中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1610322011005)
- 作品数：8 被引量：63H指数：3
- 相关作者：张继瑜李冰周绪正李金善刘翠翠更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃农业大学更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家肉牛牦牛产业技术体系项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学理学更多>>
- 牛巴贝斯虫DXS基因的克隆和真核表达被引量：1
- 2014年
- 【目的】顶质体是存在于包括疟原虫和巴贝斯虫在内的顶复门寄生虫的一种细胞器,在病原体中,它主要承载类异戊二烯前体和脂肪酸合成途径,异戊二烯五碳结构是有机体合成多种化合物的结构基础,对有机体生命活动至关重要,例如,在哺乳动物中成为胆固醇和类固醇激素的基本结构,在植物中参与合成类胡萝卜素。且存在于顶质体的类异戊二烯前体合成途径对于病原体的生命活动至关重要且不存在于人类和哺乳动物机体,这使其成为近年来人们研究抗原虫药物的焦点。有学者发现利用特异性阻断类异戊二烯代谢途径的药物可治疗疟疾。1-脱氧-5-磷酸D-木酮糖合成酶(DXS)为该途径中的第一个限速酶。因此,针对牛巴贝斯虫的1-脱氧-5-磷酸D-木酮糖合成酶dxs基因进行克隆和序列分析,并对其进行真核表达和活性检测,以期获得具有活性的1-脱氧-5-磷酸D-木酮糖合成酶,为进行针对该酶的特异性抑制剂的筛选奠定基础。【方法】首先采用反转录PCR技术从牛巴贝斯虫陕县株总RNA中扩增出DXS基因的全长cDNA,并对其进行克隆测序,对测序结果进行序列分析,将阳性克隆亚克隆至带荧光标签的真核表达载体,利用脂质体转染法将重组真核表达质粒转染至Hela细胞,利用倒置荧光显微镜观察转染细胞的表达情况,消化收集转染细胞,通过超声破碎后采用Western blot技术对DXS蛋白的表达情况进行检测,结合G418压力筛选以及有限稀释的方法对转染阳性细胞进行筛选,获得阳性单克隆细胞。在体外建立DXS酶反应体系,并利用液相质谱联用技术对表达产物的体外活性进行检测。【结果】扩增得到的DXS基因全长共2 061 bp,共编码686个氨基酸,与GenBank上T2Bo株相应基因相似性达到98.0%。利用生物信息学方法对该蛋白质的二级结构进行分析发现,该酶具有3个结构域,分别是焦磷酸硫胺素结合区域;�
- 王婧李冰刘翠翠夏吉鹏张继瑜
- 关键词：真核表达
- 动物性食品中兽药残留分析检测技术研究进展被引量：19
- 2012年
- 兽药作为动物疾病防治的重要保障,对改善动物生产性能和产品品质、保持生态平衡等多方面具有重要功能,是畜牧业健康发展、食品安全和公共卫生的重要保障。但不合理使用和滥用兽药及饲料药物添加剂的情况普遍存在,既造成了动物食品中有害物质残留,又对人类健康造成损害,同时还威胁到环境和畜牧业持续健康发展。为保证人类健康,迫切需要开发简洁、快速、高灵敏度、高通量且低成本的兽药残留检测技术。本文对动物性食品中兽药残留分析的样品前处理方法和检测技术进行了研究探讨。
- 李冰李剑勇周绪正杨亚军牛建荣魏小娟李金善张继瑜
- 关键词：动物性食品兽药残留样品前处理
- 牛巴贝斯虫lytB基因的克隆与序列分析
- 2014年
- 为了对牛巴贝斯虫lytB基因进行克隆与序列分析,试验以兰州株牛巴贝斯虫lyt B基因组为模板进行PCR扩增,将扩增得到的特异性产物克隆到p GEM-T Easy载体上,并对其进行PCR检测、酶切鉴定及序列测定分析。结果表明:试验克隆得到的864 bp基因片段与Gen Bank收录的牛巴贝斯虫lyt B核苷酸序列同源性为97.8%。说明试验成功克隆出牛巴贝斯虫lyt B基因,与Gen Bank收录的牛巴贝斯虫lyt B核苷酸序列具有高度的同源性。
- 刘翠翠王婧张继瑜
- 关键词：牛巴贝斯虫克隆PCR检测酶切鉴定
- 高效液相色谱-串联质谱法测定血浆中氢溴酸槟榔碱的含量
- 目的:建立测定氢溴酸槟榔碱血药浓度的HPLC-MS/MS定量分析方法。方法:采用Zorbax SB C18(2.1×30mm,3.5um)分析柱,以甲醇-甲酸铵水溶液(pH4.5)(15:85)为流动相,流速为0.4mL...
