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大肠杆菌O157志贺毒素1胶乳凝集试剂的研制被引量：2: 2006年; 根据大肠杆菌933W志贺毒素1(STX1)基因的序列,设计合成寡核苷酸引物,以国内分离的大肠杆菌O157菌株94H的DNA为摸板,经PCR扩增志贺毒素1A亚基基因,扩增的基因克隆到原核表达载体pET-28a,在E.coliBL21中进行表达。用表达的STX1A产物免疫兔子,制备STX1A抗血清,从中提取IgG。合成胶乳,用提取的IgG与胶乳交连反应,研制出了敏感和简便的检测大肠杆菌O157STX1产生的胶乳检测试剂。; 刘建青周志江韩烨郑峰薄清如; 关键词：大肠杆菌O157 A亚基原核表达

从长春地区牛粪中检出大肠杆菌O_(157)∶H_7被引量：8: 2000年; 周志江黄上媛宋敏郑明光郑昊李爱民张让堂汪力亚李景云; 关键词：大肠杆菌O157:H7 牛粪病原携带者公共卫生

肠道出血性大肠杆菌O157∶H7中肠道聚集粘附大肠杆菌耐热肠毒素1基因的检测: 2001年; 应用聚合酶链式反应 ( polymerase chain reaction,PCR)对 1 99株肠道出血性大肠杆菌 ( enterohemor-rhagic Escherichia coli,EHEC) O1 57∶ H7中肠道聚集粘附大肠杆菌耐热肠毒素 1 ( enteroaggregative Es-cherichia coli heat-stable enterotoxin1 ,EAST1 )基因进行了检验。结果 ,从 1 % ( 2 / 1 99)菌株中检出了 EAST1基因。对其中 1株菌 ( EHEC O1 5796-84 )的 EAST1基因进行了序列测定。与以往发表的其他致腹泻性大肠杆菌的 EAST1基因的序列相比较 ,EHEC O1 5796-84与 EAgg EC ( O4 2 ,TL1 0 0和 1 60株 )、产肠毒素性大肠杆菌 ( enterotoxigenic E.coli,ETEC)、肠道致病性大肠杆菌 ( enteropathogenic E.coli,EPEC)、扩散粘附性大肠杆菌 ( diffusely adherening E.coli,DAEC)的 EAST1基因序列相同 ,但与 EAgg EC菌株 1 7-2的EAST1基因有 1个碱基对不同 ,从而导致 1个氨基酸残基的变化。本研究结果进一步表明。; 周志江西川祯一长谷笃春木孝佑; 关键词：基因检测

大肠杆菌O157:H7菌毛分子伴侣基因的克隆与表达: 2009年; 根据Genebank中已登录的大肠杆菌O157：H7菌株EDL933基因序列中菌毛分子伴侣ycbR基因序列设计1对引物，并分别在其5′端分别加入NcoⅠ、XhoⅠ酶切位点，以大肠杆菌O157：H7国内分离株97094的DNA为模板，用聚合酶链反应（PCR）扩增出710bp的DNA片段。回收并纯化该DNA片段，用限制性核酸内切酶NCOⅠ、XhoⅠ同时消化DNA片段和双酶切载体质粒pET28a（＋）。将它们回收纯化并连接，然后转化到宿主菌大肠杆菌DH5α，从该菌中提取重组质粒，用PCR、限制性内切酶位点分析及核苷酸序列测定法对克隆的重组质粒进行鉴定，表明ycbR基因定向克隆到了载体质粒pET28a（＋）。再将重组质粒转化到表达宿主菌大肠杆菌BL21（DE3），在含Kan抗生素LB培养基中经IPTG诱导12～16h，做SDS-PAGE分析，表明ycbR基因在菌株中获得高效表达，表达蛋白相对分子质量大小约为30000，与预期结果一致。为研究大肠杆菌ycbR基因产物的功能和致病作用奠定了基础。; 牛晋国秦晓冰单虎韩一超周志江; 关键词：大肠杆菌O157 菌毛原核表达

与HEp-2细胞粘附现象相关的大肠杆菌O157基因的发现被引量：3: 2005年; 将产志贺毒素大肠杆菌O157∶H7菌株97094培养于含有不同质量浓度的萘啶酮酸(nalidixicacid,NA)的麦康凯(MacConkey)琼脂平板上,获得对NA有抗性的菌株。用含有自杀性质粒pRT733的供体菌SM10λpir(携带转座子TnphoA)和抗萘啶酮酸的97094菌株做接合试验,使转座子TnphoA转入受体菌97094,经过约200个接合试验,有503个菌株在含有Km、NA、XP的LB琼脂平板上形成蓝色菌落,说明在这些菌株中形成了phoA融合基因,并能表达phoA基因。在这503个Kmr,NAr变异体中,有6株完全失去了对HEp-2细胞的局灶型粘附(localadherence,LA)现象。对构建的6株大肠杆菌O157TnphoA变异体,克隆TnphoA及其两侧的大肠杆菌O157DNA序列,用根据TnphoA融合接点处的phoA的DNA序列设计合成的寡核苷酸引物,对各克隆中TnphoA上游的大肠杆菌O157的DNA片段部分进行测序,测序结果做BLAST搜索,发现有4个变异体的TnphoA插入到已知的大肠杆菌O157紧密素基因eae中,有2个变异体的TnphoA分别插入到eae之外的核苷酸序列中,分别插入到一个功能未知的菌毛分子伴侣基因和一个功能未知的Z4182基因的上游。这项研究表明,除紧密素外,大肠杆菌O157尚有其他因子参与对真核细胞的粘附。; 韩烨周志江张玉静; 关键词：大肠杆菌O157:H7 HEP-2细胞变异体志贺毒素受体菌

大肠杆菌O157 Z4182基因的克隆与表达被引量：2: 2003年; 根据大肠杆菌 O15 7Z4182基因设计 1对引物 ,并在其 5′端分别加入 Nco 、Xho 酶切位点 ,用聚合酶链反应(PCR)从本试验用的大肠杆菌 O15 7及 1株产志贺毒素大肠杆菌 (STEC) O8、1株肠道聚集粘附大肠杆菌 (EAgg EC)和 1株产肠毒素性大肠杆菌 (ETEC)菌株中也扩增出了 80 3bp的 DNA片段。以大肠杆菌 O15 7菌株 94H的 DNA为模板 ,用上述引物做 PCR,将其产物连接到载体质粒 p ET2 8a(+) ,然后转化到宿主菌大肠杆菌 L E392 ,从该菌中提取重组质粒 ,再将其转化到表达宿主大肠杆菌 BL2 1(DE3) ,用 PCR、限制性内切酶位点分析及核苷酸序列测定法对克隆的重组质粒进行鉴定 ,表明 Z4182基因定向克隆到了载体质粒 p ET2 8a(+)。将转化子培养并经 IPTG诱导后 ,做SDS- PAGE电泳 ,表明该菌株可以表达 Z4182基因。本试验为阐明大肠杆菌 O15 7Z4182基因的分布及探讨该基因产物的功能和致病作用奠定了基础。; 秦晓冰周志江丁伟赵玉龙唐中伟任家琰; 关键词：克隆

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