科技基础性工作专项(2012FY111000)
- 作品数：69 被引量：410H指数：10
- 相关作者：李晓成单虎张志吴发兴刘爽更多>>
- 相关机构：中国动物卫生与流行病学中心青岛农业大学云南农业大学更多>>
- 发文基金：科技基础性工作专项山东省农业重大应用技术创新课题国家奶牛产业技术体系项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 我国O型Mya-98口蹄疫病毒流行情况与毒株分析被引量：16
- 2014年
- 2010年年初，O型口蹄疫Mya-98毒株在我国引起疫情，随后在13个省区相继发生25次疫情。同时，该毒株也在日本、韩国、朝鲜等国家和地区报道流行，各国政府为控制疫情，大量扑杀染疫动物，引起了全球的广泛关注。为追寻我国O型Mya-98毒株的来源、归属地位和国内流行情况，收集我国2010年～2012年年底Mya-98口蹄疫流行毒株，对其进行毒株分离鉴定和VPl基因序列测定，并对其进行比对和分析。结果显示：我国O型口蹄疫Mya-98毒株源于东南亚国家，当前优势流行毒株与东南亚国家流行毒株等毒株同源性95％以上，属同-毒株；国内Mya-98毒株随流行历史不同趋向于形成3个不同的进化分支，不同分支之间毒株差异较大，最大差异率可达15％；我国Mya-98毒株宿主适应范围发生变化，由最初猪、牛、羊均可感染到2010年之后主要感染猪。
- 何继军杨亚民马维民尚佑军吕律郑海学靳野郭建宏刘在新刘湘涛
- 关键词：口蹄疫病毒分子流行病学
- 山东省莱西市奶牛结核病流行率及风险因素分析被引量：2
- 2019年
- 为估计山东省莱西市奶牛结核病(b TB)的流行率,分析场间传播可能的风险因素,对该地区548个奶牛养殖场(户)进行流行病学调查。通过ELISA检测,估计b TB的群表观流行率(AP)为6.9%,群真实流行率(TP)为7.3%(95%CI:4.7%～10.0%);通过ELISA和单纯皮内变态反应(SICT)垂直试验,估计b TB个体AP为1.0%,TP为1.9%(95%CI:1.6%～2.2%)。Logistic回归分析表明,规模场、无隔离措施、无产犊场地、场外人员接生是b TB场间传播的潜在风险因素。建立的回归模型拟合度较好(P=0.05),ROC曲线面积为0.808(95%CI:0.736～0.880),预测概率较好。本研究可为该地区奶牛结核病防控策略的改进提供技术支持。
- 刘爱玲马清霞韩雪沈朝建康京丽张毅王幼明
- 关键词：奶牛结核病流行病学LOGISTIC回归分析
- 猪圆环病毒3型实时荧光定量PCR方法的建立和应用被引量：7
- 2018年
- 为实现猪圆环病毒3型(PCV3)的快速检测,根据GenBank中公布的PCV3全基因组序列设计并合成1对引物,建立了基于SYBR GreenⅠ的实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测方法。以前期检测的PCV3阳性样品制备的质粒DNA为模板,绘制了该real-time PCR的标准曲线和熔解曲线分析,并进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果表明,该方法具有良好的特异性和较高的敏感性,质粒DNA稀释至10-8后(浓度为5×102拷贝/μL)仍然可以检出,可重复性试验中各组的变异系数均小于3%。用23份临床样品进行了应用性检测,结果从中检测出了5份阳性样品,进一步证实该方法的可行性。
- 郝占武张志张美晶单虎李晓成
- 关键词：实时荧光定量聚合酶链反应
- H7N9亚型流感病毒对4种消毒剂及紫外线的敏感性研究被引量：1
- 2017年
