国家自然科学基金(20376031)
- 作品数：9 被引量：45H指数：5
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- 相关领域：理学生物学化学工程更多>>
- 不对称还原2-辛酮的菌株筛选和反应条件的研究被引量：4
- 2005年
- 从本实验室保藏菌株中筛选出一株酒明串珠菌Oenococcus oeniCECT 4730,能不对称还原2-辛酮得到R-2-辛醇。对反应条件的研究表明:Tris-硼酸(TBE)是最佳缓冲液,葡萄糖是最佳辅助底物,壬烷是最佳有机相,当采用300 mmol/L的TBE缓冲液3、00 mmol/L的葡萄糖、1∶1(体积比)的两相比1、50 g/L的湿菌体质量浓度下,可以实现3%的2-辛酮转化为R-2-辛醇(转化率>99%),并且e.e.值为97%。
- 胡健徐岩
- 关键词：2-辛醇菌株筛选
- 木糖辅助底物对近平滑假丝酵母催化(R,S)-苯基乙二醇不对称氧化还原合成(S)-苯基乙二醇体系稳定性的促进作用被引量：9
- 2007年
- 通过分析近平滑假丝酵母Candida parapsilosis催化外消旋苯基乙二醇（PED）不对称氧化还原合成（S）-苯基乙二醇的反应过程,结合微生物中糖类的代谢路径研究,建立了一种以木糖为辅助底物的NADPH辅酶再生的方法,提高了该催化系统的稳定性.结果表明,相同条件下反应体系中添加8 g/L的木糖可使（S）-PED产物的对映体过量值（ee）和产率分别提高14%和10%;菌体可重复使用3-4次,而产物ee值保持在98%.考察了木糖对表达羰基还原酶重组大肠杆菌体系催化效果的影响,发现木糖是通过强化（S）-羰基还原酶的催化作用提高了催化系统的稳定性,其原因是在磷酸戊糖途径中再生了氧化还原反应所需的NADPH辅酶.
- 吕腾飞徐岩穆晓清聂尧
- 关键词：近平滑假丝酵母全细胞生物催化苯基乙二醇木糖
- 一种新的高立体选择性羰基还原酶的性质及分离被引量：16
- 2006年
- 从近平滑假丝酵母(CandidaparapsilosisCCTCC203011)中分离得到了新的NADPH依赖型羰基还原酶。粗酶经硫铵分级沉淀、DEAESepharose离子交换层析、Phenyl-sepharoseFF疏水层析、BlueSepharoseFF亲和层析后在SDS-PAGE上显示为单一条带,其酶蛋白的相对分子质量为30kD。该酶还原反应的最适pH值为4.5,最适温度为35℃,Cu2+对羰基还原酶有强烈的抑制作用。该酶具有较高的底物专一性和立体选择性,对α-羟基苯乙酮和4-氯乙酰乙酸乙酯具有较高的不对称还原活力,其产物分别为(S)-苯基乙二醇和(R)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯,e.e值分别为100%和94.3%。因此该酶蛋白是不对称合成手性醇有效的生物催化剂之一。经LC-MASS-MASS分析得到了酶蛋白中一个肽段的氨基酸序列,通过比对发现该酶与假定蛋白(hypotheticalproteinCaO19.10414)具有一定的同源性。
- 羊明徐岩穆晓清肖荣
- 关键词：生物催化羰基还原酶分离纯化
- 醇类物质诱导培养改善近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)去消旋转化能力被引量：6
- 2005年
- 采用近平滑假丝酵母Candidaparapsilosis全细胞去消旋转化外消旋苯基乙二醇(PED)制备S-苯基乙二醇.主要研究了在菌体培养阶段添加底物醇类和酮类对菌体生长及菌体产酶的影响.研究发现添加乙醇可以促进细胞生长,提高细胞中脱氢酶活力,从而改善菌体立体选择性转化能力.通过在菌体培养至对数生长期时添加0.1%乙醇,菌体量增长10%,相对酶活提高30%,采用相同浓度菌体转化105mmol/L(R,S)-苯基乙二醇时,产物(S)-苯基乙二醇的对映过量值从90%提高至99%,产率从87.3%提高至92.4%.
