低MCF-7对紫杉醇敏感性中的作用。方法采用DNA重组技术构建含timp-1基因启动子的荧光素酶报告质粒并瞬时转染MCF-7细胞,在撤血清条件下测定荧光素酶的相对活性,以验证重组质粒的有效性;重组质粒瞬时转染入MCF-7细胞中,经紫杉醇处理后,测定荧光素酶的相对表达活性;检测在紫杉醇作用下,TIMP-1过表达克隆与对照克隆细胞增殖的情况。结果酶切、PCR及测序鉴定结果证实成功构建带有TIMP-1启动子的报告基因表达质粒;且撤血清条件下TIMP-1启动子转录活性显著增强,1000nmol/L紫杉醇处理的MCF-7细胞中TIMP-1启动子调控的荧光素酶活性显著降低;紫杉醇对TIMP-1过表达克隆的细胞增殖抑制作用显著低于对照克隆。结论成功地构建了含timp-1基因启动子的荧光素酶报告质粒,准确地评价TIMP-1启动子在紫杉醇作用过程中的活性变化,并进一步阐明TIMP-1在降低乳腺癌细胞对紫杉醇敏感性中的作用。; 孙静霞王婷; 关键词：基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 启动子表达质粒紫杉醇

慢病毒载体的构建及其介导的绿色荧光蛋白在胰岛β细胞中的表达被引量：2: 2007年; 目的获得能够在大鼠胰岛β细胞中高效表达的慢病毒载体。方法以PCR的方法扩增绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)片段,并将其通过穿梭质粒装入pLenti6/V5表达质粒,然后用脂质体转染试剂将plenti6/V5GFP、pLP1、pLP2以及pLP/VSVG转染入293FT细胞,获得的病毒用人纤维瘤细胞系的HT1080细胞进行滴定。然后用一定滴度的慢病毒转导大鼠胰岛β细胞系INS-1,观察转导效率。结果通过限制性内切酶和琼脂糖凝胶电泳方法,观察到所克隆入pLenti6/V5表达质粒的GFP片段大小正好与PCR扩增出的片段一致。经测序验证,序列与NCBI网站上GFP序列完全一致。转染结果显示,经293FT细胞所产生的慢病毒,转导效率达到80%以上。而在1×106/ml病毒颗粒的情况下,AAV-GFP病毒几乎不能转导β细胞。结论与同一滴度的AAV-GFP病毒相比,胰岛β细胞的转导效率有非常显著的差异。即慢病毒载体表达系统在对胰岛β细胞转导的能力上,明显优于重组腺辅病毒表达系统。表明慢病毒载体在糖尿病基因治疗中,特别是对胰岛β细胞的转基因工作中,有着良好的应用前景。; 吕京澴汪振诚朱剑王婷; 关键词：慢病毒载体胰岛Β细胞转染绿色荧光蛋白

TIMP-1降低无血清培养所致的乳腺癌细胞MCF-7凋亡的研究: 2007年; 目的:基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)是与乳腺癌预后不良显著相关的分子。本研究旨在探讨TIMP-1的作用机制是否包括其降低无血清所导致的细胞凋亡。方法:对TIMP-1表达质粒进行酶切及序列测定;用脂质体转染的方法将含TIMP-1的质粒及对照质粒分别转染到MCF-7细胞中,Western blot检测TIMP-1蛋白的表达;在无血清培养条件下,流式细胞仪检测对照质粒转染克隆与TIMP-1稳定表达克隆凋亡的变化。结果:与转染对照质粒的克隆相比,TIMP-1转染克隆中TIMP-1蛋白的表达显著上调。无血清培养条件下,对照克隆细胞相对凋亡率为(7.18±1.12)%,TIMP-1表达克隆T10和T13相对细胞凋亡率分别为(2.63±0.39)%和(1.07±0.9)%(P<0.05)。结论:TIMP-1过表达降低无血清所导致的细胞凋亡。; 周平高萍王婷; 关键词：TIMP-1 无血清培养 MCF-7 细胞凋亡

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江苏省高校自然科学研究项目(06KJB310068)