- 为了研究H7N9亚型流感病毒对二氯异氰尿酸钠、复合酚、聚维酮碘、氢氧化钠等常用消毒剂及紫外线的敏感性,通过模拟现场消毒场景,将不同种类和不同浓度的消毒剂分别与H7N9亚型流感病毒充分作用,评价病毒对消毒剂的敏感性;评价在紫外照射强度90μW/cm2条件下病毒的存活情况。结果显示:H7N9亚型流感病毒在二氯异氰尿酸钠、复合酚、聚维酮碘、氢氧化钠有效浓度分别为1:5 000、0.1%、0.1%、1%的条件下可完全被杀灭;在紫外照射强度90μW/cm^2条件下15min可完全被杀灭,表明H7N9亚型流感病毒对4种消毒剂以及紫外线均具有较强的敏感性。本研究还进行活禽市场的现场验证,与实验室的研究结果一致。
- 邢利钟亮宁殷三鸿刘兆洁徐振娜贾伟新廖明
- 关键词：消毒剂敏感性
- 1株NADC30-like重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及遗传变异分析被引量：2
- 2020年
- 为研究山东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行病毒株的遗传变异情况,本研究从山东省威海市某疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场采集的猪肺脏组织中分离到1株PRRSV,命名为SDwh,并对其进行了全基因组序列测定、遗传演化分析和重组分析.结果显示:该病毒株在Marc-145细胞上生长良好,可见明显细胞病变;全基因组演化分析和同源性比对分析结果显示,SDwh株与美国病毒株NADC30和中国的NADC30-like位于同一分支;与北美病毒株NADC30的同源性最高,为93.1%;与我国分离的NADC30-like病毒株CHsx1401、JL580的同源性分别为91.1%和88.4%;与北美经典病毒株VR2332、中国HP-PRRSV JXA1和HuN4的同源性均为85.3%;与欧洲型病毒株Lelystad-virus(LV)同源性最低,为60.6%.与VR2332相比,Nsp2氨基酸序列比对结果显示,SDwh株存在NADC30-like病毒株典型的131个不连续氨基酸的缺失,同时在584~585位缺失2个氨基酸;GP5氨基酸序列比对结果显示,SDwh在GP5抗原表位上有氨基酸的突变.全基因组重组分析结果显示,SDwh株是一株重组病毒株,为NADC30与JXA1-P80的重组病毒,潜在的重组位点位于Nsp2中(2066 nt).本研究结果为PRRSV流行株的重组、演化分析和防控提供借鉴意义.
- 邓紫艳张锋董雅琴吴发兴段纲李晓成
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 我国口蹄疫流行现状与控制策略被引量：58
- 2015年
- [目的 ]科学研判我国口蹄疫流行形势,明确今后我国口蹄疫防控的重点工作。[方法 ]以口蹄疫分子流行病学和我国口蹄疫疫情情况、国家口蹄疫参考实验室疫情监测、主动监测数据为基础,分析了我国口蹄疫流行的现状和特点。[结果 ]目前,我国口蹄疫流行呈零星散发,毒株复杂,但总体疫情形势平稳。通过口蹄疫分子流行病学分析,表明我国目前主要流行有O型Mya-98毒株、A型Sea-97毒株,而这些毒株均来源于东南亚国家,污染面广,危害严重。[结论 ]境外流行毒株的威胁依然存在,防堵境外毒株的传入,加强威胁毒株的储备研究,加强免疫与免疫监测仍然是今后工作的重点。
- 何继军郭建宏刘湘涛
- 关键词：口蹄疫
- 禽致病性大肠杆菌毒力基因F11分布的检测及其表达被引量：1
- 2013年
- 为研究禽致病性大肠杆菌F11毒力基因的功能,根据禽致病性大肠杆菌IMT5155毒力基因F11的序列,设计合成特异性引物,通过PCR方法检测了毒力基因F11在禽致病性大肠杆菌中的分布,并以IMT5155基因组DNA为模板扩增F11基因片段,将其定向克隆到pET-28a(+)载体中构建原核表达质粒pET-28a-F11,转化入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达,纯化表达产物,制备免疫血清进行黏附抑制试验。结果显示,F11基因在禽致病性大肠杆菌中的分布率为22.2%(10/45),主要分布于大肠杆菌B2进化群中。利用F11免疫血清进行的Western-blot分析表明,F11可以在实验室培养条件下正常表达。黏附抑制试验显示,F11免疫血清可以抑制禽致病性大肠杆菌IMT5155对宿主细胞的黏附,表明F11可能在禽致病性大肠杆菌感染过程中发挥作用。
