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广东省科技计划工业攻关项目(2006B36030019)
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姚蓝
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焦磷酸测序法检测HBV前C区/基本核心启动子突变的临床应用
2008年
目的建立一种新的基于焦磷酸测序技术的HBV前C区/基本核心启动子(pre-C/BCP)突变的检测方法,并验证该方法的准确性、重复性、可靠性及进行初步临床检测。方法通过对基因库中100个HBV基因序列的比对分析,设计出专用的pre-C/BCP焦磷酸测序的PCR扩增引物及测序引物,并以标准质粒作为标准品建立其相应的检测方法。通过对标准质粒及PCR扩增产物、经Sanger测序的HBV血清及基因芯片检测结果分析,以验证本检测方法检测的标本的特异度及本方法的检测可靠性。最后对60例HBV临床血清标本进行了初步的检测。结果本研究成功地建立了pre-C/BCP突变热点的焦磷酸测序方法。其检测结果与pre-C/BCP质粒,Sanger测序法的检测结果符合率达100%(Kappa=1.0),基因芯片检测结果的诊断符合率为91.7%。同一批血清标本的重复率达97.8%,阳性PCR产物测序的重复率100%。充分证明了本方法的准确性、重复性、可靠性。初步批量化检测60份临床标本结果表明,本方法能一次批量检出包括pre-C/BCP的单一、多位点的突变,并发现了一例少见的BCP T1758C突变。结论本实验所建立的pre-C/BCP突变热点的焦磷酸测序方法是一种可一次性检测HBV pre-C/BCP多位点突变的高通量的检测方法。
姚蓝
宋家武
信芝
李啸峰
吴洲清
唐健熹
郭波
吴波
赖人旭
关键词:
突变
寡核苷酸序列分析
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