- 李冰周绪正杨亚军李剑勇牛建荣魏小娟李金善张继瑜
- 关键词：槟榔碱液相色谱-质谱联用血药浓度
- 文献传递
- 伊维菌素微乳制剂的家兔刺激性试验被引量：1
- 2013年
- 白兔背部分区进行脱毛处理,将伊维菌素微乳制剂一次性涂抹于暴露的皮肤,观察皮肤接触受试物后是否引起红肿、充血、渗出等局部反应,评价药物对家兔皮肤的刺激性。同时将受试物滴于家兔眼结膜囊内,观察虹膜、角膜和结膜是否出现浑浊、充血、水肿等局部反应,评价药物对家兔眼睛的刺激性。结果表明,伊维菌素微乳制剂未引起白兔皮肤明显的充血、红肿;同时对兔子的结膜、虹膜和角膜也没有刺激性。因此该制剂对白兔的皮肤和眼睛的刺激程度为无刺激。本试验为伊维菌素微乳制剂的安全性评价提供了试验依据。
- 刘磊张继瑜周绪正李冰
- 关键词：白兔
- 牛呼吸道疾病的病原学与防制研究进展被引量：27
- 2013年
- 牛呼吸道疾病的出现多是由牛疱疹病毒1型(BHV-1)、牛呼吸道合包体病毒(BRSV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛冠状病毒(BCV)、牛支原体、出血性败血性巴氏杆菌等病原的单独或混合感染造成的。文章针对这几种病原的病原学及相应的防制研究进行了综述。
- 范颖张继瑜周绪正李冰李剑勇牛建荣魏小娟李金善杨亚军
- 关键词：病原学防制研究
- 青蒿琥酯纳米乳中青蒿琥酯的分光光度法和HPLC法分析被引量：1
- 2012年
- 比较了HPLC法和紫外分光光度法测定青蒿琥酯的含量,HPLC法和紫外分光光度法的线性范围分别为5～50μg/mL(R2=0.999 2)和5～100μg/mL(R2=0.996 7),两种方法的分析结果无明显差异,表明这两种方法可较为准确地测定青蒿琥酯纳米乳中青蒿琥酯的含量,其中紫外分光光度法的操作简单,适合分析杂质含量低的样品,而HPLC法分辨率高,适用于成分复杂青蒿琥酯制剂的检测。
- 李均亮李冰周绪正张继瑜
- 关键词：高效液相色谱分光光度法青蒿琥酯
- 动物性食品中兽药残留分析检测研究进展
- 动物性食品作为人类食物中的一大类,包括畜禽肉、蛋类、水产品、奶及其制品等,能够提供人体所必需的蛋白质、脂肪、矿物质、维生素A和B族维生素。动物性食品兽药残留是指给食用动物使用兽药(包括药物添加剂)后,兽药的原形及其代谢物...
- 李冰李剑勇周绪正杨亚军牛建荣魏小娟李金善张继瑜
- 文献传递
- 伊维菌素制剂的研究进展被引量：14
- 2013年
- 伊维菌素为广谱抗寄生虫药物,临床应用结果表明,它具有高效、用量小、副反应轻等优点,因此研制其新型制剂具有更加重要的意义。伊维菌素制剂的研发深受兽医临床重视,目前不同的剂型被广泛地应用于临床,但随着药物研究领域的不断发展,特别是脂质体纳米药物的研制引起广泛的关注。对近年来伊维菌素制剂的研究及其制剂应用发展现状作了详细的综述。
- 刘磊张继瑜周绪正李冰李金善
- 关键词：伊维菌素制剂纳米乳
- 牛巴贝斯虫DXR酶的结构特征分析
- 2013年
- 利用反转录PCR方法扩增牛巴贝斯虫陕县株DXR基因,对其推导氨基酸序列进行生物信息学分析。研究牛巴贝斯虫DXR酶的结构,并探讨其是否可以作为磷胺霉素的作用靶点。结果表明:该基因编码框长度为1 152bp,编码383个氨基酸,与NCBI上公布的美国牛巴贝斯T2Bo株DXR的相似性为97.4%。同源模建表明,DXR酶的三维结构同恶性疟原虫的三维结构相似,与磷胺霉素结合位点氨基酸具有保守性。
- 王婧李冰刘翠翠张继瑜
