国家自然科学基金(30471519)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：安徽医科大学北京交通大学更多>>
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- T7 RNA聚合酶的克隆及其介导基因转录功能的鉴定被引量：7
- 2007年
- 目的构建含T7RNA聚合酶(T7RNA Polymerase,T7RNP)的真核表达载体,同时构建含T7启动子、增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)和T7RNP转录终止信号的载体,并通过观察EGFP的表达推测T7RNP表达和T7表达系统介导基因转录的功能。方法根据编码T7RNP的基因序列,应用PCR技术从含有T7RNP基因的E.coli BL21(DE3)基因组中扩增编码T7RNP的基因片段,克隆至载体pcDNA3·1(+)。同时从px8δt载体和pGEM-Teasy/EGFP上切下T7RNP识别的终止信号(terminator,TER)和编码EGFP的基因,克隆至载体pcD-NAII。将获得的两个重组质粒共转染BHK细胞。48h后,通过观察EGFP基因在真核细胞内的表达情况,推测T7RNP基因的表达及表达后识别T7启动子介导基因转录功能。结果成功构建了含T7RNP编码基因的真核表达载体pcDNA3·1(+)/T7RNP和原核表达载体pcDNAII/EG-FP/TER,共转染BHK细胞后,可观察到EGFP表达的绿色荧光。结论T7RNP能顺利在真核细胞内表达,并通过与T7启动子和TER的相互作用,成功实现了EGFP基因的转录和表达。
- 虞结梅杨兵谢灿陆燕燕何金生
- 可经粘膜途径递送DNA疫苗的减毒伤寒沙门菌载体的研究进展
- 2008年
- DNA疫苗的本质是在哺乳动物细胞内表达重组蛋白抗原的质粒DNA，DNA疫苗能刺激机体产生体液及细胞免疫，有效的DNA疫苗载体可向细胞内高效传送质粒DNA。伤寒沙门菌是细胞内寄生菌，可通过黏膜途径感染，穿过黏膜上皮细胞屏障侵入黏膜相关淋巴组织（MALT），被MALT内专职抗原递呈细胞（APC）吞噬，并可在细胞吞噬泡内存活和增殖，同时细菌本身的病原相关分子模式（PAMP）是天然佐剂，因此可诱导机体产生有效的系统和局部经黏膜免疫应答，是极有发展潜力的经黏膜途径递送DNA疫苗的载体。
- 谢灿何金生
- 关键词：DNA疫苗疫苗载体
- 真核表达人呼吸道合胞病毒F蛋白的纯化方法被引量：3
- 2008年
- 目的真核表达人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)融合蛋白(fusion protein,F),并完成蛋白纯化及纯度测定。方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物,PCR方法扩增出3′端带His标签的F基因序列,克隆入pGEM-T-easy载体,经核酸序列分析后,进一步克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体,限制性内切酶鉴定,用脂质体Lipofectamine 2000转染COS-7细胞,72h后再用Western blot检测目的蛋白的表达。Ni柱亲和层析纯化COS-7细胞表达的F蛋白,高效毛细管电泳分析纯化后蛋白纯度。结果核酸序列分析证实获得带His标签的RSVF基因序列,没有发生无义突变。转染COS-7细胞后,利用Western blot方法检测到F蛋白的特异性条带,纯度达99%以上。结论初步建立了真核表达RSVF蛋白的纯化方法,为进一步优化RSVF蛋白制备条件及单克隆抗体及诊断试剂等研究奠定了基础。
- 陆燕燕何金生张梅虞结梅谢灿袁媛薛绍礼宋蔚郑娴娴
- 关键词：人呼吸道合胞病毒F基因真核表达纯化
