国家自然科学基金(30960249)
- 作品数：13 被引量：39H指数：4
- 相关作者：沈敏杨井泉高磊甘尚权杨永林更多>>
- 相关机构：新疆农垦科学院新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室石河子大学更多>>
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- 新疆细毛羊eIF3l基因的克隆、原核表达及蛋白检测
- 2017年
- 为了探究新疆细毛羊真核生物翻译起始因子(eukaryotic translation initiation factors,eIFs)基因eIF3l序列和原核表达蛋白特征,采用RTPCR法从新疆细毛羊成纤维细胞中克隆eIF3l基因mRNA的CDS区编码序列,构建其原核表达载体,并进行原核表达和蛋白检测。结果显示:完整获得eIF3l基因1 695 bp,共编码564个氨基酸残基;37℃,1 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导3.5 h可形成大量包涵体蛋白,其分子量约为69 ku;Western blot鉴定目的蛋白表达正确。结果表明:新疆细毛羊eIF3l基因原核表达成功,为进一步研究其功能和应用提供了科学数据。
- 于常江沈敏杨华杨永林祁成年张云生
- 关键词：新疆细毛羊原核表达
- 中国美利奴羊IGFBP-3基因内含子4区的PCR-RFLP多态性分析被引量：4
- 2010年
- 本研究针对在绵羊IGFBP-3基因内含子4区新发现的1个SNP位点(C218T),建立了PCR-RFLP的基因分型方法。利用该方法对353只中国美利奴羊(新疆军垦型)进行了多态性检测,结果显示,有CC(249bp)、CT(249/216/33bp)和TT(216/33bp)3种基因型,基因型频率分别为0.52、0.41和0.07;有C、T2种等位基因,等位基因频率分别为0.72、0.28。多重比较结果表明,不同基因型对中国美利奴部分羊毛生产性能有一定的影响,CC基因型个体的毛丛长度显著短于TT基因型个体(P<0.05),其毛囊密度显著高于CT和TT基因型个体(P<0.05)。
- 沈敏王文君杨永林马春萍刘守仁李宁
- 关键词：胰岛素样生长因子结合蛋白3单核苷酸多态性羊毛性状中国美利奴羊
- 中国美利奴成母羊促甲状腺激素受体基因的克隆与组织表达被引量：3
- 2014年
- 【目的】探讨绵羊TSHR基因序列及组织表达特征,为进一步研究TSHR在绵羊季节性繁殖中作用的分子机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR技术克隆绵羊TSHR基因,并对序列进行生物信息学分析;采用半定量RT-PCR技术检测TSHR在绵羊不同组织的表达情况。【结果】以中国美利奴羊卵巢组织cDNA为模板,获得了3 276 bp的TSHR cDNA序列,包括全部编码区序列(Coding Sequence,CDS)长2 295 bp,编码764个氨基酸。TSHR蛋白结构经预测发现存在多个磷酸化位点和蛋白激酶C磷酸化位点。半定量RT-PCR结果显示,绵羊TSHR基因在所检测组织中均有表达,其中在下丘脑、松果体和垂体中呈高丰度表达,在甲状腺、子宫等组织呈中等丰度表达。【结论】从绵羊卵巢组织中克隆到TSHR基因并进行了序列分析;TSHR基因在绵羊各组织中广谱表达,但在下丘脑、松果体、垂体、甲状腺中表达水平较高,提示TSHR在绵羊季节性繁殖等重要生理活动的神经内分泌调节过程中发挥重要作用。
- 赵赓高磊沈敏梁耀伟杨井泉何高明
- 关键词：绵羊克隆
- 利用PCR-SacⅡ-RFLP技术检测绵羊IGFBP-3基因多态性的研究被引量：3
- 2010年
