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教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET11-11023)

作品数：14 被引量：104H指数：7
相关作者：徐广贤周林林郑锡铭刘鑫张爱君更多>>
相关机构：宁夏医科大学更多>>
发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 14篇中文期刊文章

领域

  • 14篇医药卫生
  • 2篇生物学

主题

  • 5篇蛋白
  • 5篇细胞
  • 4篇靶向
  • 4篇MIR
  • 4篇MIRNA
  • 3篇自噬
  • 3篇细胞自噬
  • 3篇慢病毒
  • 3篇结核
  • 3篇结核分枝杆菌
  • 3篇类风湿
  • 3篇类风湿关节炎
  • 3篇激酶
  • 3篇关节炎
  • 3篇分枝杆菌
  • 3篇风湿
  • 3篇风湿关节炎
  • 3篇杆菌
  • 3篇PCR
  • 3篇REAL-T...

机构

  • 14篇宁夏医科大学

作者

  • 13篇徐广贤
  • 6篇郑锡铭
  • 6篇周林林
  • 5篇汤建中
  • 5篇刘鑫
  • 5篇张爱君
  • 5篇张涛
  • 4篇魏军
  • 3篇张兆波
  • 3篇郭乐
  • 3篇贾伟
  • 3篇张瑞芹
  • 3篇张一琳
  • 3篇白静
  • 2篇刘学英
  • 2篇赵志军
  • 1篇赵瑾
  • 1篇鱼云霞
  • 1篇丁淑琴
  • 1篇杨芝红

传媒

  • 5篇中国免疫学杂...
  • 2篇细胞与分子免...
  • 2篇宁夏医科大学...
  • 1篇免疫学杂志
  • 1篇中国人兽共患...
  • 1篇国际检验医学...
  • 1篇现代生物医学...
  • 1篇临床检验杂志...

