珠海市软科学研究计划项目(PC200310085)
- 作品数：3 被引量：27H指数：3
- 相关作者：许小霞张文庆金丰良古德祥于航更多>>
- 相关机构：中山大学华南农业大学更多>>
- 发文基金：珠海市软科学研究计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 德国小蠊泛素基因的克隆及序列分析被引量：11
- 2004年
- 设计一对简并引物 ,从德国小蠊Blattellagermanica细胞中克隆了泛素基因的编码区 ,GenBank登录号为AY5 0 10 0 3。序列分析表明 ,该编码区的长度为 2 2 8bp ,编码的多肽由 76个氨基酸残基组成 ,相对分子质量为 8 4 7kD ,其等电点为 5 73。同源性比较发现 ,德国小蠊泛素基因与其他真核生物泛素基因在氨基酸水平上具有 94
- 于航金丰良许小霞杨杏古德祥张文庆
- 关键词：德国小蠊泛素基因克隆
- 家蝇抗菌肽天蚕素基因的定点突变和高效表达质粒的构建被引量：8
- 2004年
- 运用反转录聚合酶链式反应 (RT PCR)技术从家蝇体内扩增出抗菌肽天蚕素 (cecropin)基因的开放阅读框(ORF) ,与pMD 18T载体重组 ,经限制性酶切片段分析和核苷酸序列分析 ,与GenBank中报道的序列一致。根据此ORF ,重新合成 1对引物 ,并在碳末端进行定点突变 ,加上Asn编码 ,使其末端酰氨化 ,再利用半嵌套式PCR扩增出家蝇cecropin基因的成熟肽 ,与双酶切的酵母表达载体pPICZαA连接 ,经PCR和双酶切鉴定 ,成功构建了分泌型表达质粒。
- 许小霞徐兴耀徐兴耀金丰良张古忍
- 关键词：家蝇抗菌肽天蚕素基因定点突变反转录聚合酶链式反应
- 家蝇防御素defensin cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达被引量：10
- 2006年
- 提取家蝇总RNA,RT-PCR扩增编码家蝇防御素defensin的cDNA,克隆并测定了其序列,将该cDNA序列与酵母表达载体pPICZαA重组,构建酵母分泌型表达载体pPICZα-de,电激法转化毕赤酵母(Pichia pasto-ris)受体菌GS115。经表型筛选和PCR鉴定证明目的片段已稳定整合到酵母染色体基因组中。在含不同浓度的Zeoc in平板上筛选到高拷贝整合的转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达,用Tric ine-SDS-PAGE确定了表达产物的正确性,琼脂孔穴平板扩散法、比浊法测定了表达产物的活性,对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus具有一定的杀菌活性。
- 金丰良许小霞赵士炜古德祥张文庆
- 关键词：家蝇防御素毕赤酵母活性测定
