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香鱼镉胁迫相关基因UraD的特征和表达分析被引量：1: 2013年; 2-氧-4-羟基-4-羧基-5-脲基咪唑啉脱羧酶(UraD)是嘌呤代谢反应酶,目前鱼类UraD基因仅在斑马鱼等少数物种得到克隆分析。从香鱼克隆获得UraD的cDNA序列,全长为967 bp,编码一个由174 aa组成的分子量为19.6kDa的蛋白,等电点为5.42。系统进化树分析显示香鱼UraD位于鱼类UraD簇中,与爬行类和哺乳类的亲缘关系较远,香鱼与斑马鱼UraD的蛋白序列相似性最高达70%。香鱼UraD表达经过反转录PCR(RT-PCR)检测发现在香鱼肝、心和肠中具有较高表达。香鱼肝组织中UraD表达量经过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测,发现镉胁迫下显著减少,香鱼UraD表达在盐度胁迫和鳗利斯顿氏菌感染下表达量保持不变。上述结果揭示香鱼UraD基因的基本特征,说明香鱼UraD基因表达与镉胁迫密切相关。; 陈强陆新江陈炯史雨红; 关键词：香鱼镉胁迫实时荧光定量PCR

香鱼补体成分C9基因的克隆、序列分析及表达被引量：5: 2012年; 补体成分C9是构成膜攻击复合体引起靶细胞溶解破坏的重要组成成分。该文测定了香鱼C9 （aC9）基因的cDNA全序列, 序列全长2 125个核苷酸, 编码一个由592个氨基酸组成、相对分子质量为6.56×104的前体蛋白, N端22个氨基酸为信号肽序列。序列分析表明, aC9与虹鳟C9的氨基酸同源性最高, 达56.8%, 与其它鱼类C9的同源性介于40.9%~53.8%之间。aC9在健康香鱼肝、脾、肠、鳃和肌肉有表达, 其中在肝内的表达量最高。实时荧光定量PCR的结果显示, 鳗利斯顿氏菌侵染4 h后, 肝中aC9 mRNA表达量显著上调, 并随着时间的推移在16 h时达到峰值。Western blotting分析的结果显示, 鳗利斯顿氏菌侵染后香鱼血清中的aC9蛋白随着时间的推移呈显著上调。以上结果表明, 香鱼肝组织C9基因表达变化与鳗利斯顿氏菌的侵染密切相关,; 孔铖将黄左安陈炯史雨红陆新江; 关键词：香鱼鳗利斯顿氏菌实时荧光定量PCR WESTERN BLOTTING

梅氏新贝尼登虫热休克蛋白60基因的克隆、序列分析及应激表达分析被引量：4: 2012年; 热休克蛋白60(HSP60)是一种维持线粒体蛋白正常结构和功能的分子伴侣。该文克隆了梅氏新贝尼登虫HSP60基因cDNA序列(NmHSP60),并采用荧光定量RT-PCR和Western blot研究其在不同温度和盐度下的表达变化。以25℃为参照,18℃时,NmHSP60在虫卵和成虫中均表达下调;而32℃时,在成虫中表达上调。以盐度24为参照,盐度18时,NmHSP60在成虫中表达下调;盐度30时,在虫卵中表达上调。该结果揭示NmHSP60可能在梅氏新贝尼登虫应对环境应激中起重要作用。; 王芳陈炯史雨红陆新江李明云; 关键词：HSP60 克隆

虹鳟LECT2的酵母表达、纯化及生物活性分析: 2013年; 白细胞衍生趋化因子2(leukocyte cell-derived chemotaxin2,LECT2)是一个参与多种生理和病理过程的分泌型细胞因子。该文采用毕赤酵母表达体系分泌表达虹鳟LECT2,用阳离子交换柱结合分子筛层析方法分离纯化目的蛋白,并获得纯度为96%,得率为120mg/L的重组虹鳟(Oncorhynchus mykiss)LECT2酵母培养物。生物学活性验证表明该重组蛋白能趋化虹鳟头肾来源的巨噬细胞,增强其呼吸爆发和杀菌能力,并改变其细胞因子等基因的表达。综上,该实验建立了一种快速有效的虹鳟LECT2活性重组蛋白的制备方法,为后续相关蛋白的功能研究奠定了基础。; 史雨红章瑞程杨旦阳陆新江陈炯李明云; 关键词：纯化生物活性虹鳟