- 【目的】将IGFBP-3基因作为候选基因,寻找与绵羊羊毛品质等经济性状相关的SNP位点。【方法】利用PCR-SSCP和DNA测序快速筛查SNP位点;在此基础上建立PCR-RFLP检测方法,分析该位点在不同品种绵羊中的基因型和等位基因分布情况;通过多重比较分析不同基因型与中国美利奴羊部分羊毛性状的关联性。【结果】以绵羊基因组DNA为模板扩增得到了249 bp的特异条带,PCR-SSCP及测序分析显示在该序列的140碱基处发生了G/T突变,导致SacⅡ酶切位点消失。经PCR-SacⅡ-RFLP检测,哈萨克羊和中国美利奴羊细毛羊得到三种基因型:TT(249 bp)、GG(139 bp/110 bp)和TG(249 bp/139 bp/110 bp);杜泊羊中出现GG和TG两种基因型;湖羊、小尾寒羊以及萨福克羊中只有GG一种基因型。关联性分析表明不同基因型与部分羊毛性状没有明显的相关性。【结论】在绵羊IGFBP-3基因嫩含子4区发现一个新的SNP位点,玻建立PCR-SacⅡ-RFLP检测方法;该位点不同等位基因和基因型在不同绵羊品种中的分布具有一定规律性;不同基因型与中国美利奴细毛羊部分羊毛性状中间没有明显的相关性。
- 沈敏王文君杨永林甘尚权马春萍何其宏张永胜李宁刘守仁
- 关键词：胰岛素样生长因子结合蛋白3单核苷酸多态性羊毛性状绵羊
- 中国美利奴超细型与哈萨克羊毛囊兴盛期皮肤组织消减cDNA文库的构建被引量：3
- 2012年
- 【目的】筛选影响绵羊羊毛性状的重要候选基因,为研究羊毛性状形成的分子机制奠定基础。【方法】利用抑制性消减杂交技术构建中国美利奴超细型和哈萨克羊兴盛期皮肤组织间正、反向消减cDNA文库,并对差异基因进行测序和生物信息学分析;应用半定量RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR对部分差异基因进行鉴定。【结果】①从所构建绵羊皮肤组织的正、反向消减cDNA文库中分别获得153和143个ESTs,其中分别包括5和4个未知功能的ESTs,推测可能是新基因;对部分已知功能ESTs进行了GO聚类分析、通路分析和蛋白互作分析,结果显示粗、细毛羊之间存在一定差异;②文库中的3个差异基因KRTAP8-2、Trichohyalin和KRTAP3-2均能在皮肤中特异性地高表达,其中KRTAP8-2和Trichohyalin基因在中国美利奴超细型羊皮肤组织中的表达丰度分别是哈萨克羊的3.45和2.07倍,而KRTAP3-2基因在哈萨克羊皮肤组织表达丰度是中国美利奴超细型羊的1.87倍。【结论】成功构建了中国美利奴超细型和哈萨克羊皮肤组织间抑制性消减cDNA文库,初步筛选出一批可能影响羊毛性状的差异表达ESTs。
- 杨剑波甘尚权李晶高磊杨井泉张科杨永林沈敏石国庆
- 关键词：抑制性消减杂交中国美利奴羊哈萨克羊
- 绵羊发情周期不同组织Cry1 mRNA转录水平相对定量研究被引量：8
- 2013年
- 研究表明,时钟基因Cry1在哺乳动物季节性繁殖内分泌过程中可能发挥了重要作用。文章以多浪羊(非季节性繁殖)和中国美利奴羊(季节性繁殖)为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术对下丘脑-垂体-性腺轴主要组织Cry1在发情周期不同阶段的表达变化情况进行了跟踪检测。结果表明:绵羊Cry1在所检测组织中均有表达,其中松果体和甲状腺Cry1的表达水平较高;不同绵羊品种Cry1在发情周期不同阶段的组织表达谱基本一致,除下丘脑外,卵巢、子宫、松果体、垂体和甲状腺中Cry1的表达水平均是在发情前期达到峰值;卵巢、子宫、垂体和松果体Cry1在发情前期和发情期的表达变化幅度存在显著的品种间差异。研究结果表明:Cry1可能具有启动发情和季节性繁殖的重要作用。
- 高磊甘尚权杨井泉杨剑波梁耀伟阿不都艾尼.努拉洪沈敏
- 关键词：发情周期下丘脑-垂体-性腺轴绵羊
- 绵羊ILK基因的克隆及其在毛囊生长期的表达被引量：4
- 2012年