年份

  • 1篇2016
  • 2篇2015
  • 8篇2014
  • 3篇2013
共 14 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
血清β-HCG,hsCRP及CRP检测对胎膜早破宫内感染的诊断价值被引量：28
2016年
目的:分析血清β-HCG,hs CRP及CRP检测对胎膜早破产妇宫内感染的诊断价值。方法:选择2013年8月-2015年8月我院收治的胎膜早破患者61例作为研究组,另选择同期在我院行剖宫产手术的55例患者作为对照组。检测并比较两组患者血清β-HCG,hs CRP及CRP水平,分析其水平变化用于诊断胎膜早破产妇发生宫内感染的敏感性及特异性。结果:研究组患者血清β-HCG,hs CRP及CRP水平均显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);研究组患者宫内感染的发生率高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);重度宫内感染患者血清β-HCG,hs CRP及CRP水平显著高于中度及轻度宫内感染者,差异具有统计学意义(P<0.05);中度宫内感染患者血清β-HCG,hs CRP及CRP水平高于轻度宫内感染者,差异具有统计学意义(P<0.05);β-HCG,hs CRP及CRP三项指标联合检测用于诊断胎膜早破产妇宫内感染的敏感性及特异性均高于任意一项指标单独检测的敏感性及特异性,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:胎膜早破产妇血清β-HCG,hs CRP及CRP水平联合检测用于预测宫内感染的发生具有较高的灵敏性及特异性。
孙晓霞张兆波张玉枝张金铎赵丹娜
关键词：PP胎膜早破宫内感染
结核分枝杆菌优势蛋白PPE37重组载体的构建及原核表达
2013年
目的构建结核分枝杆菌ppe37基因的重组原核表达质粒,并将其转化到E.coli BL21中诱导表达。方法以结核分枝杆菌国际标准株H37Rv基因组DNA为模板,PCR法扩增ppe37基因,将其克隆至pEasyE2克隆载体中,构建pEasyE2-ppe37重组质粒。经双酶切后将ppe37基因片段亚克隆到pET30a载体中,构建重组原核表达质粒pET30a-ppe37,并转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达。利用SDS-PAGE及WesternBlot对表达产物进行鉴定。结果 PCR法扩增出约1600bp的条带。重组质粒pEasyE2-ppe37经PCR及双酶切鉴定构建正确,测序结果与GenBank中登录的PPE37蛋白基因序列一致。重组原核表达质粒pET30a-ppe37经PCR及双酶切鉴定构建正确。SDS-PAGE鉴定表达的组氨酸标签重组蛋白相对分子质量约为50KDa,Western blot验证重组蛋白可与抗组氨酸单抗发生特异性反应。结论成功构建结核分枝杆菌ppe37基因重组原核表达质粒pET30a-ppe37,并成功诱导表达,为PPE37蛋白作为结核病特异性诊断抗原的开发奠定了基础。
张瑞芹汤建中贾伟魏军张一琳张一琳
关键词：结核分枝杆菌基因克隆原核表达
miR-144通过靶向Atg4a调控卡介苗和雷帕霉素诱导的RAW264.7细胞自噬被引量：9
2015年
目的研究卡介苗(BCG)对RAW264.7细胞中与细胞自噬相关的miRNA(miR-21、miR-181a、miR-155和miR-144)表达的影响,并以miR-144为研究对象,验证miR-144对自噬相关基因Atg4a的靶向调控关系,探究其在结核分枝杆菌感染宿主细胞过程中调控细胞自噬途径的作用机制。方法分别对RAW264.7巨噬细胞进行饥饿处理12 h、50 ng/m L雷帕霉素作用2 h、10 nmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用12 h;BCG刺激RAW264.7巨噬细胞12 h、24 h、48 h后,收集细胞,提取总RNA;利用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-21、miR-181a、miR-155及miR-144的表达水平;构建p MIR-Report-Atg4a及p MIR-ReportAtg4a mut重组质粒,利用双萤光素酶报告系统、qRT-PCR及Western blot法验证miR-144与Atg4a的靶向作用关系。结果 BCG刺激RAW264.7巨噬细胞后,可使miR-21、miR-155及miR-144表达上调,miR-181a表达下调;经雷帕霉素诱导的细胞自噬,4种miRNA表达量与正常组相比分别上调约64倍、52倍、14倍、1倍;与正常组相比,3-MA处理细胞组,miR-21、miR-144、miR-155、miR-181a的表达量分别下调1.22倍、1.05倍、1.54倍及12.5倍;双萤光素酶报告系统及Western blot法证实,miR-144可靶向作用于Atg4a-3'UTR并抑制其表达。结论 miR-144可靶向抑制自噬相关基因Atg4a的表达,参与调控RAW264.7巨噬细胞的自噬过程。
周林林郭乐汤建中张爱君刘学英徐广贤
关键词：结核分枝杆菌细胞自噬靶向调控
6种miRNAs在类风湿关节炎患者外周血及关节液中的表达分析被引量：14
2014年
