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国家自然科学基金(20646004)
国家自然科学基金(20646004)
- 作品数:3 被引量:11H指数:3
- 相关作者:马林刘艳芳张峻松张文龙崔成哲更多>>
- 相关机构:郑州轻工业学院延吉卷烟厂中国农业大学更多>>
- 发文基金:国家烟草专卖局科技攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:农业科学轻工技术与工程更多>>
- 烟碱脱氢酶的纯化及性质研究被引量:4
- 2007年
- 通过硫酸铵沉淀、离子交换层析和凝胶过滤等方法对节杆菌(ArthrobacterZ3)所产烟碱脱氢酶进行了纯化,该酶经SDS-PAGE电泳检测为一条带,分子量约为120kDa。该酶活力的最适温度为40℃,在pH5.5-8.0范围内稳定,最适pH约为7.0;对烟碱作用的Km值为7.694×10-4mol/L;Mn2+、Co2+是酶的激活剂,而Cu2+是酶的抑制剂。
- 马林崔成哲袁有贵刘艳芳
- 关键词:纯化
- 产烟碱脱氢酶菌株节杆菌Z3的发酵条件研究被引量:7
- 2007年
- 以卷烟厂堆积烟尘的土壤中分离得到的产烟碱脱氢酶菌株节杆菌Z3(Arthrobacter Z3)为初发菌株,通过正交试验,对其发酵培养基进行优化,并对发酵条件(初始pH值、接种量、温度、转速、最佳发酵时间)进行了研究。获得的最佳摇瓶发酵配方为:2.5%烟末提取液、0.1%豆粉、0.1%硫酸铵、1.33%K2HPO4.3H2O、0.4%KH2PO4、0.02%MgSO4.7H2O、0.004%MnSO4.4H2O、0.002%CaCl2.2H2O。最适发酵产酶条件为:温度30℃,摇床转速220r/min,发酵时间9h,初始pH7.0,接种量6%。
- 马林张峻松曾晓鹰李元实张文龙刘艳芳
- 关键词:烟碱发酵条件
- 烟碱脱氢酶基因的原核表达及酶学特性研究被引量:4
- 2007年
- 将含烟碱脱氢酶基因重组质粒pBlueScript SK-ndh用限制性内切酶EcoRI、SpeI双酶切,目的基因再亚克隆到非融合表达质粒载体pET-17B,获得重组子质粒pET-17B-ndh,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLYS获得高酶活力表达的工程菌株。即使在不用IPTG诱导情况下,该工程菌也产生较高酶活力的可溶性酶,酶产量比野生菌A.nicotinovorans提高25倍。通过硫酸铵沉淀、离子交换层析、凝胶过滤提纯了烟碱脱氢酶,酶被纯化了39.82倍,SDS-PAGE分析得到电泳纯单一条带。该酶活力的最适温度为40℃,该酶组分在pH5.5~8.0范围内稳定,最适pH7.0,对烟碱作用的Km值为7.694×10^-4mol/L。Mn^2+、Co^2+是酶的激活剂,Cu^2+是酶的抑制剂。烟碱降解条件研究表明在反应体系中需要辅酶或电子接受体参与介导质子(H^+)的转移,该酶催化反应是一种氧化还原反应体系。
- 马林曾晓鹰张峻松刘庭淼李庆华
- 关键词:克隆纯化