- 孟庆美王少辉任建鸾诸葛祥凯陆承平戴建君
- 关键词：禽致病性大肠杆菌
- 肉鸡生产链中肠炎沙门氏菌耐药性分析及ERIC-PCR分型被引量：9
- 2016年
- 目的：了解肉鸡生产链中肠炎沙门氏菌耐药性情况以及各生产环节菌株间亲缘关系,为临床用药及菌株追踪溯源提供依据。方法：采用微量肉汤稀释法对171株肠炎沙门氏菌进行13种抗菌药物药敏实验;采用肠杆菌基因间重复共有序列-聚合酶链式反应（enterobacterial repetitive intergenic consensus-polymerase chain reaction,ERIC-PCR）法对33株不同生产环节耐药菌株进行分子分型;采用SPSS 20.0软件、Gel-Pro Analyer 4.0和NTSYS pc 2.1软件进行分析。结果：171株肠炎沙门氏菌对13种药物耐药情况不同,其中对氨苄西林耐药情况最严重,耐药率高达90.06%,对恩诺沙星、氧氟沙星最为敏感,耐药率均仅为5.26%;不同环节间耐药性差异极显著（P〈0.01）;多重耐药率高达95.32%,共有26种耐药谱型。不同环节的33株肠炎沙门氏菌分为4种（Ⅰ~Ⅳ）基因型,遗传相似性在66%~100%,Ⅰ型为优势基因型;基因型相同的菌株耐药谱不一定相同,反之,耐药谱相同的菌株基因型不一定相同。结论：肉鸡生产链条中沙门氏菌对多种抗菌药物产生耐药性,且耐药谱种类繁多;沙门氏菌能够沿着生产链进行水平传播,肉鸡场环节菌株基因型相对复杂,菌株基因型与耐药表型之间无明显相关性。
- 李楠赵思俊王娟赵建梅李玉清黄秀梅王君玮丁宜宝刘焕奇曲志娜
- 关键词：肠炎沙门氏菌肉鸡耐药性
- 水貂肠炎病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立被引量：2
- 2015年
- 根据Gen Bank登录的水貂肠炎病毒(MEV)VP2蛋白基因的保守序列设计了1对特异性引物,经PCR扩增出146bp的目的片段,并克隆到pMD 18-T载体上,提取重组质粒经PCR及测序鉴定正确后,以10倍梯度稀释质粒作为阳性标准品,绘制荧光定量标准曲线,以此建立一种基于SYBR Green荧光染料的定量PCR特异性检测水貂肠炎病毒的方法。结果表明:该方法对MEV有很好的特异性,检测灵敏度为34拷贝/μL,且重复性试验变异系数均小于2%。临床检测中,在80份样品中检测到30份阳性样品,高于普通PCR和电镜观察方法的检出率。该方法的建立实现了对MEV临床早期快速诊断和定量分析,为毛皮动物MEV的防控提供了可靠的检测方法。
- 于永乐张传美杨海燕杨瑞梅张洪亮单虎
- 关键词：水貂肠炎病毒SYBR荧光定量PCR
- PCR鉴定沙门氏菌血清分型方法的建立与应用被引量：12
- 2018年
- 为建立快速有效、经济适用的沙门氏菌血清型鉴定方法,利用Primer Plex软件设计畜禽中常见沙门氏菌的菌体(O)抗原和鞭毛抗原(H)的引物,优化引物比例和退火温度等反应条件,建立沙门氏菌血清型鉴定的PCR法,并对46株沙门氏菌分离株进行血清型鉴定,同时与传统玻片凝集法和美国CDC的液相芯片(Luminex-x MAP)法进行比较。优化后获得了O抗原中B、C1、D和E1群的多重PCR引物,以及鞭毛抗原H1相抗原基因(fli C)和H2相抗原基因(flj B)的2对引物;建立了一套基于沙门氏菌O和H抗原的多重PCR血清型鉴定法;PCR法和Luminex-x MAP法鉴定出7种沙门氏菌血清型,传统玻片凝集法鉴定出6种血清型;PCR法与传统玻片凝集法和Luminex-x MAP鉴定结果的符合率均为95.65%。本研究建立的PCR沙门氏菌血清型鉴定法简便、快速,预期可在沙门氏菌的血清分型研究中发挥作用。
- 赵建梅李月华宋传周赵格曲志娜
- 关键词：沙门氏菌血清型PCR符合率