- 整合素连接激酶（ILK）是一种支架蛋白,在毛囊发育过程中发挥重要作用。文章利用PCR技术,首次获得绵羊ILK基因的编码区全长序列,并进行了生物信息学分析;同时对该基因的组织表达谱及其在不同绵羊品种毛囊生长期皮肤组织中的表达变化进行了研究。结果表明,绵羊ILK基因ORF全长1 359 bp,编码452个氨基酸。ILK蛋白结构经预测含有3个锚定重复序列和1个激酶结构域,并存在多个磷酸化位点和蛋白激酶C的磷酸化位点。半定量RT-PCR结果显示该基因在绵羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、骨骼肌、皮肤和小肠组织中均有表达,皮肤、脾脏和肝脏中表达量较高;实时荧光定量PCR结果表明在3~5月份（毛囊生长起始期）,ILK基因在中国美利奴超细型和哈萨克羊皮肤组织中的表达水平较高并均呈逐月上升趋势;在6~10月份（毛囊生长期）,中国美利奴超细型皮肤ILK基因表达水平高于同期的哈萨克羊。分析认为ILK可能在调控绵羊次级毛囊生长发育过程中起一定作用。
- 杨剑波甘尚权杨永林张红琳宋天增冯静杨井泉高磊石国庆沈敏
- 关键词：整合素连接激酶基因克隆毛囊绵羊
- 绵羊CCNG1基因克隆及表达分析被引量：1
- 2015年
- 细胞周期蛋白cyclin G1(CCNG1)是一个重要的细胞周期调控因子,参与哺乳动物颗粒细胞增殖、卵母细胞成熟等繁殖生物学过程,但其在绵羊中鲜有报道。为了研究CCNG1基因对绵羊发情调控以及季节性繁殖的影响,文章对绵羊CCNG1基因进行了克隆和组织表达谱分析,利用Real-time PCR对该基因在多浪羊(常年发情)与中国美利奴羊(季节性繁殖)发情周期不同阶段性腺轴组织的表达变化进行了实时检测。获得了绵羊CCNG1基因部分c DNA序列,其中编码区全长885 bp,编码294个氨基酸。CCNG1蛋白结构经预测存在多个磷酸化位点和蛋白激酶C磷酸化位点。CCNG1基因在所检测绵羊各组织中均有表达,但在卵巢与肾脏中为高丰度表达;CCNG1在不同绵羊品种发情周期不同阶段性腺轴组织的表达变化规律基本一致,卵巢、子宫、松果体、垂体均是在发情期达到峰值。但是在发情期和发情后期卵巢CCNG1的表达量存在显著的品种间差异(P<0.01)。研究结果表明,CCNG1可能通过参与卵泡的生长发育继而达到对绵羊发情和季节性繁殖的调控。
- 高磊沈敏甘尚权杨井泉张译元
- 关键词：绵羊克隆发情周期
- TSHR基因T315A位点在不同繁殖特性绵羊群体中的多态性研究被引量：5
- 2016年
- 试验以促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)作为影响绵羊季节性繁殖的候选基因开展了多态性分析研究。结果在绵羊TSHR基因CDS区发现了一处c.31A>G突变位点,该突变为错义突变(T315A)。该位点在不同繁殖特性(季节性繁殖和常年发情)绵羊群体的基因型和等位基因频率有着明显不同的分布趋势,GG基因型和G等位基因为常年发情的3个绵羊品种(多浪羊、小尾寒羊、湖羊)的优势基因型和优势等位基因;常年发情的3个绵羊群体和季节性繁殖的3个绵羊群体之间等位基因G/A比值存在显著性差异(P<0.05)。研究结果表明该SNP位点上G等位基因与绵羊常年发情性状具有显著的相关性,该位点碱基突变可能导致TSHR构象改变,与TSH结合能力发生变化,进行影响到绵羊的季节性繁殖活动。
- 窦立静赵赓高磊杨井泉沈敏
- 关键词：TSHR单链构象多态性季节性繁殖绵羊
- 多浪羊发情周期不同阶段阴道细胞变化观察被引量：3
- 2012年
- 为了解多浪羊发情周期各阶段阴道细胞类型的变化情况,试验利用阴道涂片法对5只发情周期正常的多浪羊进行连续20 d的阴道涂片和镜检观察。结果表明:阴道细胞主要由角质化细胞、有核上皮细胞和白细胞组成。发情期角质化细胞占多数,发情后期3种细胞类型数量相近且差异不显著(P>0.05),发情间期主要以白细胞为主,发情前期有核上皮细胞占多数。根据细胞类型的变化确定发情周期,不同阶段的持续时间分别为发情后期(4±1)d、发情间期(9±3)d、发情前期(16±3)d、发情期(2±1)d。说明阴道细胞涂片法能较准确地确定绵羊发情周期的不同阶段。
- 高磊甘尚权杨井泉沈敏
- 关键词：绵羊多浪羊阴道涂片发情周期细胞类型
