河南省高校杰出科研人才创新工程基金(2006KYCX006)
- 作品数：5 被引量：12H指数：3
- 相关作者：田力李继昌赵国强袁建军陈奎生更多>>
- 相关机构：郑州大学郑州大学第一附属医院河南中医学院第三附属医院更多>>
- 发文基金：河南省高校杰出科研人才创新工程基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基质金属蛋白酶抑制因子-1小干扰RNA载体构建及对肝星状细胞沉默效应的研究被引量：3
- 2007年
- 目的构建TIMP-1小干扰RNA（siRNA）真核表达载体并观察其对肝星状细胞株TIMP-1mRNA表达的作用。方法根据siRNA设计原则，在TIMP-1mRNA序列中选择2个特异性靶序列（447-465nt、552～540nt）及1条无关对照序列;体外合成对应发卡样DNA片段，将其克隆入pGEM-T连接载体，BamH1和Xho1分别双酶切pGEM-T及表达载体pRNAT-U6．2，胶回收粘末端将特异序列定向亚克隆构建TIMP-1 pRNAT-U6．2／SiRNA载体，用脂质体包裹转染入T6细胞，采用RT-PCR检测TIMP-1mRNA表达水平的变化。结果所构建的TIMP-1pRNAT-U6．2／siRNA载体，经酶切鉴定与测序，结果显示特定位点靶序列与设计序列完全一致；转染T6细胞后，TIMP-1mRNA表达明显降低。结论成功构建TIMP-1 siRNA载体TIMP-1 pRNAT-U6．2／siRNA，转染T6细胞可以有效抑制TIMP-1mRNA的表达。
- 田力李继昌赵国强陈奎生樊文辉娄新孙森森曹学全
- 关键词：基质金属蛋白酶抑制因子1RNA干扰
- 基质金属蛋白酶抑制因子-1小干扰RNA慢病毒表达载体的构建与鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的:构建基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)小干扰RNA慢病毒表达载体并转染肝星形细胞T6观测其转染效率及对TIMP-1mRNA的沉默效应。方法:用PCR扩增在线确定的TIMP-1特异性小干扰RNA序列,与T载体连接,用BamHI和XhoI分别双酶切并将其粘末端亚克隆入pRNAT-U6.2,用pR-NAT-U6.2的插入鉴定引物进行PCR鉴定并测序;包装产生TIMP-1pRNAT-U6.2/lentisiRNA的慢病毒表达载体,将其转染T6细胞,荧光照相及FQ-PCR检测转染效果及TIMP-1mRNA表达。结果:TIMP-1pRNAT-U6.2/LentisiRNA慢病毒表达载体可显著抑制T6TIMP-1mRNA表达。结论:成功构建能高效转染真核细胞的TIMP-1pRNAT-U6.2/LentisiRNA病毒表达载体,为进一步研究其在体抑制TIMP-1mRNA表达提供了实验工具。
- 郑玉玲田力
- 关键词：基质金属蛋白酶抑制因子-1小干扰RNA
- 超声辐照携TIMP-1 siRNA微泡对大鼠肝纤维化的影响被引量：3
- 2007年
- 目的探讨携TIMP-1siRNA的造影剂微泡在超声辐照条件下对肝纤维化大鼠组织学改变的影响。方法二甲基亚硝胺建立肝纤维化模型,6周后分组并静脉质粒注射,2天后观察肝、肾、肺、脑、心肌组织内基因荧光表达;12天后检测肝组织内TIMP-1mRNA、蛋白表达及胶原纤维变化。结果2天后,超声照射微泡组基因荧光表达明显增强,较其他组织差异显著,P<0.001;12天后,其TIMP-1mRNA及蛋白表达、胶原含量均较单质粒组及对照组减低,P<0.001。结论超声辐照携TIMP-1siRNA超声微泡有将目的基因定位释放作用,TIMP-1siRNA转染肝纤维化大鼠可改善肝纤维化结构,为肝纤维化的基因治疗提供了新的思路及方法。
- 田力李继昌赵国强袁建军陈奎生蔡庆春
- 关键词：超声造影剂超声照射肝纤维化基质金属蛋白酶抑制因子-1
- 超声微泡联合超声辐射介导基质金属蛋白酶抑制因子-1 siRNA抗大鼠肝纤维化的作用被引量：4
- 2007年
- 基质金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）对MMPs的抑制是导致ECM在肝纤维化过程中过度沉积的关键，理论上抑制TIMP-1基因在肝组织中表达有利于MMPs降解过度沉积的胶原及防止肝窦毛细血管化。我们用RNA干扰（RNAi）技术构建了定点干扰TIMP-1表达的pRNAT-U6．2／Lenti siRNA病毒表达载体，体外实验证明该载体抑制TIMP-1表达的效果显著。为使目的基因在肝组织中释放而不影响其他器官TIMP1基因的正常表达，我们用超声造影剂微泡混合TIMP-1 siRNA表达载体，同时超声辐照大鼠肝脏，观察该方法定位释放靶基因到靶器官的有效性。
- 田力赵国强袁建军李继昌陈奎生蔡庆春
- 关键词：因子-1超声微泡超声辐照
