教育部科学技术研究重点项目(208070)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：南昌大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目江西省教育厅科学技术研究项目国家自然科学基金更多>>
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- 类泛素蛋白FAT10与肝细胞癌
- 2008年
- 泛素／类泛素系统是体内细胞蛋白降解的一个重要途径，大量研究表明该系统功能失调将导致癌基因和抑癌基因表达的异常，在肿瘤的发生发展中起重要作用。FAT10是近年发现的类泛素蛋白家族成员，FAT10在肝细胞癌等恶性肿瘤中表达水平异常增高，很有可能成为一个新的肝细胞癌形成前标记物。
- 刘天德余新邵江华
- 关键词：肝肿瘤泛素FAT10
- 酵母双杂交技术鉴定FAT10新的结合蛋白:eEF1A1被引量：2
- 2012年
- 目的:利用酵母双杂交技术筛选类泛素蛋白FAT10(HLA-F adjacent transcript 10)在肝癌细胞Hep3B中相互作用的蛋白,为探讨FAT10蛋白在肝癌发生中的作用机制提供依据。方法:利用Clontech GAL4酵母双杂交系统筛选人肝癌细胞系Hep3B的cDNA文库,以获得与FAT10相互作用的蛋白分子;通过回交实验、免疫共沉淀和激光共聚焦细胞内共定位实验验证两者之间的相互作用;通过RNA干扰降低FAT10表达观察真核翻译延伸因子1α1(eEF1A1)的表达情况。结果:酵母双杂交筛选得到相互作用蛋白eEF1A1,激光共聚焦细胞内共定位确定FAT10和eEF1A1均位于细胞质内,存在共定位;回交实验和免疫共沉淀实验再次确认eEF1A1能够与FAT10相互作用;FAT10表达降低伴随着eEF1A1的表达下调。结论:FAT10能够与eEF1A1相互作用;FAT10可能通过eEF1A1来实现其部分功能。
- 余新刘天德袁荣发王庆诺李国惠邵江华
- 关键词：RNA干扰
- siRNA对肝癌细胞异常表达FAT10基因的抑制效应研究被引量：5
- 2009年
- 目的:探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对原发性肝癌(肝癌)细胞中异常表达的类泛素蛋白FAT10的抑制作用,研究其对肝癌细胞生长的影响。方法:针对FAT10基因设计4条siRNA序列,并转染至人肝癌细胞株Hep3B细胞,通过实时荧光定量PCR检测siRNA对FAT10基因表达的影响,使用四甲基偶氮唑蓝法检测siRNA对Hep3B细胞生长情况的影响,采用流式细胞术分析siRNA对Hep3B细胞周期变化的影响。结果:Hep3B细胞转染siRNA后,FAT10 mRNA表达降低,Hep3B细胞的生长受到了明显的抑制,其生长主要停滞在G0/G1期,而S期和G2/M期细胞所占比例下降。结论:siRNA可抑制Hep3B细胞FAT10基因的表达,并抑制Hep3B细胞的生长。FAT10基因可能是调控肝癌基因表达的新的靶基因。
- 刘天德余新洪波邵江华
- 关键词：原发性肝细胞
- FAT10真核质粒的构建、转染及其蛋白的表达
- 2010年
- 目的构建类泛素基因FAT10的真核表达质粒,观察其蛋白在转染人胚肾细胞系293T中的表达。方法采用RT-PCR法扩增FAT10全长基因片段后,克隆至pMD18-T载体进行测序分析,将FAT10克隆至pcDNA5-FRT表达载体并行酶切鉴定;用脂质体LipofectamineTM2000分别介导空质粒(空载组)及重组质粒(FAT10质粒组)转染293T细胞,以脂质体混合PBS(PBS组)及未加入脂质体(未转染组)作为对照。转染48 h后,收集细胞。采用Western blot法检测293T细胞中的FAT10蛋白。结果 pMD18-FAT10重组质粒经双酶切获得498 bp片段,对PCR产物及498 bp片段进行测序,结果与GenBank报道序列完全一致。FAT10质粒组、未转染组、空载体组和PBS组FAT10蛋白表达量分别为1.556±0.072、0.334±0.051、0.425±0.095、0.382±0.063,FAT10质粒组与未转染组、空载体组和PBS组比较,P均<0.05。结论成功构建了FAT10的真核表达质粒pcDNA5-FRT-FAT10,FAT10蛋白在293T细胞中高表达。
- 余新刘天德洪波李国惠邵江华
- 关键词：基因转染
