目的探讨金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)感染人巨噬细胞系U937细胞后半胱氨酸蛋白酶-3/-9(Caspase-3/-9)的表达,确定Caspase-3/-9在金葡菌诱导的U937细胞凋亡中的作用。方法当细胞:细菌为1:20时分别培养0、15、30、60和90min,采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测U937细胞的凋亡率;采用Westernblot方法检测Caspase-3和Caspase-9的表达;采用荧光比色法检测Caspase-3/-9蛋白酶活性。结果金葡菌以时间依赖的方式诱导U937细胞凋亡。随着金葡菌感染时间的延长,Caspase-3和Cas-pase-9的表达逐渐增加,Caspase-3/-9蛋白酶活性随着培养时间的延长也逐渐上升。Caspases蛋白酶的抑制剂Z-DEVD-FMK和Z-LEHD-FMK能够抑制金葡菌诱导的U937细胞凋亡。结论Caspase-3/-9参与了金葡菌诱导的U937凋亡过程并发挥了重要的作用。
目的研究肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic escherichia coli,EPEC)感染人单核白血病细胞系THP-1细胞时,血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-1β水平的动态变化及与其THP-1细胞凋亡的关系。方法以Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测THP-1细胞凋亡率,以MTT法测定细胞存活率;并用酶联免疫吸附测定法动态检测感染24h内细胞培养上清中TNF-α和IL-1β浓度的变化。结果EPEC感染THP-1细胞后TNF-α和IL-1β活性均显著增加,峰值分别出现在感染后6及12h,而后逐渐下降,IL-1β活性至感染后24h仍高于对照组;THP-1细胞凋亡率在感染后逐渐增高,至24h达高峰。结论EPEC可激活多种炎症介质和诱导THP-1凋亡,EPEC感染THP-1细胞后TNF-α和IL-1β水平的升高具有重要作用。
