新疆维吾尔自治区自然科学基金(200421109)
- 作品数：5 被引量：37H指数：4
- 相关作者：石玉瑚付建红欧阳平凯王俊华杨洁更多>>
- 相关机构：南京工业大学新疆农业科学院新疆大学更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 白地霉Cryytococcus neoformans脂肪酶产酶条件与纯化被引量：4
- 2007年
- 目的:获得白地霉脂肪酶发酵的最优条件。方法:采用摇床培养的方法对各种影响因素进行筛选,结果:最适产酶条件为:豆油作碳源,蛋白胨作氮源,PEG600为表面活性剂,添加MgSO4、FeSO4、ZnSO4,pH8.7培养48h。采用双水相萃取和凝胶过滤两步纯化得到电泳均一的脂肪酶,纯化倍数达到72.2倍,其相对分子量约为38±1kDa。结论:得出采用双水相萃取脂肪酶的方法比较理想,该研究为新疆天山一号冰川白地霉脂肪酶的研究奠定了理论基础。
- 王俊华付建红杨洁石玉瑚欧阳平凯
- 关键词：白地霉低温脂肪酶产酶条件纯化
- 产低温脂肪酶菌株Geotrichum candidum ch-3的选育、发酵条件及酶学性质研究被引量：13
- 2007年
- 从新疆昌吉市油脂化工厂的含油冻土中筛选到一株产低温脂肪酶的菌株ch-3,形态鉴定及18SrDNA序列分析表明该菌株为白地霉,命名为Geotrichum candidumch-3。对其生长及产酶情况和酶性质做了初步研究。该菌株的最适生长温度是20℃。玉米浆、豆油可显著促进脂肪酶的产生。粗酶液经双水相萃取和SephadexG-75凝胶过滤分离纯化后进行酶学性质的研究。该脂肪酶最适作用温度为35℃,在0℃可保持66%的相对酶活性,最适pH值为7.0,对热较敏感,50℃处理20min,剩余酶活为55%,Fe2+、Cu2+、Mn2+以及Ca2+对酶有较强的激活作用。
- 付建红石玉瑚欧阳平凯王俊华
- 关键词：白地霉
- 白地霉Cryytococcus neoformans脂肪酶的双水相萃取被引量：11
- 2007年
- 研究不同无机盐的双水相体系对白地霉脂肪酶的萃取分离效果,对PEG/(NH4)2SO4成相系统进行了系统的研究,通过考察体系PEG分子量、不同的无机盐、PEG浓度、(NH4)2SO4浓度、离子强度、pH及(NH4)2SO4浓度对反萃取的影响,并通过正交实验进一步优化实验条件,初步确定在PEG浓度15%,(NH4)2SO4浓度22.5%,pH8.0,不加NaCl的条件下进行双水相萃取,脂肪酶分离系数和纯化倍数分别为6.8和7.5,比活力达到40.3U/mg蛋白。
- 王俊华杨洁付建红吴娜石玉瑚欧阳平凯
- 关键词：白地霉脂肪酶双水相萃取
- 一株产低温碱性磷脂酶A_1耐冷细菌的筛选及发酵条件的初步研究被引量：13
- 2008年
- 从新疆天山一号冰川冻土中筛选到一株产低温碱性磷脂酶A1的菌株xjF1,初步鉴定为居泉沙雷氏菌(Serratia fonticola)。该菌属于耐冷菌,具有产两种酶的特性。其产生磷脂酶A1的最适碳源为木糖,最适氮源为磷酸氢二铵。在接种量为2%,250mL三角瓶装液量为50mL,25℃,250r/min摇床振荡培养36h时,磷脂酶A1活力最高达17.5U/mL。该磷脂酶A1的最适作用温度和pH值是35℃和9.0,在12℃仍具有69%的酶活力,但在60℃保温10min即丧失86%的活力,对热敏感。
- 付建红唐辉桂姚斌石玉瑚欧阳平凯
- 关键词：发酵条件
- 白地霉ch-3脂肪酶Ⅰ基因在大肠杆菌中的表达
- 2008年
- 构建了白地霉脂肪酶Ⅰ的基因工程菌,为进一步进行蛋白质工程改造和脂肪酶应用奠定了基础。从新疆昌吉市油脂化工厂含油冻土中分离得到1株低温脂肪酶产生菌-白地霉ch-3。该菌发酵上清液中的脂肪酶最适作用温度为35℃,在0℃仍可保持66%的相对酶活力。应用PCR技术从白地霉ch-3基因组DNA中克隆得到脂肪酶Ⅰ基因lip1,将该基因与原核表达质粒载体pET-22b(+)连接,构建重组质粒pETl-ip1,转化E.coliBL21(DE3),酶切鉴定,筛选得到重组菌。十二烷基磺酸钠-聚丙希酰胺(SDS-PAGE)显示重组脂肪酶Ⅰ的相对分子质量约为5.8×104,酶活为2.73 U/mL,表明lip1基因的表达产物具有正常的生物学活性。白地霉ch-3脂肪酶Ⅰ基因lip1能够在大肠杆菌中有效地表达。
- 付建红姚斌杨浩萌欧阳平凯石玉瑚
- 关键词：大肠杆菌脂肪酶基因克隆
