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美洲大蠊主要变应原的纯化与免疫学鉴定被引量：7: 2005年; 为利用蛋白纯化技术获得较高纯度美洲大蠊天然主要变应原,以进一步提高临床诊断的特异性和免疫治疗疗效。美洲大蠊全虫粗浸液通过DE-52离子交换层析、HiprepSephacrylS-200凝胶过滤层析等分离步骤得到了纯度为90%的目的蛋白,回收率为26%,经WesternBlotting分析74kDa的蛋白质具有免疫原性,为变应原疫苗的纯化和标准化奠定了基础。; 胡川刘志刚林立丰阴伟雄李金生; 关键词：美洲大蠊变应原层析纯化美洲大蠊纯化技术免疫学凝胶过滤层析

美洲大蠊主要变应原蛋白的质谱鉴定与分析被引量：7: 2005年; 为了建立美洲大蠊 Periplaneta americana变应原蛋白的质谱鉴定方法, 我们将美洲大蠊粗浸液通过 DEAE-52 离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析等分离步骤得到纯化的74 kD蛋白, 对纯化前后的该74 kD蛋白分别进行SDS-PAGE及凝胶内胰酶酶切, 再经液相色谱-电喷雾-串联质谱 (HPLC-ESI-MS-MS) 在线联机分析, 所得质谱数据进入网站 (http: www.matrixscience. com) 进行Mascot检索比对。通过对两者质谱鉴定结果的比较来评估美洲大蠊天然主要变应原蛋白的纯化效果。结果表明, 纯化蛋白经HPLC-ESI-MS-MS鉴定是美洲大蠊主要变应原蛋白; 离子交换层析等纯化步骤可以去除同一分子量的杂蛋白 (如卵黄原蛋白), 从而获得较好的鉴定结果。我们首次成功地运用质谱建立起变应原蛋白的新鉴定方法。; 胡川刘志刚李金生韩庆国林立丰阴伟雄; 关键词：美洲大蠊液相色谱电喷雾串联质谱变应原

酮替酚对重组Bla g2变应原诱导小鼠过敏性哮喘疗效的观察: 2007年; 许卓谦刘志刚; 关键词：过敏性哮喘哮喘小鼠变应原 BLA 酮替酚 G2

泼尼松对蟑螂致敏小鼠支气管哮喘模型的作用被引量：5: 2006年; 近年来支气管哮喘（简称哮喘）发病率逐年上升，研究发现蟑螂变应原过敏与哮喘的发病相关。糖皮质激素是临床治疗哮喘的最为有效的药物。然而糖皮质激素治疗之后对机体的免疫学指标如抗体，细胞因子等的影响还不确切。为此，我们观察了泼尼松对美洲大蠊提取液致敏的哮喘小鼠预防性治疗的效果，探讨哮喘小鼠治疗后的病理和免疫学改变特点。; 许卓谦刘志刚; 关键词：支气管哮喘模型致敏小鼠泼尼松蟑螂免疫学指标哮喘小鼠

美洲大蠊若虫变应原的基因克隆及序列测定被引量：8: 2002年; 目的　对美洲大蠊若虫cDNA表达文库进行免疫学筛选 ,分离和鉴定美洲大蠊若虫特异性重组变应原克隆 ,并测定其基因序列 ,从而为美洲大蠊若虫重组变应原疫苗候选基因的筛选提供科学依据。方法　选用对美洲大蠊若虫过敏的变态反应疾病患者 (如哮喘、过敏性鼻炎 )阳性血清 ,对美洲大蠊若虫cDNA文库进行免疫学筛选。使用按照重组载体入ExCellNotI/EcoRI/CIP臂插入位点邻近区域的上、下游碱基序列设计的引物 ,扩增阳性噬菌斑中插入的cDNA片段。并对cDNA插入片段进行序列测定。结果　经用阳性血清对 2 3× 10 4 噬菌体斑的免疫学筛选 ,获得了 5个阳性克隆 ,PCR直接序列分析表明这 5个阳性克隆均为美洲大蠊若虫变应原未知基因克隆。结论　该研究发现了美洲大蠊若虫变应原新基因。; 刘志刚黄炯烈周珍文李金生杨慧; 关键词：重组变应原 CDNA文库免疫学筛选

美洲大蠊主要变应原Cr-PI基因同源性分析被引量：10: 2002年; 目的　探索研制美洲大蠊重组变应原疫苗的新途径 ,对美洲大蠊主要变应原Cr PI基因序列进行同源性分析。方法　选用从本室构建的美洲大蠊若虫cDNA文库中筛选到的 5个阳性克隆 ,在测序的基础上 ,通过互联网进入NCBI主页 ,采用Blastn程序 ,将测得的美洲大蠊主要变应原基因序列与GenBank中的基因序列进行同源性分析。结果　所筛选到的美洲大蠊若虫 5个新基因中 ,一个为核糖体蛋白基因 (AF 31 4 962 ) ,一个为美洲大蠊主要变应原Cr PI基因 (AF31 4 963) ,且中国大陆美洲大蠊主要变应原Cr PI基因序列与不同地理分布的美洲大蠊Cr PI基因序列有一定差异。结论　不同地理区域的美洲大蠊同一种变应原其基因序列有一定差异 ,编码的氨基酸亦不相同。本研究提示在临床变态反应疾病的诊断和脱敏治疗中 ,为了提高其诊断的特异性和治疗疗效 ,应尽可能使用具有我国区域特色 (即本地化 ); 刘志刚黄炯烈杨慧周珍文李金生; 关键词：变应原同源性分析变态反应疾病

