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青岛市科技局资助项目(2001KNS-2E-27-1)
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3
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王云
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罗兵
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齐鲁医学杂志
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3篇
2006
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人疱疹病毒7型U14编码区原核表达载体的构建
2006年
目的 构建人疱疹病毒7型(HHV-7)开放读码框(ORF)U14的原核表达载体,并且进行原核表达。方法 PCR技术扩增HHV-7 ORF U14基因的主要抗原决定簇编码区(328~533氨基酸),目的基因与原核表达载体pThioHis A分别双酶切后连接,1×TSS法转化宿主菌E.coli BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导融合蛋白表达。结果 基因序列分析表明目的基因序列与HHV-7标准毒株相应序列基本-致,SDS-PAGE电泳可观察到相对分子质量为3.57万融合蛋白的表达,Western印迹证实pp85蛋白成功表达。结论 HHV-7被膜蛋白pp85原核表达载体构建和表达成功,为进一步探讨该重组蛋白在HHV-7特异性抗体检测中的应用提供实验基础。
孙坚萍
王笑峰
王云
罗兵
关键词:
原核表达
HHV6和HHV7感染与类风湿性关节炎的相关性
2006年
目的探讨人疱疹病毒6型(HHV6)和7型(HHV7)感染在类风湿性关节炎(RA)病因学中作用。方法用巢式PCR技术,检测62例类风湿性关节炎病人和138例健康献血员外周血单个核细胞(PBMCs)和血浆中HHV6和HHV7 DNA。结果类风湿性关节炎病人组PBMCs中HHV6和HHV7 DNA阳性率与正常对照组比较均无显著性差异(P>0.05);部分类风湿性关节炎病人血浆中可检出HHV6和HHV7 DNA,而对照组血浆中则为阴性。结论类风湿性关节炎病人中可能存在HHV6或HHV7的活动性感染,与类风湿性关节炎的发生发展有一定关系。
王笑峰
孙迎娟
罗兵
李慧
王云
关键词:
巢式聚合酶链反应
人疱疹病毒6型101K被膜蛋白主要抗原决定簇区原核表达克隆的构建和表达
2006年
目的 构建人疱疹病毒6型(HHV-6)101K被膜蛋白的原核高效表达克隆,并进行原核表达。方法 PCR扩增HHV-6B101K被膜蛋白的主要抗原决定簇区(666~834aa)编码基因片段(nt2347~2853),并导入T载体进行测序,与GenBank中HHV6标准毒株序列比较以进一步鉴定。目的基因及表达载体pThioHisA分别经双酶切后连接,转化宿主菌E.coli BL21,应用PCR法及限制性核酸内切酶双重鉴定原核表达质粒,并经测序证实。IPTG诱导蛋白表达,SD&PAGE电泳鉴定重组蛋白。结果 PCR获得的目的基因序列与GenBank中HHV-6B标准毒株Z29序列一致,重组质粒诱导菌表达产物出现相对分子质量为31900的融合蛋白条带。结论 HHV-6101K蛋白的原核表达克隆构建和表达成功,为进一步完善HHV-6活动性感染的血清学诊断提供了实验基础。
阎丽平
王云
王笑峰
罗兵
关键词:
疱疹病毒6型
基因表达
抗原决定簇
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