中国博士后科学基金(20090460866)
- 作品数：6 被引量：14H指数：2
- 相关作者：池玉杰郑苗苗邵淑丽张玉龙闫洪波更多>>
- 相关机构：东北林业大学齐齐哈尔大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金黑龙江省教育厅资助项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 灰树花漆酶基因及启动子克隆和序列分析被引量：2
- 2014年
- 本文以优化后的漆酶培养基为基础,运用RT-PCR和RACE技术相结合,从该菌株中获得编码漆酶基因的cDNA及Genomic DNA的全长序列,Genomic DNA大小为2105 bp。比较该漆酶基因的cDNA和Genomic DNA的全长序列,发现该基因包含11个外显子和10个内含子。cDNA序列全长为1873 bp,其中,包含一个完整的ORF,长度为1563 bp,编码520个氨基酸。序列在氨基酸水平上与偏肿革裥菌Lenzites gibbosa的相似性评价最高,相似性达70%。采用FA-PCR的方法,扩增得到漆酶基因起始密码子上游长800 bp的启动子序列。该启动子区域上除分布有TATA-box、CAAT-box以及AP2等基本的转录起始元件外,还存在有多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括3个MRE元件、2个STRE元件、1个HSEs元件、5个氮因子结合位点等。这些结果表明,不同的外源诱导物可以调节灰树花漆酶基因的表达。
- 郑苗苗池玉杰邵淑丽姜秋旭
- 关键词：灰树花漆酶基因启动子克隆转录调控
- 偏肿栓菌产锰过氧化物酶条件优化被引量：9
- 2011年
- 采用LNAS(低氮天冬酰胺-琥珀酸)培养基用4种不同的底物处理方式,对白腐菌偏肿栓菌在28℃下进行静止培养,得到不同时间内的培养液,用紫外可见分光光度计分别检测在470,420,310nm处对于2,6-二甲氧基苯酚(2,6-DMP)、2,2’-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)、藜芦醇(VA)的氧化作用后光密度值的变化情况,作为其木质素降解酶系统锰过氧化物酶(MnP)、漆酶和木质素过氧化物酶(LiP)产生的依据。结果表明:偏肿栓菌可产生MnP(必须在Mn2+存在的条件下)和漆酶(不依赖于Mn2+),但不产生LiP;在培养液内添加底物木屑和2,6-DMP后可显著提高2种酶的分泌量。在此基础上,用含Mn2+和青杨木屑的LNAS培养基对偏肿栓菌在30℃下静止培养作为初始培养条件,然后采用2次正交试验和多种单因素试验对偏肿栓菌产MnP的培养基组分和培养条件进行优化。结果表明:在试验设定的因素和水平范围内的最优组合是培养液果糖浓度为5g.L-1、酒石酸铵浓度为15mmol.L-1、锰离子浓度是200μmol.L-1、吐温-80浓度为0.25mL.L-1,MgSO4.7H2O浓度为0.35g.L-1、矿质元素溶液和维生素溶液加入量分别为10和1mL.L-1;培养液pH值4.5;培养温度27℃;150r.min-1摇瓶培养条件下装液量为110mL。酶活可达314.52U.L-1,比优化前提高8.4倍。
- 张玉龙池玉杰闫洪波
- 关键词：木质素降解酶锰过氧化物酶正交试验
- 构巢曲霉转化子菌株产MnP条件优化及对3种染料的脱色被引量：1
- 2016年
- 【目的】对转入猴头菌MnP1和MnP2基因的2个构巢曲霉转化子菌株TN02A7-He-mnp1和TN02A7-Hemnp2产MnP的初始培养条件进行优化,然后用优化后的酶液对3种染料进行脱色研究,以期提高锰过氧化物酶(MnP)活性。【方法】采用单因素试验进行最适产酶温度的筛选;正交试验检测血红素浓度、Mn^(2+)浓度、pH值和转速4个因素在3个水平下对酶活性的影响,并通过优化培养验证试验检测酶活性;吸光度法检测优化后的酶液对3种染料的脱色率。