安徽省自然科学基金(KJ2011ZD024)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 羟丁基壳聚糖-巯基烷基化壳聚糖质粒核壳结构制备及其在体内外缓释基因的研究
- 2014年
- 目的 制成以羟丁基壳聚糖（HBC）为壳,以巯基烷基化壳聚糖（TACS）包埋基因质粒为核的核壳结构,探讨其作为缓释基因载体的可行性.方法 TACS与增强型绿色荧光蛋白基因（pEGFP）以复凝聚法制成纳米微球作为核结构（TACS/pEGFP）,然后与温敏性HBC混合包裹以及冷冻干燥合成羟丁基壳聚糖-巯基烷基化壳聚糖/pEGFP（HBC-TACS/pEGFP）核壳结构;利用动态光散射仪器、透射电镜对核及核壳结构进行表征.凝胶电泳实验检测复合基因纳米粒子对pEGFP的携载以及保护作用.对HEK293T细胞和小鼠的骨骼肌进行体外和体内转染,检测基因复合纳米粒能否作为缓释基因载体.结果 HBC-TACS/pEGFP纳米微球多呈球形,粒径为（317.6±55.9） nm,表面Zeta电位为（2.3 ±1.1） mV,可有效保护pEGFP免受DNase I的降解.在体外转染经流式细胞仪测定,HBC-TACS/pEGFP的基因转染率为（8.00±5.69）％,明显小于TACS/pEGFP[（37.66±5.18）％],差异有统计学意义（P＜0.01）.但是在小鼠体内随着时间的推移,核壳结构组EGFP荧光蛋白表达量逐渐增加,第45天激光共聚焦显微镜下观察到HBC-TACS/pEGFP的荧光强度强于TACS/pEGFP.结论 HBC-TACS/pEGFP可以作为基因载体并且在体内有缓释基因,延长基因表达的作用.
- 王云林福星汪谟贞葛学武赵宇
- 关键词：壳聚糖缓释基因载体转染
