国家自然科学基金(30870797C090201)
- 作品数：8 被引量：7H指数：2
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- 多巴胺能神经细胞损伤过程中NCAM-140的表达变化
- 2010年
- 目的:检测NCAM-140在多巴胺能神经细胞损伤过程中中脑黑质部位的表达变化,探索其在多巴胺能神经细胞损伤中的可能作用。方法:采用MPTP腹腔注射建立小鼠中脑黑质多巴胺能神经细胞慢性损伤模型,采用免疫荧光染色和western blotting检测中脑黑质部酪氨酸羟化酶(TH)和NCAM-140的表达情况。结果:在小鼠中脑黑质一直有NCAM-140阳性细胞存在,且与TH阳性细胞共表达;TH在给予MPTP后第三周表达开始降低,NCAM-140在给予MPTP后第一周至第三周持续高表达,并且从第四周开始,其表达量明显降低。结论:NCAM-140的表达与多巴胺能神经细胞损伤有关。
- 王婷滕达刘美英刘亚萍袁红花高秀先高殿帅
- 关键词：黑质多巴胺能神经细胞
- N-cadherin在小鼠黑质多巴胺能神经元慢性损伤过程中的表达变化
- 2012年
- 目的 探索神经型钙黏蛋白（N-cadherin）在多巴胺能神经元慢性损伤中的可能作用.方法 采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）腹腔注射建立小鼠黑质多巴胺能神经元慢性损伤模型,采用免疫荧光染色和Western blot方法检测小鼠从实验第1周到第6周黑质酪氨酸羟化酶（TH）和N-cadherin的表达情况.结果 免疫荧光染色结果显示：对照组和MPTP组小鼠黑质的TH免疫阳性神经细胞在各时间点都同时表达N-cadherin.Western blot结果显示：①MPTP组小鼠黑质的TH表达量从第3周开始呈梯度下降（P〈0.05）;而N-cadherin表达量从第4周开始突然下降（P〈0.05）,但在第4到6周内的表达量虽有波动但差异无统计学意义（P〈0.05）.②虽然TH和N-cadherin的表达变化时程曲线似有区别,但相关分析显示两者之间仍存在正相关（r=0.924,P〈0.05）.结论 本研究证明多巴胺能神经元损伤影响了胞内N-cadherin的表达,影响程度虽与神经元的损伤程度有关,但并不完全一致,其内在关系有待进一步研究.
- 刘美英刘亚萍王晓舟高殿帅
- 关键词：多巴胺能神经元慢性损伤N-CADHERIN酪氨酸羟化酶黑质1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶
- 小鼠Calbindin-D28k基因体外表达及其抗凋亡作用的研究
- 2010年
- 目的:研究钙结合蛋白D28k(calbindin-D28k,CaBP)体外表达及其对神经元细胞抗凋亡作用。方法:RT-PCR从小鼠脑组织中扩增出小鼠CaBP的cDNA片段;重组构建pTH-CB质(pcDNA3-TH-CB),脂质体包裹pTH-CB质粒转染MN-9D细胞(多巴胺能杂交瘤神经元细胞);RT-PCR、免疫沉淀法检测CaBP的cDNA在细胞内表达情况;Hoechst染色、Caspase-3活性检测、AnnexinV/PI法对CaBP过表达的抗凋亡作用进行检测。结果:小鼠脑组织RT-PCR扩增出785bp条带,测序结果与Genebank中报道完全一致。脂质体包裹重组构建pTH-CB质粒转染MN-9D细胞后,转染pTH-CB质粒的MN-9D细胞中,CaBP的mRNA表达量和CaBP水平显著高于转染pc-DAN3组和正常MN-9D细胞组(P<0.05),3种细胞凋亡检测方法结果显示,CaBP过表达的细胞抗凋亡能力显著提高。结论:体外克隆CaBP的cDNA能在细胞内表达,过表达的CaBP通过抑制细胞的caspase-3活性,起抗凋亡作用。
- 朱孝荣朱园园李富珍袁红花孙怀昌高殿帅
- 关键词：基因表达凋亡小鼠
- 小鼠酪氨酸羟化酶启动子序列分析
- 2009年
- 目的对小鼠酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）启动子进行序列分析,研究启动子不同区域对下游基因表达调控能力。方法高保真PCR分别扩增出450、1500、2000、2400、3400bp TH启动子片段置换pcDNA3中CMV启动子,并在多克隆位点插入EGFP报告基因,重组后质粒分别瞬时转染MN-9D细胞（TH^＋）和ECV细胞（TH^-）,流式细胞仪观察EGFP基因在细胞内表达情况。结果转染后MN-9D细胞中EGFP阳性率分别为8.01%、7.97%、7.85%、7.72%、7.74%,差异无显著性。转染ECV细胞（TH^-）中,EGFP阳性率分别为6.51%、6.35%、6.71%、0.89%、1.02%。3400bp、2400bp启动子片段在TH^-细胞中调控能力受到明显抑制。结论上述启动子片段均有调控基因表达能力,初步证明TH启动子中特异性调控区域在2400-2000bp范围内。