【结果】菌株TN02A7-He-mnp1产TN02A7-He-MnP1最适培养条件为:在MMPGRT培养基的基础上,加入2 g青杨木屑作为产酶底物,Mn^(2+)浓度为267μmol·L^(-1)、氯化血红素浓度为0.05 g·L^(-1)、培养液pH值为7.5,100 mL三角瓶中装液量为50 mL、接入2个φ=10 mm的菌块,于37℃、180 r·min^(-1)的摇床中培养120 h;菌株TN02A7-He-mnp2产TN02A7-He-MnP2最适培养条件与TN02A7-He-mnp1相似,只是氯化血红素溶液浓度为0.03 g·L^(-1),摇床转速为220 r·min^(-1),其他条件相同。在上述最适培养条件下,2个构巢曲霉转化子菌株产TN02A7-He-MnP1和TN02A7-He-MnP2的酶活性分别为133.62和147.09 U·L^(-1),是初始培养条件的2.89和3.46倍。染料脱色试验表明,2个菌株对杂环类染料中性红和偶氮类染料刚果红在4 h内达到58%以上的脱色率,16 h对中性红达到或接近100%,20 h对刚果红达到或接近100%。【结论】通过优化培养基成分与条件可以提高2个构巢曲霉转化子菌株MnP的产酶量,2个菌株对中性红和刚果红都有高效的脱色作用。
- 孙世娜池玉杰于存李月
- 关键词：锰过氧化物酶构巢曲霉转化子染料脱色
- 偏肿革裥菌漆酶基因克隆及不同染料脱色研究被引量：4
- 2012年
- 染料由于具有复杂的化学结构通常难以降解.漆酶粗酶液对终浓度为50mg/L的不同化学结构的染料的脱色研究,可快速对蒽醌类茜素红进行脱色可达100%;杂环类中性红、偶氮类刚果红和三苯基甲烷类结晶紫的脱色效果低于茜素红,测试的3种染料均可在没有介体存在的条件下被漆酶脱色,显示出偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)漆酶对茜素红染料脱色具有较大的应用潜力,进而对废水处理具有更好的应用前景.利用PCR和RACE技术首次从该菌株中获得编码漆酶基因的cDNA及其基因组全长序列,基因组大小为2 106bp.通过比较该漆酶基因的cDNA和基因组DNA的全长序列,发现该基因包含11个外显子和10个内含子.cDNA序列的全长为1 982bp,其中包含一个完整的ORF,长度为1 563bp,编码520个氨基酸.
- 郑苗苗池玉杰
- 关键词：漆酶基因染料脱色结构域
- 偏肿革裥菌漆酶基因克隆及启动子序列分析被引量：1
- 2013年
- 以优化后的漆酶培养基为基础,通过RT-PCR和RACE技术相结合,从偏肿革裥菌Lenzites gibbosa菌株中获得编码漆酶基因的cDNA及Genomic DNA的全长序列,Genomic DNA大小为2 165 bp.通过比较该漆酶基因的cDNA和Genomic DNA的全长序列,发现该基因包含11个外显子和10个内含子.cDNA序列的全长为1 873 bp,其中包含一个完整的ORF,长度为1 563 bp,编码520个氨基酸.序列在氨基酸水平上与彩绒革盖菌Trametes versicolor的相似性评价最高,相似性达83%.通过SEFA-PCR的方法,扩增得到漆酶基因起始密码子上游长986 bp的启动子序列.分析表明,该启动子区域上除分布有TATA-box、CAAT-box以及AP2等基本的转录起始元件外,还存在有多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括7个MRE元件、2个STRE元件、1个HSEs元件、7个氮因子结合位点等.这些结果表明,不同的外源诱导物可以调节偏肿革裥菌漆酶基因的表达.
- 郑苗苗池玉杰
- 关键词：漆酶基因启动子克隆转录调控
- 灰树花产漆酶条件优化及对染料脱色的研究
- 2014年
- 采用LNAS(低氮天冬酰胺-琥珀酸)培养基对灰树花(Grifola frondosa)进行培养,检测不同时间培养液对不同底物的漆酶酶活,作为漆酶的产生及活性测定的主要依据。结果表明,在含Cu2+的培养液中不加底物漆酶最大酶活为235.4 U/L,含Cu2+的培养液添加底物木屑后漆酶最大酶活为458.8 U/L。提取经优化筛选后的培养基培养出的漆酶粗酶液,对4种具有不同化学结构的染料进行脱色试验,结果表明,三苯基甲烷类孔雀绿在6 h时脱色率为86.6%,蒽醌类茜素红在24 h时脱色率为47.6%,偶氮类甲基橙在24 h时脱色率为44%,杂环类中性红在24 h时脱色率为24.2%。由此显示出灰树花漆酶对孔雀绿染料脱色具有较大的应用潜力,进而对废水处理具有更好的应用前景。
- 郑苗苗邵淑丽董银燕姜秋旭翟莹林巍
- 关键词：漆酶脱色