- 任艳秋徐岩穆晓清聂尧
- 关键词：近平滑假丝酵母
- 添加营养物质实现1-苯基-1,2-乙二醇的高效转化被引量：1
- 2006年
- 为提高近平滑假丝酵母多批次转化(S)-1-苯基-1,2-乙二醇(PED)的对映体过量值(ee值)、转化率和多批次转化的稳定性,研究不同营养物质对去消旋反应转化(S)-PED的影响。结果表明:在添加的营养物质中,牛肉膏与氯化铵同时添加效果最好,其ee值和转化率达到95．87%和96．17%,比不添加的分别提高18．45%和24%;当添加5 g·L^(-1)乙醇或乙酸钠时,在不降低转化效果的同时反应批次由原来的2次提高到8次;通过胞内酶活性分析发现:添加乙醇能够激活乙醛脱氢酶的同时,使乙醇脱氢酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶、羰基还原酶的活性分别提高54．54%、42．01%、173．57%。
- 欧阳健徐岩穆晓清聂尧
- 关键词：氧化还原酶近平滑假丝酵母
- 固定化细胞生物催化制备(S)-苯基乙二醇的研究被引量：2
- 2007年
- 采用海藻酸钙固定化细胞方法能有效提高近平滑假丝酵母催化(RS)-苯基乙二醇(S-PED)去消旋化反应的稳定性,在优化反应条件下,固定化细胞催化批次由游离细胞的2次提高至6次,产物可保持高光学纯度(>95%)、高产率(>85%)。与化学合成液晶掺杂剂S-1011的理化特性对比结果表明,生物催化法制备获得的(S)-PED能够替代化学法制备的相同产品。
- 穆晓清徐岩聂尧刘鑫勤李韶辉
- 关键词：近平滑假丝酵母固定化细胞
- 两相系统中不对称还原2-辛酮的菌株筛选
- 2006年
- 从93株酵母、霉菌和细菌中筛选出能不对称还原2-辛酮的菌株.经过筛选获得一株博伊丁假丝酵母Can-didaboidiniiCECT10035.该菌种在底物浓度为78mmol·L-1时,能转化得到S-2-辛醇,2-辛酮转化率为32·6%,e·e·值达到95·6%.同时,还筛选出一株酒明串珠菌OenococcusoeniCECT4730,可以转化得到R-2-辛醇,当底物浓度为78mmol·L-1时,2-辛酮转化率为99·8%,e·e·值为97·8%.
- 胡健徐岩
- 关键词：2-辛醇菌株筛选
- 近平滑假丝酵母NAD(H)依赖型次级醇脱氢酶的分离纯化及酶学性质被引量：12
- 2007年
- 从近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis CCTCC 203011)中分离得到了NAD(H)依赖型的次级醇脱氢酶.粗酶经乙醇沉淀、Blue Sepharose Fast Flow亲和层析、DEAE Sepharose离子交换层析后在SDS-PAGE上显示为单一条带,其酶蛋白的亚基分子量(Mr)为37.5×103.该酶还原反应的最适pH为6.0,最适温度为45℃,是一个含Zn2+金属酶.该脱氢酶具有较高的底物的选择性,对2-酮具有较高的还原活力;同时,也能作用于醇类发生氧化反应,对次级醇的氧化活力最高.以β-羟基苯乙酮为底物,用纯化得到的酶催化反应后,还原产物为(R)-苯基乙二醇,因此该酶为(R)-专一性次级醇脱氢酶,是一种生产(R)-苯基乙二醇的有效的生物催化剂.经LC-MASS-MASS分析得到了酶蛋白中3个肽段的氨基酸序列,通过比对发现该酶与NCBI编号为BAA24528的次级醇脱氢酶具有较高的同源性.
- 羊明徐岩穆晓清肖荣
- 关键词：近平滑假丝酵母分离纯化
- 加强辅酶循环再生实现不对称合成(S)-1-苯基-1,2-乙二醇被引量：5
- 2007年
- 以β-羟基苯乙酮为底物,利用羰基还原酶不对称合成(S)-1-苯基-1,2-乙二醇(PED)过程中,葡萄糖脱氢酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化NADPH再生反应与还原反应形成耦联,合成(S)-PED的浓度分别达到0.78 g.L-1和0.75 g.L-1,对映体过量值(e.e.%)分别为91.84%和63.96%;连续分批还原反应后其总转化数(TTN)为26和58;经硫酸铵盐析、离子交换层析DEAE Sepharose、苯基疏水层析Phenyl Sepharose和亲和层析Blue Sepharose后得到电泳纯的羰基还原酶,比活为99.9 U/mg,亚基分子量为29,800;纯酶耦联葡萄糖脱氢酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶合成(S)-PED的浓度达到了1.04 g.L-1和1.19 g.L-1,证明了辅酶循环再生的存在.同时发现在利用胞内酶自耦联再生NADPH过程中,以乙醇作为辅助底物时效果最好.
- 欧阳健徐岩穆晓清羊明聂尧
- 关键词：羰基还原酶辅酶再生