目的:探讨miR-16、miR-17、miR-30a等6种miRNAs在类风湿关节炎(RA)患者外周血血浆、单个核细胞(PBMC)及关节液中的表达水平及其临床意义,为进一步研究其在RA中的作用机制提供理论依据。方法:收集80例RA患者、32例骨关节炎(OA)患者及32例健康人外周血、关节液,分离血浆及PBMC;提取small RNA,用特异性茎环引物反转录成c DNA,构建成熟miRNAs的T载体,绘制标准曲线;stem-loop法Real-time PCR检测血浆、PBMC及关节液miRNAs的表达量,进行相关性分析;并与RA活动性监测指标类风湿因子(RF)、血沉(ESR)、C-反应蛋白(CRP)进行相关性分析。结果:RA组血浆、PBMC和关节液中miR-16、miR-17、miR-30a、miR-106 miR-101和miR-130相对于OA组、健康对照组表达上调(P<0.05),但血浆中miR-101的表达水平与OA组差异无统计学意义。相关性分析显示,6种miRNAs在血浆、PBMC及关节液中有不同程度的正相关(P<0.05)。与RF、ESR、CRP相关分析显示,血浆、PBMC和关节液中miRNAs与一个或多个指标正相关(P<0.05)。结论:miR-16、miR-17、miR-30a、miR-101、miR-106、miR-130在RA患者血浆、PBMC及关节液中有显著变化,表明这些miRNAs可能通过调控某些相关基因在RA的发病过程中发挥重要作用;其表达水平可作为RA疾病活动的有效检测指标,为RA提供新的诊断标志物。
郑锡铭刘鑫周林林张涛张爱君徐广贤
关键词：MIRNA类风湿关节炎REAL-TIMEPCR
miR-508-5p慢病毒过表达载体构建及对MAPK1/ERK信号通路靶向抑制作用的研究
2014年
目的:构建能高效表达成熟miR-508-5p小分子的慢病毒过表达载体,研究其对MAPK1/ERK信号通路靶向调控作用。方法:利用化学合成miR-508-5p茎环结构RNA,并将其克隆入线性化的pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定;同时构建与miR-508-5p互补靶基因MAPK1的3'非翻译区,将其克隆入线性化的Report载体中。利用脂质体转染试剂将鉴定阳性的pSicoR-miR-508-5p重组质粒转染HEK-293T细胞,进一步通过Relative luciferase activity、Western blot及real-time PCR试验检测MAPK1蛋白和mRNA相对表达水平。结果:酶切及测序结果证明成功构建pSicoR-miR-508-5p及Report-MAPK1 3'-UTR重组质粒,并通过实验证实miR-508-5p过表达明显抑制MAPK1的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05);抑制miR-508-5p的表达,又明显上调MAPK1的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05)。结论:成功构建pSicoR-miR-508-5p慢病毒过表达载体,证实miR-508-5p直接靶标MAPK1的表达,在转录后水平对其进行负调控,为进一步研究miRNA对细胞通路和细胞周期的调控作用奠定了基础。
白静范维宁邢译文张涛周林林徐广贤
miR-638慢病毒载体的构建及其对MAPK14的靶向调控作用被引量：13
2014年
目的构建miR-638慢病毒过表达载体,探讨其对MAPK14基因的靶向调控作用。方法分别构建pSicoR-miR-638及pMIR-Report-MAPK14过表达载体,应用双荧光素酶报告基因活性、Western blot及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法验证miR-638与MAPK14的靶向调控关系。结果经PCR、酶切及测序结果证明成功构建了pSicoR-miR-638及pMIR-ReportMAPK14重组质粒,并通过实验证实miR-638过表达明能显抑制MAPK14的蛋白及mRNA表达(P<0.05);抑制miR-638的表达,则MAPK14蛋白及mRNA的表达水平明显上调(P<0.05)。结论成功构建pSicoR-miR-638慢病毒载体,并证实其可通过靶向作用于MAPK14-3’UTR的特异序列而直接抑制MAPK14基因的表达。
邢译文刘鑫周林林白静范维宁徐广贤
关键词：MICRORNA
pSicoR/miR-17-5p靶向调控UNC-51样激酶1(ULK1)及其对细胞自噬的影响被引量：4
2014年
目的为了探讨miR-17-5p对自噬相关基因ULK1的调控作用及其对细胞自噬的影响,为更深入研究miR-17-5p调控细胞自噬机制建立理论依据。方法构建p Sico R-miR-17-5p过表达重组质粒,包装miR-17-5p过表达慢病毒,构建ULK1及其突变体ULK1-mut的pmiR-report载体,通过双荧光素酶报告系统验证miR-17-5p对ULK1的靶向关系,利用Western blot检测ULK1与LC3B蛋白的表达量。结果成功构建p Sico R-miR-17-5p过表达重组质粒并且成功将ULK1及其突变体ULK1-mut的3′-UTR插入到pmiR-report载体中;双荧光素酶报告系统结果表明转染miR-17-5p及ULK1-3′-UTR,miR-17-5p过表达组相比对照组相对荧光强度降低1.9倍(P<0.05),说明miR-17-5p对ULK1的表达有抑制作用,而转染miR-17-5p及mut-ULK1-3′-UTR之后检测显示相对荧光强度并没有降低,说明miR-17-5p是靶向作用于ULK1,并对其进行负调控;Western blot显示miR-17-5p抑制ULK1蛋白的表达,并且抑制LC3II/I蛋白的表达。结论 miR-17-5p直接靶向作用于自噬相关基因ULK1,并且对其负调控,抑制细胞自噬的发生。
汤建中张涛丁淑琴张爱君刘学英徐广贤
关键词：细胞自噬
强直性脊柱炎患者外周血中miR-17、miR-181、miR-106、miR-30和miR-495表达的分析被引量：14
2014年