- 朱孝荣朱园园高秀先袁红花孙怀昌高殿帅
- 关键词：小鼠
- 多巴胺能神经细胞慢性损伤过程中RET的表达变化被引量：5
- 2010年
- 目的:为了检测RET在多巴胺能神经细胞损伤过程中中脑黑质部位的表达变化,并探索其在多巴胺能神经细胞损伤中的可能作用。方法:本实验将C57BL/6小鼠分为三组:MPTP组、NS组和空白对照组,采用MPTP腹腔注射建立小鼠中脑黑质多巴胺能神经细胞慢性损伤模型,设立第一周到第六周六个时间点(1w-6w),检测小鼠行为学变化,并采用免疫荧光染色和western blotting等方法检测中脑黑质部酪氨酸羟化酶(TH)和RET的表达情况。结果:行为学结果显示,随给药次数及时间延长,悬挂实验中,MPTP组悬挂评分逐渐下降,MPTP组第三周给药以后与NS组比较差异有统计学意义(P<0.05);跳台实验中,小鼠受电击后跳上跳台的时间逐渐延长,错误次数逐渐增多。免疫荧光双标结果显示,在检测的各时间点,在小鼠中脑黑质一直有RET阳性细胞存在,且与TH阳性细胞共表达;western blotting结果显示,TH在给予MPTP后第三周表达开始降低,RET在给予MPTP后第一周和第二周持续高表达,并且也从第三周开始,其表达量明显降低。结论:这种表达变化提示RET的表达与多巴胺能神经细胞损伤有关。
- 王婷刘美英刘亚萍袁红花高秀先朱孝荣高殿帅
- 关键词：RET黑质多巴胺能神经细胞
- 酚红在神经细胞中的弱雌激素样作用研究
- 2011年
- 目的 研究酚红在神经细胞培养中的弱雌激素样作用.方法 使用不同培养基（其一含酚红、另一无酚红）培养MN9D细胞,并分别于培养基中加入胶质源性神经营养因子（GDNF）,然后加入相同浓度6-羟多巴胺（6-OHDA）进行损伤,最后四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞的存活状况;提取不同培养基中的正常细胞,Western blot法检测雌激素α受体（ERα）在细胞内的移位.结果 培养基中没有酚红时的细胞存活率较有酚红时低,且当GDNF与酚红同时存在时,细胞的存活率比只有GDNF或酚红存在时高;酚红能够促使ERα从胞质转移至细胞膜.结论 酚红能够激活ERα,并具有一定的神经保护作用.
- 陈静史子啸王萌高殿帅
- 关键词：酚红雌激素胶质源性神经营养因子6-羟多巴胺
- 钙结合蛋白-D28K对脑内多巴胺能神经细胞的保护作用被引量：2
- 2011年
- 目的研究钙结合蛋白-D28K(CaBP)对脑内多巴胺(DA)能神经细胞的保护作用。方法测定CalbindinD-28k转基因小鼠黑质致密部、腹侧被盖区、海马的CaBP和黑质致密部CaBP阳性细胞数,注射1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP),建立帕金森病(PD)模型,通过模型鼠游泳、悬挂、移动能力等行为学指标以及黑质致密部酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数来测定过表达CaBP抗MPTP对DA能神经细胞的损伤能力。结果转基因鼠黑质致密部、腹侧被盖区CaBP量显著高于正常鼠,海马、大脑皮层中CaBP量与正常组相比无明显差异。黑质致密部CaBP阳性细胞数显著高于正常小鼠[(140±9.89)个vs(101±7.82)个]。MPTP造模后,转基因鼠黑质致密部TH阳性细胞数和4项行为学变化差异不显著,而正常鼠造模后鼠黑质致密部TH阳性细胞数和4项行为学变化差异显著。结论过表达的CaBP对脑内DA神经细胞具有保护作用。
- 袁红花袁凤刚高殿帅朱孝荣
- 关键词：钙结合蛋白质类多巴胺神经元小鼠
- 脑组织特异表达钙结合蛋白D-28k转基因小鼠的制备
- 2009年
- 小鼠精子经2%DMSO处理与酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经细胞内特异表达钙结合蛋白D-28k(CaBP)的构件pTH-CB孵育,PCR筛选体外受精移植出生的仔鼠后代,通过测定黑质致密部、腹侧被盖区、大脑皮层和海马CaBP表达量以及黑质致密部CaBP阳性细胞数验证转基因鼠calbindin D-28k表达。结果表明:获得2只在脑内TH阳性神经细胞内特异性表达calbindin D-28k且稳定遗传目的基因原代鼠,表达CaBP具有抗MPTP诱导的神经细胞损伤功能。结果说明脑组织特异性表达calbindin D-28k转基因鼠谱系建立。
- 朱孝荣袁红花袁凤刚高殿帅孙怀昌
- 关键词：转基因小鼠