美洲大蠊低致敏变应原的制备及抗原性分析: 2008年; 从酶学的角度出发，研究多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）与美洲大蠊变应原粗提液的相互作用及其对变应原粗提液变应原活性的影响，以探索制备美洲大蠊低致敏变应原的方法。; 刘瑞涛吴海强刘志刚冉丕鑫; 关键词：美洲大蠊抗原性多酚氧化酶

蟑螂变应原基因的免疫学筛选及序列分析被引量：6: 2003年; 目的　探讨从美洲蟑螂cDNA表达文库中获得的变应原基因对过敏性疾病的治疗价值。方法　用生物素链霉亲合素系统 ,使用蟑螂过敏病人血清IgG4,对已构建的美洲蟑螂cDNA表达文库进行免疫学筛选 ,并对阳性克隆进行序列测定及同源性分析。结果　从美洲蟑螂cDNA文库筛选出 3个阳性克隆 ,同源性分析显示 ,3号克隆核苷酸序列及推导的氨基酸序列与美洲蟑螂主要变应原CrPI高度同源 ,一致性达 99% ,1、2号克隆与已知变应原无显著同源性 (score <2 0 0 ) ,提示其为新的蟑螂变应原基因 ,其中 1号为编码核糖体蛋白S12 ,2号为编码Rab11蛋白。结论　 3号为克隆编码美洲蟑螂主要变应原CrPI,另外 2个克隆为新的蟑螂变应原基因 ,对这些基因的进一步亚克隆表达。; 周珍文刘志刚陈玲吴晓蔓郑小玲; 关键词：基因表达免疫学筛选过敏性疾病

Activation of Signal Transducer and Activator of Transcription 5 (STAT5) in Splenocyte Proliferation of Asthma Mice Induced by Ovalbumin被引量：3: 2004年; To investigate the role of signal transducer and transcriptional activator 5(STAT5)activated in ovalbumin (OVA)-induced splenocyte proliferation of asthma mice,an asthma mouse model was set up by intraperitoneal injection and aspiration of OVA with nebulizer.The proliferation of splenocytes isolated from the asthma mice was detected by [~3H]thymidine incorporation.The phosphorytation of STAT5 was examined by Western blotting and STAT5-DNA binding was measured by electrophoretic mobility shift assay(EMSA).OVA could pronouncedly induce the splenocyte proliferation of asthma mice in a dose-dependent manner compared with control groups.Phosphorylation of STAT5 and STAT5-DNA binding were observed in splenocytes from asthma mice induced by OVA at 1 h and 3 h.These results indicated that STAT5 signal pathway played an important role in lymphocyte proliferation of asthma mice induced by OVA.Cellular & Molecular Immunology. 2004;1(6):471-474.; GuopingLiZhigangLiuPeixingRanJingQiuNanshanZhong; 关键词：STAT5 OVA

德国小蠊重组变应原(rBla g 2)治疗过敏性哮喘小鼠的实验研究: 2009年; 目的探讨重组德国小蠊变应原(rBlag2)治疗过敏性哮喘小鼠的效果及机制。方法18只BALB/c小鼠随机均分为阴性对照组(A组)、哮喘模型组(B组)和重组蛋白rBlag2治疗组(C组)。B、C两组分别腹腔注射经Al(OH)3佐剂乳化的重组蛋白rBlag2,剂量为50mg/(只·次),共3次,每次间隔1周。A组以50ml生理盐水代替变应原。末次致敏后2周,进行免疫治疗,C组腹腔注射rBlag2,100mg/(只·次),每两天1次,连续8次。A、B两组以PBS代替变应原。末次治疗后1周,将小鼠麻醉,B、C两组每鼠每天滴鼻50mgrBlag2,连续7d。A组以PBS代替变应原滴鼻。于最后1次滴鼻后24h检测各项指标:各组小鼠气道高反应性,支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和细胞种类以及血清中rBlag2抗原特异性IgE和IgG2a的变化;HE染色观察小鼠肺组织的改变,免疫组化检测肺嗜酸粒细胞(EOS)B淋巴细胞瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达。结果与B组相比,C组气道高反应检测中扩大间隙(Penh)值下降(P<0.05);血清中rBlag2特异性IgE降低,IgG2a增加(P<0.01);C组EOS细胞阳性数量明显减少,且Bcl-2蛋白阳性表达较弱。B组BALF的细胞总数和EOS数分别为(24.60±15.08)×105个/ml和(22.20±3.76)×105个/ml,而C组细胞总数[(14.30±4.95)×105个/ml]和EOS数[(5.20±1.56)×105个/ml]显著减少(P<0.01)。B组肺部气管周围炎性细胞聚集,肺组织上皮损伤,组织水肿,而C组肺部变应性炎症明显减轻。与A组相比,C组各项检测指标接近A组。结论rBlag2对小鼠过敏性哮喘有治疗作用,可能是EOS细胞凋亡在其中起重要作用。; 沈小英朱清仙刘志刚李湘辉; 关键词：德国小蠊重组变应原哮喘嗜酸粒细胞

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