香鱼CCL4-like基因的克隆、序列分析及免疫相关性表达变化分析被引量：7: 2013年; CC型趋化因子是一种多功能的趋化因子,是鱼类先天免疫系统的重要组成部分。该研究通过文库测序方法获得香鱼(Plecoglossus altivelis,ayu)CCL4-like(aCCL-like)基因cDNA序列。它编码一个由123个氨基酸组成的前肽,N-端22个氨基酸为信号肽序列。成熟肽包含4个半胱氨酸残基,可形成2个二硫键。系统进化树分析揭示,aCCL4-like与大西洋鲑(Salmo salar,atalantic salmon)CCL4亲缘关系最近。实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)分析揭示,aCCL4-like基因mRNA在检测的健康香鱼7个组织中均有表达,其中肝的表达量最高;在鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)感染后,各组织中aCCL4-like基因mRNA表达均显著变化,但各时间点变化不一,其中肠组织的变化最为明显。随后原核表达了aCCL4-like并制备相关抗血清,Western blot分析揭示,鳗利斯顿氏菌注射后4 h的血清中CCL4-like含量无显著变化,8 h时显著增加,此后表现为持续增加。综上,aCCL4-like基因的表达变化与鳗利斯顿氏菌的感染过程密切相关,推测aCCL4-like可能在香鱼抗病原菌感染的免疫反应过程中有重要作用。; 杨旦阳陈炯陆新江史雨红李明云; 关键词：香鱼鳗利斯顿氏菌实时荧光定量PCR

花鲈Wap65-2基因的克隆、理化性质及其表达与哈维氏弧菌感染的相关性被引量：8: 2012年; Wap65-2(warm temperature acclimation related 65 kDa protein-2)是鱼类中发现的一种血浆糖蛋白,与细菌感染性免疫应激紧密相关。该研究首次克隆了花鲈Wap65-2基因全长cDNA序列。它由1601个核苷酸组成,包含一个大的开放阅读框,预期编码一个由436个氨基酸组成、相对分子质量为4.87×104的前体蛋白,N端19个残基为信号肽序列。序列和系统进化树分析表明,花鲈Wap65-2与欧洲海鲈进化关系最近,两者氨基酸同源性高达80.7%。健康花鲈Wap65-2基因mRNA主要在肝中表达,心和肌肉中少量表达。qRT-PCR分析揭示,哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染感染12h后,花鲈肝中Wap65-2基因mRNA表达显著上调,24h时达到峰值,为健康对照的6.89倍。原核表达花鲈Wap65-2并制备抗血清。Western blot分析表明,哈维氏弧菌感染12h后,花鲈血清中Wap65-2含量显著增加,36h时达到最大值,为健康对照的5.33倍。综上所述,花鲈Wap65-2基因的表达与其细菌感染性免疫应激紧密相关。; 史雨红陈炯高姗姗沈广强陆新江李明云; 关键词：哈维氏弧菌实时荧光定量PCR WESTERN BLOT

香鱼凝血因子X基因表达与鳗利斯顿氏菌感染的相关性被引量：26: 2011年; 凝血途径的关键因子--凝血因子X(coagulation factor X,FX),是一种与免疫调控密切相关的维生素K依赖型丝氨酸蛋白酶。该研究克隆了香鱼(Plecoglossus altivelis)FX基因全长cDNA序列,它由1817个核苷酸组成,包含一个大的开放阅读框,编码一个由453个氨基酸组成的相对分子质量为5.07×104的蛋白。香鱼FX与已知的哺乳动物FX的结构相似,N端24个残基为信号肽序列。序列比较表明,香鱼FX与斑马鱼FX的氨基酸同一性最高,为53%。在健康香鱼中,FX基因mRNA主要在肝组织中表达,脑和鳃中也有少量表达。实时荧光定量PCR分析揭示,鳗利斯顿氏菌感染后香鱼肝组织中FX基因mRNA表达显著上调,16h时达到5.43倍。通过原核表达系统表达了香鱼FX丝氨酸蛋白酶结构域,并制备了抗血清。Western blotting分析显示,鳗利斯顿氏菌感染后香鱼血清中FX含量显著增加,并随着时间延长上调倍数不断增大,在36h时达到3.68倍。据此,FX基因mRNA及蛋白的表达与鳗利斯顿氏菌感染香鱼的过程紧密相关,揭示它可能在鱼类抗细菌感染的免疫反应中起重要作用。; 黄左安陈炯陆新江史雨红李明云; 关键词：凝血因子X 香鱼鳗利斯顿氏菌 WESTERN BLOTTING

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教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-08-0928)

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