目的:为了探讨microRNA在强直性脊柱炎患者发病过程中的作用,我们通过检测强直性脊柱炎患者外周血液中miR-17、miR-181、miR-106、miR-30和miR-495的表达情况,从而为研究microRNA在强直性脊柱炎发病机制中的调控作用和临床诊断价值提供新的思路。方法:收集强直性脊柱炎患者及正常人的外周血液,对外周血液中单个核细胞进行分离,并提取PBMC small RNA,用特异性茎环引物反转录成cDNA,并构建成熟的miR-17、miR-181、miR-106、miR-30和miR-495的T载体,制作标准曲线,利用stem-loop法通过Real-time PCR技术,检测miR-17、miR-181、miR-106、miR-30和miR-495的表达量。结果:本实验共收集临床样本92例,其中AS患者61例,正常人31例。通过Real-time PCR检测发现,与正常人相比,在强直性脊柱炎患者外周血中表达上调的有miR-106(P>0.05)与miR-30(P>0.05);表达下调的有miR-181(P<0.05)、miR-495(P<0.05)和miR-17(P>0.05),其中miR-181和miR-495有统计学意义。结论:与正常人相比在强直性脊柱炎患者外周血中miR-181和miR-495的表达量存在差异,它们可以靶向调控TLR-4,HLA-B,DVL和GSK/3β等基因,这一发现可能为强直性脊柱炎发病机制的研究提供新的思路,成为临床诊断中新的标志物。
刘鑫魏军杨芝红周林林郑锡铭徐广贤
关键词：MIRNA强直性脊柱炎REAL-TIMEPCR
雷帕霉素对RAW264.7巨噬细胞10种与细胞自噬相关的miRNAs表达的影响被引量：3
2014年
目的:为了探讨雷帕霉素对RAW264.7细胞miR-30b、miR-200a和miR-17-5p等10种与细胞自噬相关的miRNAs表达水平的影响,为进一步研究miRNAs调控细胞自噬的机制提供理论依据。方法:雷帕霉素刺激RAW264.7巨噬细胞后,分别在2、4、6、8 h提取细胞small RNA,利用miRNA特异性的茎环引物反转录成cDNA,采用Real-Time PCR检测miR-30b、miR-30c、miR-106a、miR-214、miR-183、miR-200a、miR-376c、miR-17-5p、miR-142-3p、miR-377分子的表达情况。结果:雷帕霉素作用RAW264.7细胞后,miR-17-5p、miR-106在2、4、6 h表达上调(大于2.1倍P<0.05),miR-214在2、8小时表达上调(>2.4倍,P<0.05),miR-30b、miR-30c、miR-183、miR-200a、miR-376c、miR-142-3p在2、6、8 h表达上调(>2.4倍,P<0.05),而miR-183、miR-200a在4 h表达下调(>2.1倍,P<0.05),miR-30b在8小时则是显著性表达下调(大于50倍,P<0.05),miR-377在4 h则是表达上调(>2.5倍,P<0.05),但在2、8 h则是显著表达下调(>50倍,P<0.05)。结论:雷帕霉素刺激RAW264.7巨噬细胞后miR-200a、miR-30b、miR-377、miR-30c、miR-376c、miR-17-5p有显著性变化,说明这些miRNAs可能通过调控某些自噬相关基因在细胞自噬过程中发挥着重要作用。
张涛郑锡铭周林林刘鑫赵瑾徐广贤
关键词：MIRNA雷帕霉素REAL-TIME
结核分枝杆菌优势蛋白ppe37的表达纯化以及对巨噬细胞NF-κB、TNF-α、IL-6 mRNA表达的影响被引量：1
2013年
目的研究在结核分枝杆菌感染过程中,ppe37蛋白引起的巨噬细胞免疫应答反应。方法利用本实验室已构建好的ppe37原核表达载体,将其转化到大肠杆菌E.coli BL21中,用IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE与Western blot鉴定后,利用Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒对重组蛋白进行纯化并复性。利用SDS-PAGE和AlpHaImager 2200软件对纯化蛋白进行鉴定与分析。分别用浓度为100ng/mL、500ng/mL、5 000ng/mL的重组ppe37蛋白刺激RAW264.7巨噬细胞,24h、48h、72h后,用Real-time PCR检测RAW264.7巨噬细胞NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA的表达量的变化。结果 SDSPAGE鉴定显示,重组ppe37蛋白获得了大量表达,其相对分子质量约为50kDa。经Western Blot验证,重组ppe37蛋白可与抗His单抗发生特异性反应,经AlpHaImager 2200软件薄层扫描分析,重组蛋白的纯度为96.2%,并成功的进行了蛋白复性。浓度分别为100ng/mL,500ng/mL,5 000ng/mL的重组ppe37蛋白刺激巨噬细胞,24h后Real-Time PCR检测结果显示与空白对照组相比NF-κB、TNF-αmRNA的表达没有影响(P>0.05),而IL-6mRNA的表达上调(P<0.05);48h、72h后NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA的表达显著上调(P<0.05)。结论成功地制备并纯化了重组ppe37蛋白,重组ppe37蛋白能够活化巨噬细胞,激活细胞免疫反应,并促使巨噬细胞发生炎性反应。
张瑞芹汤建中赵志军贾伟魏军张一琳张兆波徐广贤
关键词：结核分枝杆菌
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