黑龙江省科技攻关计划(PC07S01)
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
- 相关作者：穆亚芳曲连东郭东春姜骞林欢更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 兔出血症病毒衣壳蛋白VP60与兔肝脏细胞中相互作用蛋白的初步筛选被引量：2
- 2011年
- 为鉴定兔出血症病毒(RHDV)在感染兔肝脏过程中与肝细胞膜表面相互作用的靶蛋白,本研究利用SMART文库构建技术构建了兔肝脏细胞的真核表达cDNA重组质粒文库,将其转染SP2/0细胞,经嘌呤霉素筛选表达兔肝细胞蛋白的阳性SP2/0细胞。以RHDV-VP60蛋白作为固相包被抗原,经筛选,获得能够与VP60蛋白相互结合的表达性阳性SP2/0细胞克隆。测序表明26个克隆与兔的一些功能性蛋白有较高的同源性,其中包括代谢酶类13个、免疫信号通路受体蛋白5个以及其他细胞膜蛋白等。本研究鉴定的与RHDVVP60具有结合性的细胞蛋白为RHDV感染机制的研究奠定了基础。
- 穆亚芳刘家森郭东春李茂中原冬伟姜骞林欢曲连东
- 关键词：兔出血症病毒文库构建
- 与兔出血症病毒VP60蛋白相互作用蛋白的初步鉴定被引量：2
- 2010年
- 为获得与兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)相互作用的细胞蛋白,本研究以pMD-VP60重组质粒为模板扩增RHDV的VP60基因,克隆于表达载体pGEX-6p-1中,构建了重组表达质粒pGEX-VP60,并转化大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达GST重组蛋白(rVP60),western blot分析表明该蛋白具有与VP60单克隆抗体(MAb)良好的反应原性。以亲和层析纯化的rVP60进行pull-down实验,从兔的肝脏细胞膜蛋白中获得与VP60相互作用的蛋白,多肽质量指纹图谱分析表明,其相互作用的蛋白为ATP合成酶β亚基,提示该蛋白可能与RHDV的感染相关。
- 熊梅穆亚芳刘家森郭东春原冬伟姜骞林欢曲连东
- 关键词：兔出血症病毒VP60蛋白ATP合成酶
- 兔肝组织cDNA文库的构建及表达序列标签分析
- 2010年
- 分离纯化了3月龄新西兰白兔肝组织总RNA,构建了以真核表达质粒pGADT7-Rec为载体的酵母cDNA文库,该文库的库容量为2.55×106转化子/μg质粒,文库的效价为2.7×109CFU/mL,PCR分析结果表明文库插入片段大小为0.5～2.0kb,重组率约为100%。对随机挑选的50个克隆进行的测序结果表明,37个EST片段与日本大耳白兔基因有较高的同源性,11个EST片段与其他种属哺乳动物功能基因有较高的同源性,另有2个EST片段为未知基因。所构建的兔肝组织cDNA文库符合要求,为进一步研究兔肝组织的功能基因奠定了基础。
- 熊梅穆亚芳刘家森原冬伟郭东春姜骞林欢曲连东
- 关键词：CDNA文库表达序列标签
